Posted in: Разное

Мерс 120: Доступ с вашего IP-адреса временно ограничен — Авито

Содержание

Двигатель M120 Mercedes-Benz: описание и характеристики

ЛюбительНедавно обзавелся данным аппаратом M120. неспешно восстанавливаю его, есть такие вопросы/проблемы: -двигатель на холостых оборотах в положении N работает нормально, а при перемещении рычага АКПП в положении R или D — глохнет еще до начала движения -если смотреть на двигатель спереди, то в левой части с краю блока коллекторов имеется некая черная крышечка и из нее выходит короткая трубочка (похожа на вентиляцию картера или рециркуляцию выхлопных газов), которая ни к чему не присоединена и из которой идут газы, на холостых — меньше, при нажатии на педаль-больше. Куда она должна быть присоединена? -нормальным ли является небольшой выход картерных газов при открытии маслозаливной крышки? — где и как штатно должны быть закреплены катушки зажигания? У меня они находятся на весу, обмотанные против сырости пленкой — каково нормальное давление масла на холостых оборотах? Сейчас на прогретом моторе стрелка показывает около 0. 5, при подаче оборотов возрастает… Насколько я понимаю лампы критически низкого давления масла нет, есть только лампа низкого уровня масла в картере? Масло синтетическое Shell 5W40 (серая канистра).
Мастер ШтутгартСними почисть дроссельные для профилактики
ЛегендаК сожаления 6литровый мотор считатеся ненадежным, почемуто он в разряд «миллиоников» не попадает. Те надо обязательно обзавестись 2 программами, это ЕПЦ и ВИС. 
РобаВот с этим не соглашусь! Ресурс у него зачастую больше чем у 119-го. Он по электрике сложнее (вернее электро-узлов больше), которая чаще хромает чем у 119-го.
ЛёвкаПосле 2-недельного простоя видел немного (совсем немного) светлого налета на маслозаливной пробке. Это конденсат или все-таки — здравствуй замена прокладки и шлифовка ГБЦ?
ЛюбительНа щупе никакого «майонеза» или посветления цвета масла нет, так что опка похоже на конденсат, места для образования которого в 6л движке хоть отбавляй.
..Сегодня почему-то отказался заводиться. Все лампочки горят, бензонасос работает судя по звуку, а стартер не крутит. Буду копать в сторону втягивающего реле стартера, либо банально батарейка в иммобилайзере…
БывалыйИ у меня перестал крутиться стартер, хотя щелчки реле под капотом есть. Добрался снизу до стартера, обнаружил что соскочила клемма с втягивающего реле. Поставил на место — заработал
АланИмею CL600 97года,взял машину недавно и с тех пор пытаюсь понять как должен работать м120.Сразу после покупки продиагностировал машину Старухой показало ошибки расходомера и пропуски зажигания.Один расходомер заменил и оказалось рванный патрубок от расходомера к дросселю тоже заменил.Поставил новые подушки двигателя.Машина наконец то поехала,на крыльях счастья ездил неделю,но потом показалось что как то для с600 двигатель работает уж очень нестабильно,сравнив со своим намного более грубым в моем понимании Геликом g500(113 двигатель) я реально осознал что мой 6.
0 работает как то странно. Ощущение такое что какие то мелкие пропуски зажигания или подсос воздуха.Все же решил начать с других вещей.
Проверил компрессию в двигателе все ок. Выкрутил свечи были в перемешку Беру и Чемпион,2 свечки были конченые я обрадовался поехал купил обычный Беру вкрутил стало еще хуже.Двигатель стал работать еще более нестабильно,оказалось мне продали свечи для старых некатушечных моторов,злой как собака поехал купил свечи БОШ платинум с зазором в 0,8мм,вкрутил стало как было на свечах в перемешку.Расстроившись поехал за 2 месяца владения в 7 раз к диагносту,проверили машину старухой никаких ошибок притом что сам электрик тоже говорит что двигатель работает неочень на холостом,самое интересное что прет машина ну очень хорошо,то есть даже на драйве колбасня двигателя почти неощутима.В добавок скажу что двигатель очень ухоженный,снимал поддон чтобы посмотреть на маслонасос и на срач в поддоне,оказалось девственно чистый двигатель.И поддон чистый был. Короче после очередной диагностики пришел в замешательство и стал думать что может быть???
Возможно Я1 подушки Гов. …о или их как то перезатянули 2 где то очень слабо подсасывает воздух 3 свечи оказались фиговыми 4 форсунки засранны.
ПаулюсЯ тоже собираюсь менять подушки но даже с вытекшими подушками мотор работает идеально. Кто тебе так просто ответит? Какой пробег и расход топлива? Если думать логически получается до тебя с мотором были проблемы раз заменили две свечи, если помнишь на каких цилинадрах попробуй проверить еще раз. Может быть на самом деле форсунки!? Такое же впечатление что подсасывает воздух только с водительской стороны под воздухозаборником
Алан10свечек были свежими зря их вообще менял чемпион,две последних со стороны пассажира почему то были старые беру со сгоревшими в конец электродами.Я по глупости хотел как лучше и поменял все свечи но ничего не изменилось.Я просто прошу совета где мне искать хоть приблизительно. У самого руки рабочие половину всего во всех своих машинах делал сам и в принципе даже м120 небоюсь просто хочется докопаться до истины!
Человек-Легендау тебя или паранойя (тогда она и у диагноста), или проблема реально вне свечей и подушек. т.е. катушки, наконечники, форсунки, датчики детонации (вряд ли). подсосы и расходомер исключаем, т.к. от них вибрации не будет.
Аланнаконечники это что на свечку одевается?я думал что на 140 катушка неразборная…если бы были катушки то Стар диагностика показала бы наверное?буквально вчера продиагностил ошибок нет!
Человек-Легенданаконечники — между катушкой и свечой
Магичнадо менять ВСЕ без исключения наконечники. На них могут быть микротрещины, через которые идёт пробой. У меня была аналогичная ситуация с бумером, два месяца трахался, думал уже комп барахлит, ну ни как не верилось что такое из за этих резинок может быть. Поменял все и проблема исчезла.
Бывает, что выкрутили свечки для замены/проверки компрессии/ещё чего нить и от старости незаметно потрескались насвечники. При этом начинается кипишь, мол, раньше то всё работало «ровно»
АлексСкориковБыла такая тема на одной тачке, как у тебя, сначала сделали диагностику старом, ни чего, решили наконечники на катушках, был новый комплект, заменили, все равно подрагивает мотор, проверили катушки контрольной свечей(контрольная свеча- откусываешь боковой электрод, а к нижней части резьбы где уплотнительное кольцо, припаиваешь кусок провода мм500, любой с автомобильной проводки, а к другому концу провода, припаиваешь не большой зажим, собачку, чтобы контакт с массой был надежным-контрольная свеча готова), свечу вставляешь в катушку а провод от свечи зажимом к надежной массе, пускаешь мотор, предварительно отключить бензонасос, либо предохранитель, либо реле вытащить, чтоб форсунки не смыли масло с цилиндров, и смотришь на мощность искры, если между центральным электродом и свечей проскакивает дуга синего цвета, катушка отличная, если ее нет вообще или цвет искры красно-желтый, катушка не годная , ну во общем обычная процедура проверки катушек.
Так вот на той тачке оказалось расехранизация дроссельных заслонок, подключили стар, сбросили все адаптации и запустили обучение дроссельной заслонки, вторая заслонка обучается синхронно, тачка заработала исключительно, не смотря на то что никаких ошибок стар диагноз не выдавал,вот такая задница была. Как вычислили, случайно, не понравилось адаптация сгорания смеси, между левой и правой стороной двигателя, вот такое было. Извени что загрузил, но может с диагностом поговорить, пусть повнимательней посмотрит по компу, да и визуально, нет ли подсоса воздуха под впускным коллектором, можно пролить не большое количество бензина на то место где подозрительное шипение- обороты поднимутся значит есть подсос, можно лаком бесцветным задуть с баллона на то место- двигатель сразу ровнее станет работать, форсунки промыть, только промывку растянуть на часа 4-5, чтоб откисло получше, только все это нужно сделать последовательно и грамотно.

Мерседес Атего 1224 автопоезд 120 м3, не попадает под ПЛАТОН!, фактическая г/п 13 т

Цену уточняйте

Нет в наличииКод: 4860

Написать

Мерседес Атего 1224 автопоезд 120 м3, не попадает под ПЛАТОН!, фактическая г/п 13 т Нет в наличии

  • +7 показать номер +74957733366 многоканальный
  • +79261328208 есть WhatsApp, Viber, Telegram
  • +7 показать номер +74957733366 многоканальный
  • +79261328208 есть WhatsApp, Viber, Telegram
  • График работы
  • Контакты
  • Mercedes Atego 1224 + прицеп, 120 кубов, фактическая г/п 13т, не попадает под ПЛАТОН

     

    Обращаем ваше внимание на то, что данный грузовой автомобиль не имеет пробега по России и странам СНГ. Про несомненные преимущества грузовиков без пробега по РФ можно прочитать тут.

    Автопоезд 120м3. Разрешенная максимальная масса грузовика Mercedes меньше 12 тонн. ПЛАТОНу платить не нужно! Свободный въезд в Москву в любое время! Суммарная фактическая г/п 13 тонн!

     

    Основная информация по грузовику:

    Предлагаем прямую поставку от собственника в Европе, без посредников.

    Указана цена с учетом доставки до Москвы, включая все таможенные платежи и утилизационный сбор, у транспортных средств будут российские таможенные ПТС, терминал ЭРА-ГЛОНАСС будет установлен.

    Mercedes-Benz Atego 1224L

    ― 2013 год 
    ― сделан в Германии 
    ― оригинальный пробег 315 тыс.км
    ― без пробега по России и СНГ 

     

    Порядок и сроки поставки:

    ― поставка осуществляется по договору, за счет нашей компании, полная оплата вперед не требуется
    ― подписание договора возможно при личной встрече в нашем офисе или дистанционно, по электронной почте
    ― вы получите гарантию на основные узлы и агрегаты агрегаты автомобиля, а также 100% гарантии юридической чистоты
    ― срок поставки до Москвы — 2-3 недели

     

    Двигатель, КПП:

    ― 6-ти цилиндровый, 6374 см3, 240 л. с., Евро-5
    ― механическая 6-ти ступенчатая КПП

     

    Шасси, резина:

    ― фактическая грузоподъемность до 6т
    ― полная масса по паспорту — 11990 кг (не попадает под ПЛАТОН, свободный въезд в Москву в любое время)
    ― отличная резина 265/70 R19.5, есть запаска
            

    Тормозная система и ходовая:

    ― пневмоподвеска
    ― блокировка дифференциала
    ― тормозная система с ABS (антиблокировочная система), ASR (антипробуксовочная система), ESP (система контроля курсовой устойчивости)
    ― дисковые тормоза
    ― горный тормоз

     

    Навесное оборудование:

    ― солнцезащитный козырек
    ― фаркоп
    ― спойлер
    ― воздушный сигнал

     

    Кузов:

    ― полная штора, все виды загрузок 
    ― внутренние размеры — 7800 х 2480 х 3000 мм 
    ― алюминиевые ворота

     

    Комплектация:

    ― высокая кабина с двумя спальными местами 
    ― кондиционер 
    ― автономный отопитель салона 
    ― комфортабельное пневмосидение водителя 
    ― электрозеркала заднего вида с подогревом 
    ― электростеклоподъемники 
    ― круиз-контроль 
    ― мультифункциональное рулевое колесо
    ― бортовой компьютер 
    ― мультируль 
    ― магнитола 
    ― люк 
    ― рация
    ― тахограф и мн. другое 

     

    Основная информация по прицепу:

    ― 2013г 
    ― грузоподъемность до 7т 
    ― 235/75 R17.5, есть запаска 
    ― пневмоподвеска 
    ― ABS, ESP 
    ― оси BPW (Германия)
    ― штора, все виды загрузок 
    ― 7800 х 2480 х 3100мм, ворота 

    С прицепом ― сцепка 120 кубов, 38 европалет.

     

    Техническое состояние и информация об условиях эксплуатации:

    ― один владелец, обслуживались по регламенту в дилерском центре Mercedes, сервисная книга, вложений не требует
    ― автомобиль с положительной историей, в наличии имеется оригинальная сервисная книга с отметками
    ― идеальное техническое состояние и внешний вид 

     

    Порядок оплаты и оформления:

    ― нал/безнал расчет, выделяем НДС
    ― принимаем вашу грузовую технику в качестве частичной и полной оплаты (трейд-ин грузовиков)
    ― вы можете купить этот грузовик в лизинг/кредит
    ― цена за безналичный расчет может отличаться от указанной

    Возможна доставка в любой регион России и СНГ.

    Подберем бесплатно и поставим из Германии и других европейских стран грузовую технику под ваши задачи и бюджет! 

    За 5 лет работы мы успешно доставили сотни единиц грузовой техники под заказ для клиентов по всей России!

    Цена — 87 000 €. Оплата в рублях, либо иной валюте по курсу на день платежа.

    Арт. 4860

    Объёмы заправки кондиционера Мерседес по таблице норм

    Модель — klasse, год выпуска и объём двигателя Мерседес Количество фреона марки R-134a в граммах — килограммах Тип и кол-во масла для компрессора в миллилитрах + вязкость PAG PAO 68 или PAG ISO 46
    A — класс (W168) 1998 — 05 0.600 100
    A (W169) 150 — 170 — 200 — 160CDI — 180CDI 09.04 — 11 0.770 120
    A (W169) 200CDI — 200turbo 09. 04 — 11 0.840 120
    A (176) 06.2012- 0.650 120
    B — класс (W245) 150 — 200 — 180CDI — 170 2005 — 11 0.770 120
    B (W245) 200 turbo — 200CDI 2005 — 11 0.840 120
    B (246) 11.2011 — 0.650 120
    C — класс (W203) 05.00 — 04.04 0.700 — 0.750 120
    C (W203) Facelift 04.04 — 07 0.850 120
    C (204) 2007 — 09.14 0.590 120
    C (205) 09.2014 — 0.620 80
    C (205) 09.2014 — код ME 04 (mild Hybrid) 0.710 120
    C (205) 09.2014 — код ME 06 (Hybrid 50 KW) 0.670 120
    CL (216) 2010 — 1070 110
    CLC (203) 2008 — 0. 850 135
    CLK (C208) 1997 — 02 0.850 120
    CLK (C209) 06.02 — 09 0.750 120
    CLS (C219) 2005 — 0.950 120
    CLS (218) 2011 — 0.590 120
    E — класс (W210) 1995 — 02 1000 120
    E (W211) 03.02 — 09 0.950 120
    E (W212) 2009 — 0.590 120
    E (W212) 6,3 E63 AMG 2009 — 0.640 120
    E (207) купе/кабриолет 2009 — 0.590 120
    G — класс (W461) 1993 — 2005 1100 170
    G (W461) 1993 — 2005 компрессор 7SB16 1100 120
    G (W463) 1993 — 2005 1050 120
    G (463. 322 — 323) 270CDI 2001 — 05 1070 170
    GL — класс (X164) 2006 — 0.970 110
    GL — класс (X164) 2006 — со вторым контуром 1220 110
    GLA (156) 12.2013 — 0.660 110
    GLK (X204) компрессор Denso 6SEU16 2008 — 0.590 120
    M-класс (W163) 03.98-05 0.750 175
    M (W164) 07.05 — 0.970 110
    M (W164) с двойным контуром 2006 — 1220 110
    M (166) 06.2011 — 1050 120
    M (166) с задним конд-ром 06.2011 — 1300 160
    R-класс (W251 — V251) 2006 — 0.970 110
    R (W251 — V251) 2006 — с конд. сзади 2006 — 1220 110
    S-класс (W220) 10.98 — 06 0.950 120
    S (W220) 10.98 — 06 с задним контуром 1050 120
    S Coupe Купе (C215) CL500 — 600 2002 — 07 0.950 120
    S (W221) 2006 — 13 1070 110
    S (W221) 2006 — 13 с доп — обдувом 1180 120
    S (222) 2013 — 0.660 120
    S (222) 2013 — со вторым контуром 0.770 130
    S (222) гибрид 20KW 2013 — 0.770 120
    S (222) гибрид 20KW 2013 — с двойным контуром 0.870 130
    S (222) гибрид 85KW 2013 — 0.710 120
    S (222) гибрид 85KW 2013 — с доп обдувом  сзади 0. 820 130
    SLK (R170) 1996 — 04 0.850 120
    SLK (R171) 2004 — 11 0.670 120
    SLK (172) 2011 — 0.550 120
    SL (R129) 1991 — 02 0.950 150
    SL (R230) 10.01 — 11 0.920 120
    SL (231) 01.2012 — 0.550 120
    Sprinter Спринтер 01.95 — 05 0.860 120
    Sprinter Спринтер 01.95 — 05 с задним контуром (HH7) 1300 175
    Sprinter Спринтер (906) 2006 — 0.800 190
    Sprinter Спринтер (906)  (HH7) 2006 — с дополнительным кондиционером 1190 190
    Sprinter Спринтер (906) (H08) 2006 — 1000 160
    Vaneo Ванео (414) 2002 — 06 0. 600 100
    Vito Вито (638) — V-класс (638 — 2), компрессор Denso 7SB16 02.96 — 03 0.850 175
    Vito Вито (638) — V-класс (638 — 2), компрессор Denso 7SB16 02.96 — 03 Denso 7SB16 с с доп — конд. 1100 175
    Vito Вито (638) — V-класс (638 — 2), компрессор Denso 10PA17C 02.96 — 03 0.920 120
    Vito Вито (638) — V-класс (638 — 2), компрессор Sanden SD7V16 02.96 — 03 0.850 135
    Vito Вито — Viano Виано (W639) 2003 — 12 0.550 190
    Vito Вито — Viano Виано (W639) кондиционер сзади 2003 -12 0.840 190
    Vito Вито — Viano Виано (W639) 2003 — 12 длинная база, с доп — конд. 0.870 190

    Регламент ТО Мерседес

    Регламент ТО Мерседес включает в себя основные положения касающиеся, планового сервисного обслуживания, диагностики, замены расходников и технологических жидкостей. Только соответствуя всем требования и рекомендациям обслуживания можно добиться исправной работы автомобиля.

    ВАЖНО! Все полноценное техническое обслуживание Мерседес основывается на РЕГЛАМЕНТЕ!

    Классическое и основное требование — проведение ТО своевременно, с интервалами не более 10 000 км (для дизельных двигателей) и 15 000 км (для бензиновых моторов) или 1 раз в год.

    Особую роль в определении объема, предстоящего ТО играет сервисная система ASSYST PLUS, которая постоянно отслеживает состояние автомобиля, анализирует множество факторов и информирует о приближающемся техническом обслуживании. Благодаря ее хитрому алгоритму владельцу автомобиля будет предложен тот перечень сервисных работ, который необходим для поддержания исправного состояния автомобиля, ведь эта система учитывает даже характер эксплуатации.

    Ниже приведем базовый перечень сервисных работ, которые указаны в регламенте обслуживания для автомобилей марки Мерседес:

    Плановые проверки

    • Проверка уровня в моторе
    • Проверка уровня масла в АКПП
    • Проверка уровня жидкости тормозной
    • Проверка давления в шинах
    • Проверка поворотников, фар и стоп-сигналов
    • Сезонная проверка балансировки колес
    • Проверка сход-развала

    Каждые 15 000 км / 10 000 км для дизелей

    Каждые 60 000 км

    Каждые 2 года

    Дополнительные проверки

    • системы охлаждения
    • тормозной системы
    • системы ГУР
    • ходовой и рулевой системы
    • дисков и шин

    За более детальной информацией необходимо обращаться к специализированному программному обеспечению WIS.

    На обслуживаемом автомобиле, из системы ASSYST, считывается сервисный КОД ТО. Полученная информация заносится в ПО, которое после анализа введенных данных выдает итоговый перечень работ.

    Специальное драже Мерц Классик 120 шт.

    Мультикомплекс для кожи, волос, ногтей и всего организма.
    Рекомендуется в качестве биологически активной добавки к пище, дополнительного источника витаминов группы В, витаминов С, А, Е, биотина, железа и цинка.

    Витаминно-минеральный комплекс, действие которого обусловлено свойствами веществ, входящих в состав продукта.
    Ретинол (витамин А) поддерживает целостность эпителиальных клеток, улучшает кровоснабжение кожи, восстанавливает ее упругость и эластичность.
    Токоферол (витамин Е) участвует в процессах тканевого дыхания, обладает антиоксидантным действием.
    Аскорбиновая кислота (витамин С) — природный антиоксидант, необходим для синтеза коллагена — основного строительного белка кожи, который отвечает за упругость и эластичность кожи, полноценную работу иммунной системы, всасывание железа.
    Тиамин (витамин В1) играет ведущую роль в углеводном обмене, необходим для восстановления естественного блеска и придания гладкости волосам. Рибофлавин (витамин В2) — важнейший катализатор процессов клеточного дыхания, способствует активации кровообращения и росту волос.
    Пантотеновая кислота (витамин В5) усиливает водный обмен клеток кожи.
    Пиридоксин (витамин В6) принимает участие в белковом обмене, способствует росту и укреплению волос.
    Цианокобаламин (витамин В12) необходим для нормального кроветворения, способствует росту волос.
    Никотинамид (витамин В3) участвует в процессах тканевого дыхания, жирового и углеводного обмена, улучшает микроциркуляцию в клетках кожи.
    Железо участвует в эритропоэзе, необходимо для укрепления волос и ногтей.
    Биотин (витамин Н) необходим для роста волос и ногтей, является источником серы, которая принимает участие в синтезе коллагена.
    Цинк стимулирует обменные процессы в коже для повышения её плотности и эластичности.
    Фолиевая кислота (витамин В9) необходима для создания и поддержания в здоровом состоянии новых клеток кожи.

    Мультикомплекс для кожи, волос, ногтей и всего организма.
    Рекомендуется в качестве биологически активной добавки к пище, дополнительного источника витаминов  группы В, витаминов С, А, Е, биотина, железа и цинка.

    Взрослым — по 1 драже 2 раза в день во время еды.
    Продолжительность приёма — 1 месяц.
    При необходимости приём можно повторить.

    • Индивидуальная непереносимость компонентов;
    • беременность;
    • кормление грудью.
    Перед применением рекомендуется проконсультироваться с врачом.

    Дозировка продукта установлена с учетом суточной потребности организма в витаминах.
    Не превышайте рекомендованной суточной дозы!

    Полный состав (в порядке убывания на 100 г):
    сахароза; лактоза; агент антислеживающий: тальк; витамин С; носитель: микрокристаллическая целлюлоза; краситель: диоксид титана; никотинамид; носитель: гуммиарабик; витамин Е; железа фумарат; пальмовое масло; крахмал; желатин; кальция-D-пантотенат; носитель: маннит; оксид цинка; витамин B6; витамин B1; глюкозный сироп; витамин B2; витамин А; фолиевая кислота; D-биотин; витамин B12; глазирователи: карнаубский воск, пчелиный воск; агенты антислеживающие: кремния диоксид, магниевые соли жирных кислот; красители: оксид железа красный, индиготин. 2 драже содержат
    Активные вещества:

    • Витамин С 120 мг;
    • Никотинамид (Витамин В3) 30 мг;
    • Витамин Е 13,4 мг.
    class=»h4-mobile»>

    Хранить в сухом, недоступном для детей месте, при температуре не выше 25 ˚С.

    Mercedes-Benz W140 | 12-цилиндровые бензиновые двигатели (М120.980/982)

    4.6.1 12-цилиндровые бензиновые двигатели (М120.980/982)

    12-цилиндровые бензиновые двигатели (М120.980/982) Снятие Снятие и установка двигателей М120.980  ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ 1. Поднимите капот. 2. Отсоедините отрицательный провод от батареи. 3. Снимите воздушный фильтр вместе с измерителем воздушного потока. 4. Снимите нижний защитный щиток двигателя. …

    4.

    6.2 Крышки головок блока цилиндров Крышки головок блока цилиндров Снятие Детали установки крышки головки блока цилиндров  ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ 1. Снимите впускной трубопровод. 2. Снимите муфту вентилятора. 3. Снимите крышки (14), (15) и (16) с распределителя (6). 4. Отсоедините наконечники (2) свечей зажигания. 5. Отве…

    4.6.3 Снятие и установка впускного трубопровода

    Снятие и установка впускного трубопровода Впускной трубопровод двигателей М120.980 Снятие Детали установки впускного трубопровода двигателей M120.980 (стрелкой показан стопорный язычок крышки распределителя) 6 — Рычаг управления дроссельной заслонкой 10 — Кронштейн 14, 15, 16 — Болты 17 — Блокировочные втулки 17/2 — Во…

    4.6.4 Снятие и установка выпускного коллектора

    Снятие и установка выпускного коллектора Передний левый выпускной коллектор Детали установки заднего правого выпускного коллектора (левый передний установлен зеркально) 12 — Самоконтрящиеся гайки 156b — Передний левый выпускной коллектор 156/2 — Прокладка  ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ При установке замените самок…

    4.6.5 Клапан рециркуляции отработавших газов — детали установки

    Клапан рециркуляции отработавших газов — детали установки Детали установки клапана рециркуляции отработавших газов 53 — Гофрированная воздухозаборная труба 54 — Хомут 89 — Клапан рециркуляции отработавших газов (EGR) 89/1, 89/2 — Гайки 89/3 — Болт М16/3 — Левый электронный привод управления …

    4.6.6 Насос подачи воздуха

    Насос подачи воздуха Снятие Детали установки насоса подачи воздуха 1, 2 — Болты 3, 4 — Трубки 125 — Насос подачи воздуха  ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ 1. Снимите воздушный фильтр. 2. Снимите ремень привода генератора. 3. Отсоедините разъем проводки от насоса. 4. Отв…

    4.6.7 Снятие и установка верхних передних крышек

    Снятие и установка верхних передних крышек Снятие Детали установки верхних передних крышек 1a — Фиксатор 3 — Ротор распределителя (двигатели 120.980) 4 — Бегунок (двигатель 120.980) 5 — Защитная крышка (двигатели 120.980) 5a — Уплотнение (двигатель 120.980) 6 — Резиновая прокладка 7 — Уплотнительное кольцо 8 — Резервуа…

    4.6.8 Головки блока цилиндров

    Головки блока цилиндров Снятие Детали установки левой головки блока цилиндров 11 — Болт 12 — Кронштейн 13 — Крышка подшипника распределительного вала 16 — Головка блока цилиндров 18 — Прокладка 19 — Вентиляционная трубка 22 — Выпускная труба Детали установки левой головки блока цилиндров …

    4.6.9 Снятие и установка крышки цепи привода ГРМ

    Снятие и установка крышки цепи привода ГРМ Снятие Детали установки крышки цепи привода ГРМ  ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ 1. Снимите передние крышки. 2. Снимите насос системы охлаждения (2). 3. Снимите воздушный фильтр с измерителем воздушного потока. 4. Снимите воздушный насос (9). 5. Снимите…

    4.6.10 Замена цепи привода ГРМ

    Замена цепи привода ГРМ См. также Раздел Привод ГРМ — общая информация, обслуживание компонентов Замена цепи привода ГРМ A — Рассоединение цепи привода ГРМ В — Заклепывание цепи привода ГРМ с помощью соединительного звена 6 — Толщина промежуточной пластины 7a = 1.6 мм, толщина наружной пластины 8b = 1.2 …

    4.6.11 Привод ГРМ — общая информация, обслуживание компонентов

    Привод ГРМ — общая информация, обслуживание компонентов Распределительные валы могут проворачиваться без риска столкновения клапанов с поршнями в случае, когда коленчатый вал приведен в положение 30° перед ВМТ поршня первого цилиндра. Газораспределительная цепь может быть заменена без разборки двигателя. При помощи перечисленных ни…

    4.6.12 Натяжитель цепи привода ГРМ

    Натяжитель цепи привода ГРМ См. также Раздел Привод ГРМ — общая информация, обслуживание компонентов Детали установки натяжителя цепи привода ГРМ 1 — Пробка 5, 15 — Уплотнительные кольца 7 — Палец 8 — Пружина 9 — Пружинное кольцо 10 — Упорный болт 14 — Корпус натяжителя …

    4.6.13 Регулятор распределительного вала

    Регулятор распределительного вала Снятие Детали установки регулятора распределительного вала 1 — Направляющий рычаг правой головки блока цилиндров 2 — Направляющий рычаг левой головки блока цилиндров 3, 15 — Болты 4 — Арматура 5 — Стопорный палец 6 — Гайка 12 — Крышка 13 — Звездочка распределительного вала …

    4.6.14 Снятие и установка распределительных валов

    Снятие и установка распределительных валов Снятие Детали установки распределительных валов  ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ 1. Снимите передние верхние крышки (30) и (30a). 2. Снимите направляющие рычаги головок блока цилиндров (40). 3. Отверните звездочку (3) выпускного распределительного вала левой го…

    4.6.15 Проверка фаз газораспределения

    Проверка фаз газораспределения Фазы газораспределения двигателя серии М120.980 Проверьте цифровое обозначение распределительных валов. Коды выбиты на шейке 3-го подшипника или на фланце Впускные распределительные валы  ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ 1. Проверните коленчатый вал с помощью ключа так, чтобы носики кулачков впускны…

    4.6.16 Проверка и регулировка положения распределительных валов

    Проверка и регулировка положения распределительных валов Проверка положения распределительных валов  ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ 1. Установите поршень первого цилиндра. 2. Поршень первого цилиндра находится в положении ВМТ тогда, когда кулачки впускного и выпускного распределительных валов правой головки блока цилиндров не нажимают на гидр…

    4.6.17 Замена направляющих втулок клапанов

    Замена направляющих втулок клапанов Размерные характеристики и детали установки направляющих втулок клапана приведены в Спецификациях. Детали установки направляющих втулок клапанов …

    4.6.19 Снятие и установка поршней

    Снятие и установка поршней Снятие  ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ 1. Отверните шатунные крышки и снимите шатуны вместе с поршнями. Обратите внимание, что шатуны и шатунные крышки одного цилиндра имеют одинаковое обозначение. 2. Проверьте шатунные болты. 3. Снимите стопорное кольцо с помощью отвертки и выпрессуйте по…

    4.6.20 Проверка шатунов

    Проверка шатунов Конструкция и размерные характеристики шатунов приведены в Спецификациях. …

    4.6.21 Снятие и установка коленчатого вала

    Снятие и установка коленчатого вала Снятие  ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ 1. Снимите цепь привода ГРМ со звездочек распределительных валов и звездочки коленчатого вала. 2. Снимите цепь привода масляного насоса вместе с натяжным рычагом, натяжной пружиной и втулкой. 3. Отверните маслоотражатель в блоке цилиндров и…

    4.6.22 Снятие и установка поддона картера двигателя

    Снятие и установка поддона картера двигателя Детали установки поддона картера двигателя Снятие  ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ 1. Снимите ремень привода генератора. 2. Снимите воздушный фильтр с измерителем воздушного потока 3. Отсоедините отрицательный провод от батареи. 4. Снимите нижний защитный щиток двигателя…

    4.6.23 Датчик-выключатель уровня масла — детали установки

    Датчик-выключатель уровня масла — детали установки Детали установки масляного насоса 1, 2, 3 — Болты 4 — Втулки 6 — Масляный насос 7 — Звездочка масляного насоса Детали установки датчика уровня масла 1 — Пробка 2 — Палец 3 — Стопорное кольцо 4 — Уплотнительное кольцо 5 — Провод 6…

    4.6.24 Масляный насос — конструкция и детали установки

    Масляный насос — конструкция и детали установки Детали установки масляного насоса 1 — Масляный насос 6 — Болт 7 — Звездочка масляного насоса 8, 9 Болт с прокладкой 10 — Компенсатор S43 — Датчик уровня масла Схема насоса и фильтра 1 — Маслоприемник и фильтр грубой очистки масляного насоса …

    Отзыв владельца Mercedes 190 (Мерседес 190) 1988 г.

    Я рассматривал, как варианты, все немецкие модели тех лет (Audi 100, 80, Jetta, Golf, Mercedes 124). Именно немецкие, потому что японки дорогие в обслуживании, да и ждать запчасти довольно долго. Из всех моделей решил взять Мерседес, потому что начальная цена для такого авто достаточно низкая и все-таки Mercedes Benz.

    Я покупал машину с расчетом под себя, т. е. полная переделка, тюнинг, доработка, кап. ремонт двигателя и подвески. Когда покупал, думал о быстрой, небольшой, экономичной и недорогой машине. Все эти качества и сочетает мой Mercedes Benz E190.

    Итак, со слезами на глазах расстался-таки я со своим белым зверем, отслужившем мне верой и правдой полных 2 года.

    Не помню уже почему выбор пал на Мерседес, просто после 2103 82 года, на котором чуть не разбился, сильно хотелось свой автомобиль, чтоб ни перед кем не отчитываться и не просить разрешения, ни клянчить.

    Искал автомобиль белого цвета, с фаркопом, стеклоподъёмниками, без кондея. Купил за 120 000 (ну понравилась + я был сильно наивный). Долго ставил на учёт — при постановке на Варшавке, нашли табличку с номером двигателя — послали на экспертизу. В итоге: купив в июне, на учёт поставил только в сентябре, начал ездить.

    Преимущества классики Мерседесовской над ВАЗовской «классикой», я думаю, всем очевидны. Посадка, эргономика, управляемость, больше 140 я, правда не разгонялся (ну негде, да и по натуре я не гонщик). Эксплуатировал от + 40 до — 25 — машина работала, как часы, ни разу в дороге не подводила… ну один раз, когда разлетелся подшипник на передней ступице, но вернулся сам, правда пришлось поменять кулак в сборе и диски передние.

    Дважды гонял на Юг: один раз летом — в Тамань, другой раз на Новый год, расстояние в 1300 км зимой проехал за 16 часов, при том, что заблудился в пункте назначения. Расход для такой машины (1986 года выпуска) был просто удивителен — 7, 8 летом и 9, 8 зимой по трассе, в городе 10-12. Ездил к себе в деревеньку — 120 км от Москвы и 3 км по грунтовке, ну когда пройдёт дождь, грунтовка превращается в грязь, а ехать нужно, пришлось ставить цепи.

    За внедорожное усовершенствование пришлось расплачиваться — сжёг выжимной, загудел редуктор, вернее начал подгуживать. Поскольку авто был первый, то я естественно начал его тихонечко бить: сначала расколол передний бампер, затем в деревенском ухабе оставил задний. В день знаний в меня въехал ас люфтваффель — от больших разрушений спас фаркоп, отволок его до дома, снял 15 000, ремонт стал в 9 — люблю я Мерседес!

    Поздней осенью капитально ободрал авто, царапины шли практически по всей длине. Выборочно перекрасил, по кругу, кроме крыши, и капота — не попал в цвет, поскольку до меня красили бело-зелёной краской. Забрали машину на эвакуаторе, после него обнаружил, трещины в краске возле петель — жёсткость в кузове отсутствует напрочь! В процессе перекраски понял, что замены потребуют 3 крыла, обе передних двери + залез в движок андрюха, вердикт — ресурс двигателя 50 тыков, всё, круг замкнулся. Спешно докрасил и продал за 70 000.

    За время владения машиной ремонтировалось и менялось: передний кулак, рулевые тяги, 2 раза сцепление, перебирал коробку, ГБЦ, маслосъёмные, гидрики, форсунки — стоило порядка 60 000, ещё 50 000 стоила покраска, порядка 90 000 потратил на покупку суппортов, фар, амортизаторов, редукторов, подлокотника и пр. фигни, которую так и не поставил, некоторые записи в виде «коврик в авто 1500» вообще не поддаются логической трактовке, вероятнее всего, осели где-то в гараже.

    Есть много хороших и классных автомобилей, как европейских, так азиатских и американских, но сдаётся мне, что только обладатели звезды на капоте организовали дорожное братство, как виртуальное, так и реальное. Не раз мне помогали на дороге, при перестроении, предупреждали о засадах, причём делалось это не только в Москве, но и в Тульской, Псковской областях, на Юге. Интернет форумы — отдельная тема, перед каждой поездкой на дальняк, будь то Псков, Ростов-на-Дону, находил форумчанина просил скинуть контакты на случай, если возникнут проблемы в пути и ни разу не получал отказ, правда и помощь не требовалась.

    Быстрое путешествие смертельной вспышки MERS

    Один пациент с MERS привел к заражению 16 человек, что привело к вспышке, от которой пострадали 44 человека в Эр-Рияде. Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний (NIAID)

    В 2017 году один пациент с ближневосточным респираторным синдромом (MERS) в Эр-Рияде был ответственен за прямое заражение 16 пациентов, что привело к вспышке, в результате которой за две недели заразились 44 человека в окрестностях.Недавние исследования этой вспышки показывают, что у пациентов, страдающих почечной и сердечной недостаточностью, часто бывает трудно диагностировать пневмонию, один из ключевых симптомов заболевания. Это задерживает идентификацию вируса и надлежащие процедуры инфекционного контроля.

    Ближневосточный респираторный синдром (БВРС) — это вирусное заболевание, включенное в список приоритетных заболеваний Всемирной организации здравоохранения, за которыми необходимо внимательно следить, поскольку они могут вызывать эпидемию. Вызванный типом коронавируса, БВРС-КоВ, был впервые выявлен в 2012 году и передается при контакте с инфицированными верблюдами или людьми.Нет известного лекарства, и 35 процентов зарегистрированных пациентов умерли. С сентября 2012 года произошло не менее 845 случаев смерти от БВРС-КоВ в 27 странах. Примерно 80 процентов зарегистрированных случаев приходится на Саудовскую Аравию.

    Информация о прошлых вспышках очень важна для улучшения инфекционного контроля. Группа исследователей из университетов и исследовательских центров, связанных с Министерством здравоохранения Саудовской Аравии и Министерством здравоохранения Национальной гвардии, теперь изучила факторы, которые привели к вспышке в Эр-Рияде в 2017 году.В период с 31 мая по 15 июня того же года в трех медицинских центрах было зарегистрировано 44 случая БВРС-КоВ. Одиннадцать пациентов умерли от своих инфекций.

    Из общего числа инфицированных 29 были из King Saud Medical City (KSMC), крупнейшей больницы в Саудовской Аравии.

    Сосредоточившись на пострадавших в KSMC, исследователи описывают, как один-единственный пациент превратился в «суперпредседателя» — человека, который заражает гораздо большее количество людей, чем в среднем.

    Вспышка была связана с 46-летним йеменцем, который после прибытия в больницу на машине скорой помощи провел 14 часов в отделении неотложной помощи.Его симптомы включали кашель и одышку, и врачи отметили, что у него был понос в течение двух предыдущих дней. Изначально анализы крови показали, что он страдает почечной недостаточностью.

    Чтобы пройти гемодиализ (обычный процесс очистки крови для пациентов, у которых не работают почки), его перевели в медицинское отделение, где он жил в палате с четырьмя другими пациентами в течение двух дней.

    Его состояние не улучшилось. У него были проблемы с дыханием, и он был помещен в отделение интенсивной терапии.В этот момент медицинская бригада заподозрила инфекцию БВРС-КоВ, и образец мазка из носа и горла подтвердил их подозрения.

    Мужчина был изолирован и переведен в больницу принца Мохаммеда бин Абдулазиза, центр для пациентов с MERS, где он скончался 22 дня спустя.

    Составив карту пути пациента от машины скорой помощи до различных участков больницы, исследование показало, что он напрямую контактировал со 120 людьми: 107 медицинскими работниками и 13 пациентами. Девять из 107 медицинских работников и семь из 13 пациентов дали положительный результат на БВРС-КоВ.На то, чтобы взять под контроль вспышку заболевания, потребовалось 30 дней.

    Исследователи пришли к выводу, что «в странах, эндемичных по БВРС-КоВ, существует острая необходимость в разработке быстрого тестирования в местах оказания медицинской помощи, которое помогло бы персоналу отделения неотложной помощи в сортировке подозреваемых случаев БВРС-КоВ, чтобы обеспечить своевременную изоляцию и ведение их больных. первичное заболевание и предотвратить крупные вспышки БВРС-КоВ ». Они также рекомендуют продолжить обучение растущего числа иностранных медицинских работников в Саудовской Аравии, чтобы помочь предотвратить будущие вспышки.

    Происхождение и эволюция патогенных коронавирусов

  • 1.

    Мастерс, П. С. и Перлман, С. в Fields Virology Vol. 2 (редакторы Knipe, D. M. и Howley, P. M.) 825–858 (Lippincott Williams & Wilkins, 2013).

  • 2.

    Чжун, Н. С. и др. Эпидемиология и причины тяжелого острого респираторного синдрома (SARS) в Гуандуне, Китайская Народная Республика, в феврале 2003 г. Lancet 362 , 1353–1358 (2003).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 3.

    Drosten, C. et al. Выявление нового коронавируса у пациентов с тяжелым острым респираторным синдромом. N. Engl. J. Med. 348 , 1967–1976 (2003).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 4.

    Fouchier, R.A. et al. Этиология: Постулаты Коха выполнены для вируса атипичной пневмонии. Природа 423 , 240 (2003).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 5.

    Ksiazek, T. G. et al. Новый коронавирус, связанный с тяжелым острым респираторным синдромом. N. Engl. J. Med. 348 , 1953–1966 (2003).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 6.

    Заки, А. М., ван Бохемен, С., Бестеброер, Т. М., Остерхаус, А. Д. и Фушье, Р. А. Изоляция нового коронавируса от человека с пневмонией в Саудовской Аравии. N. Engl. J. Med. 367 , 1814–1820 (2012).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 7.

    Li, W. H. et al. Ангиотензин-превращающий фермент 2 является функциональным рецептором коронавируса SARS. Nature 426 , 450–454 (2003).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 8.

    Qian, Z. et al. Врожденный иммунный ответ альвеолярных клеток человека II типа, инфицированных тяжелым острым респираторным синдромом — коронавирусом. г. J. Respir. Клетка. Мол. Биол. 48 , 742–748 (2013).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 9.

    Lu, G. et al. Молекулярная основа связывания нового коронавируса человека MERS-CoV и его рецептора CD26. Природа 500 , 227–231 (2013).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 10.

    Радж В.S. et al. Дипептидилпептидаза 4 является функциональным рецептором нового коронавируса человека — EMC. Природа 495 , 251–254 (2013).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 11.

    Scobey, T. et al. Обратная генетика с полноразмерной инфекционной кДНК коронавируса ближневосточного респираторного синдрома. Proc. Natl Acad. Sci. США 110 , 16157–16162 (2013).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 12.

    Guan, Y. et al. Выделение и характеристика вирусов, связанных с коронавирусом SARS, от животных на юге Китая. Наука 302 , 276–278 (2003). Этот документ является первой демонстрацией передачи SARS-CoV от животных .

    CAS PubMed Google Scholar

  • 13.

    Alagaili, A. N. et al. Инфекция коронавируса ближневосточного респираторного синдрома у верблюдов-верблюдов в Саудовской Аравии. MBio 5 , e00884–14 (2014).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 14.

    Hemida, M. G. et al. Распространенность серологического вируса ближневосточного респираторного синдрома (MERS) среди домашнего скота в Саудовской Аравии, 2010–2013 гг. евро. Surveill. 18 , 21–27 (2013).

    Google Scholar

  • 15.

    Lau, S. K. et al.Коронавирусоподобный вирус тяжелого острого респираторного синдрома у китайских подковоносов. Proc. Natl Acad. Sci. США 102 , 14040–14045 (2005).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 16.

    Kan, B. et al. Анализ молекулярной эволюции и географическое исследование коронавирусоподобного вируса тяжелого острого респираторного синдрома в пальмовых циветтах на рынке животных и на фермах. J. Virol. 79 , 11892–11900 (2005).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 17.

    Итете, Н. Л. и др. Близкий родственник коронавируса ближневосточного респираторного синдрома человека у летучих мышей, Южная Африка. Emerg. Заразить. Дис. 19 , 1697–1699 (2013).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 18.

    Ge, X. Y. et al. Выделение и характеристика коронавируса, напоминающего атипичную пневмонию летучих мышей, который использует рецептор ACE2. Природа 503 , 535–538 (2013). Эта статья представляет собой первую идентификацию человеческого ACE2 в качестве рецептора SARS-подобного коронавируса летучих мышей .

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 19.

    Yang, X. L. et al. Выделение и характеристика нового коронавируса летучих мышей, тесно связанного с прямым предшественником коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома. J. Virol. 90 , 3253–3256 (2016).

    CAS PubMed Central Google Scholar

  • 20.

    Hu, B. et al. Обнаружение богатого генофонда коронавирусов, связанных с атипичной пневмонией летучих мышей, дает новое понимание происхождения коронавируса атипичной пневмонии. PLOS Pathog. 13 , e1006698 (2017). В этом документе определяется генофонд SARS-CoV у летучих мышей .

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 21.

    Lau, S. K. et al. Генетическая характеристика вирусов линии C Betacoronavirus у летучих мышей выявила заметное расхождение последовательностей в шиповом белке коронавируса летучих мышей pipistrellus HKU5 в японском pipistrelle: последствия для происхождения нового коронавируса ближневосточного респираторного синдрома J. Virol. 87 , 8638–8650 (2013).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 22.

    Ву, П.К., Лау, С. К., Хуанг, Ю. и Юн, К. Ю. Разнообразие коронавирусов, филогения и межвидовые прыжки. Exp. Биол. Med. (Maywood) 234 , 1117–1127 (2009).

    CAS Google Scholar

  • 23.

    Перлман, С. и Нетленд, Дж. Коронавирусы после атипичной пневмонии: обновленная информация о репликации и патогенезе. Нат. Rev. Microbiol. 7 , 439–450 (2009).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 24.

    Woo, P. C. et al. Открытие семи новых коронавирусов млекопитающих и птиц в роду deltacoronavirus подтверждает, что коронавирусы летучих мышей являются генным источником альфа-коронавируса и бета-коронавируса, а птичьи коронавирусы являются генным источником гаммакоронавируса и дельтакоронавируса. J. Virol. 86 , 3995–4008 (2012). В этой статье описывается происхождение коронавируса с помощью филогенетического анализа .

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 25.

    Грэм, Р. Л., Дональдсон, Э. Ф. и Барик, Р. С. Десять лет после атипичной пневмонии: стратегии борьбы с появляющимися коронавирусами. Нат. Rev. Microbiol. 11 , 836–848 (2013).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 26.

    Hu, B., Ge, X., Wang, L. F. и Shi, Z. Происхождение человеческих коронавирусов летучими мышами. Virol. Дж. 12 , 221 (2015).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 27.

    de Wit, E., van Doremalen, N., Falzarano, D. & Munster, V. J. SARS и MERS: недавние исследования возникающих коронавирусов. Нат. Rev. Microbiol. 14 , 523–534 (2016).

    PubMed Google Scholar

  • 28.

    Su, S. et al. Эпидемиология, генетическая рекомбинация и патогенез коронавирусов. Trends Microbiol. 24 , 490–502 (2016).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 29.

    Форни Д., Калиани Р., Клеричи М. и Сирони М. Молекулярная эволюция геномов коронавируса человека. Trends Microbiol. 25 , 35–48 (2017).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 30.

    Энтони, С. Дж. И др. Глобальные закономерности в разнообразии коронавирусов. Virus Evol. 3 , vex012 (2017).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 31.

    Wang, L., Su, S., Bi, Y., Wong, G. & Gao, G. F. Коронавирусы летучего происхождения расширяют круг своих хозяев до свиней. Trends Microbiol. 26 , 466–470 (2018).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 32.

    Брайан Д. А. и Барик Р. С. Структура и репликация генома коронавируса. Curr. Вершина. Microbiol. Иммунол. 287 , 1–30 (2005).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 33.

    Лин, К. М., Саиф, Л. Дж., Марталер, Д. и Ван, К. Эволюция, антигенность и патогенность глобальных штаммов вируса эпидемической диареи свиней. Virus Res. 226 , 20–39 (2016).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 34.

    Zhou, P. et al. Синдром острой диареи свиней со смертельным исходом, вызванный коронавирусом летучей мыши, связанным с HKU2. Природа 556 , 255–258 (2018). В этой статье описывается происхождение коронавируса свиней от летучих мышей .

    CAS PubMed Google Scholar

  • 35.

    Huang, Y. W. et al. Происхождение, эволюция и генотипирование новых штаммов вируса эпидемической диареи свиней в США. MBio 4 , e00737–00713 (2013).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 36.

    Liu, C. et al. Использование рецепторов и проникновение в клетки коронавируса эпидемической диареи свиней. J. Virol. 89 , 6121–6125 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 37.

    Simas, P. V. et al. Коронавирус летучих мышей в Бразилии связан с вирусами эпидемической диареи Аппалачей и свиней. Emerg. Заразить. Дис. 21 , 729–731 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 38.

    Lacroix, A. et al. Генетическое разнообразие коронавирусов у летучих мышей в Лаосской Народно-Демократической Республике и Камбодже. Заражение. Genet. Evol. 48 , 10–18 (2017).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 39.

    Tu, C. et al. Антитела к коронавирусу SARS в циветтах. Emerg. Заразить. Дис. 10 , 2244–2248 (2004).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 40.

    Wang, M. et al. [Анализ факторов риска тяжелых острых респираторных синдромов коронавирусной инфекции у работников животноводческих хозяйств]. Чжунхуа Лю Син Бин Сюэ За Чжи 25 , 503–505 (2004).

    PubMed Google Scholar

  • 41.

    Xu, H. F. et al. [Эпидемиологическое расследование заражения коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома у торговцев дикими животными в Гуанчжоу]. Чжунхуа Ю Фан И Сюэ За Чжи 38 , 81–83 (2004).

    PubMed Google Scholar

  • 42.

    Song, H. D. et al. Перекрестная эволюция коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома у пальмовой циветты и человека. Proc. Natl Acad. Sci. США 102 , 2430–2435 (2005). В этой статье описывается генетическая эволюция SARS-CoV при передаче от животных и людей .

    CAS PubMed Google Scholar

  • 43.

    Li, W. et al. Летучие мыши являются естественными резервуарами коронавирусов, подобных атипичной пневмонии. Наука 310 , 676–679 (2005).

    CAS Google Scholar

  • 44.

    Ren, W. et al. Полноразмерные последовательности генома двух SARS-подобных коронавирусов у подковообразных летучих мышей и анализ генетической изменчивости. J. Gen. Virol. 87 , 3355–3359 (2006).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 45.

    Drexler, J. F. et al. Геномная характеристика коронавируса, связанного с тяжелым острым респираторным синдромом, у европейских летучих мышей и классификация коронавирусов на основе частичных последовательностей генов РНК-зависимой РНК-полимеразы. J. Virol. 84 , 11336–11349 (2010).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 46.

    Lau, S. K. et al. Экоэпидемиология и полное сравнение генома различных штаммов коронавируса летучих мышей Rhinolophus, связанного с тяжелым острым респираторным синдромом, в Китае показывают, что летучие мыши являются резервуаром для острой, самоограничивающейся инфекции, которая допускает рекомбинационные события. J. Virol. 84 , 2808–2819 (2010).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 47.

    Рихтарик, Д., Хостник, П., Стейер, А., Гром, Дж. И Топлак, И. Идентификация SARS-подобных коронавирусов у подковообразных летучих мышей (Rhinolophus hipposideros) в Словении. Arch. Virol. 155 , 507–514 (2010).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 48.

    Yuan, J. et al. Внутривидовое разнообразие SARS-подобных коронавирусов у Rhinolophus sinicus и его значение для происхождения коронавирусов SARS у людей. J. Gen. Virol. 91 , 1058–1062 (2010).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 49.

    Balboni, A., Gallina, L., Palladini, A., Prosperi, S. & Battilani, M. Анализ ПЦР в реальном времени для обнаружения коронавируса, подобного SARS у летучих мышей, и его применение к итальянской большой подкове исследования образцов фекалий летучих мышей. Sci. Мир J. 2012 , 989514 (2012).

    Google Scholar

  • 50.

    Yang, L. et al. Новые SARS-подобные бета-коронавирусы у летучих мышей, Китай, 2011. Emerg. Заразить. Дис. 19 , 989–991 (2013).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 51.

    He, B. et al. Идентификация различных альфа-коронавирусов и геномная характеристика нового тяжелого острого респираторного синдрома, подобного коронавирусу, от летучих мышей в Китае. J. Virol. 88 , 7070–7082 (2014).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 52.

    Gouilh, M. A. et al. Следы предков SARS-коронавируса в колониях летучих мышей Юго-Восточной Азии и теория убежища. Заражение. Genet. Evol. 11 , 1690–1702 (2011).

    PubMed Google Scholar

  • 53.

    Wacharapluesadee, S.и другие. Разнообразие коронавируса у летучих мышей из Восточного Таиланда. Virol. Дж. 12 , 57 (2015).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 54.

    Tong, S. et al. Обнаружение новых SARS-подобных и других коронавирусов у летучих мышей из Кении. Emerg. Заразить. Дис. 15 , 482–485 (2009).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 55.

    Wang, M. N. et al. Продольное наблюдение за SARS-подобными коронавирусами у летучих мышей с помощью количественной ПЦР в реальном времени. Virol. Грех. 31 , 78–80 (2016).

    PubMed Google Scholar

  • 56.

    Лай М. и Кавана Д. Молекулярная биология коронавирусов. Adv. Virus Res. 48 , 1–100 (1997).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 57.

    Zhao, Z. et al. Умеренная частота мутаций в геноме коронавируса SARS и ее последствия. BMC Evol. Биол. 4 , 21 (2004).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 58.

    Hon, C.C. et al. Доказательства рекомбинантного происхождения коронавируса, подобного тяжелому острому респираторному синдрому (SARS) летучих мышей, и его последствий для прямого предка коронавируса SARS. J. Virol. 82 , 1819–1826 (2008).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 59.

    Wu, Z. et al. Связанные с ORF8 генетические доказательства китайских подковоносов как источника коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома человека. J. Infect. Дис. 213 , 579–583 (2016).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 60.

    Надь, П. Д. и Саймон, А. Е. Новое понимание механизмов рекомбинации РНК. Вирусология 235 , 1–9 (1997).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 61.

    Rowe, C. L. et al. Генерация вариантов делеции спайков коронавируса путем высокочастотной рекомбинации в областях предсказанной вторичной структуры РНК. J. Virol. 71 , 6183–6190 (1997).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 62.

    Китайский, S. M. E. C. Молекулярная эволюция коронавируса SARS в ходе эпидемии SARS в Китае. Наука 303 , 1666–1669 (2004). В этом документе описывается генетическая эволюция SARS-CoV у человека во время вспышек SARS .

    Google Scholar

  • 63.

    Бэбкок, Дж. Дж., Эсшаки, Д. Дж., Томас, В. Д. и Амброзино, Д. М. Аминокислоты 270–510 шипованного белка коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома необходимы для взаимодействия с рецептором. J. Virol. 78 , 4552–4560 (2004).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 64.

    Вонг, С. К., Ли, В. Х., Мур, М. Дж., Чоу, Х. и Фарзан, М. А. 193-аминокислотный фрагмент белка S коронавируса SARS эффективно связывает ангиотензин-превращающий фермент 2. J. Biol. Chem. 279 , 3197–3201 (2004). Эта статья идентифицирует рецептор-связывающий домен белка шипа SARS-CoV .

    CAS PubMed Google Scholar

  • 65.

    Le, T. M. et al. Экспрессия, посттрансляционная модификация и биохимическая характеристика белков, кодируемых субгеномной мРНК8 коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома. FEBS J. 274 , 4211–4222 (2007).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 66.

    Oostra, M., de Haan, C.A. & Rottier, P.J. Делеция 29 нуклеотидов, присутствующая в коронавирусах человека, но не у животных с тяжелым острым респираторным синдромом, нарушает функциональную экспрессию открытой рамки считывания 8. J. Virol. 81 , 13876–13888 (2007).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 67.

    Wong, H.H. et al. Вспомогательные белки 8b и 8ab коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома подавляют путь передачи сигналов интерферона, опосредуя убиквитин-зависимую быструю деградацию фактора регуляции интерферона 3. Вирусология 515 , 165–175 (2018).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 68.

    Sung, S. C., Chao, C. Y., Jeng, K. S., Yang, J. Y. & Lai, M. M. Белок 8ab SARS-CoV представляет собой белок, связанный с мембраной ER просвета и индуцирует активацию ATF6. Вирусология 387 , 402–413 (2009).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 69.

    Chen, C.Y. et al. Открытая рамка считывания 8a коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома человека не только способствует репликации вируса, но и индуцирует апоптоз. J. Infect. Дис. 196 , 405–415 (2007).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 70.

    Zhou, P., Li, H., Wang, H., Wang, L. F. и Shi, Z. Bat гомологи ORF3b коронавируса, подобные тяжелому острому респираторному синдрому, проявляют различную активность антагонистов интерферона. J. Gen. Virol. 93 , 275–281 (2012).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 71.

    Zeng, L.P. et al. Перекрестная нейтрализация антител, специфичных к коронавирусу SARS, против коронавирусов, подобных SARS летучих мышей. Sci. China Life Sci. 60 , 1399–1402 (2017).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 72.

    Li, F. Распознавание рецепторов и межвидовые инфекции коронавируса SARS. Antiviral Res. 100 , 246–254 (2013).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 73.

    Li, W. H. et al. Животное происхождение коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома: данные о взаимодействиях ACE2-S-белков. J. Virol. 80 , 4211–4219 (2006).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 74.

    Li, F. et al. Конформационные состояния эктодомена спайк-белка коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома. J. Virol. 80 , 6794–6800 (2006).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 75.

    Yuan, Y. et al. Крио-ЭМ структуры гликопротеинов спайков БВРС-КоВ и SARS-CoV выявляют динамические домены связывания рецепторов. Нат. Commun. 8 , 15092 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 76.

    Li, W. H. et al. Рецепторные и вирусные детерминанты адаптации SARS-коронавируса к ACE2 человека. EMBO J. 24 , 1634–1643 (2005). В этой статье определены ключевые остатки, участвующие в адаптации SARS-CoV для человека .

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 77.

    Towler, P. et al. Рентгеновские структуры ACE2 обнаруживают большое движение изгиба шарнира, важное для связывания ингибитора и катализа. J. Biol. Chem. 279 , 17996–18007 (2004).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 78.

    Qu, X. X. et al. Идентификация двух критических аминокислотных остатков шипового белка коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома для его изменения при переходе к зоонозному тропизму с помощью стратегии двойной замены. J. Biol. Chem. 280 , 29588–29595 (2005).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 79.

    Liu, L. et al. Естественные мутации в рецептор-связывающем домене гликопротеина шипа определяют реактивность перекрестной нейтрализации между коронавирусом циветты пальмы и коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома. J. Virol. 81 , 4694–4700 (2007).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 80.

    Liang, G.D. et al. Лабораторная диагностика четырех недавних спорадических случаев внебольничной атипичной пневмонии, провинция Гуандун, Китай. Emerg. Заразить. Дис. 10 , 1774–1781 (2004).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 81.

    Sheahan, T. et al. Механизмы расширения круга хозяев коронавируса тяжелого зоонозного острого респираторного синдрома в эпителии дыхательных путей человека. J. Virol. 82 , 2274–2285 (2008).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 82.

    Ли, Ф., Ли, WH, Фарзан, М. и Харрисон, С.К. в Нидовирусы : на пути к борьбе с атипичной пневмонией и другими нидовирусными заболеваниями (Достижения в экспериментальной медицине и биологии, том 581) С. 229–234 (Springer, 2006).

  • 83.

    Ву, К. Л., Пэн, Г. К., Уилкен, М., Герати, Р. Дж. И Ли, Ф. Механизмы адаптации рецепторов хозяина к коронавирусу тяжелого острого респираторного синдрома. J. Bio. Chem. 287 , 8904–8911 (2012).

    CAS Google Scholar

  • 84.

    Wu, K. et al. Горячая точка связывания вируса на человеческом ангиотензинпревращающем ферменте 2 имеет решающее значение для связывания двух разных коронавирусов. J. Virol. 85 , 5331–5337 (2011).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 85.

    Li, F.Структурный анализ основных видовых барьеров между человеком и пальмовыми циветтами при тяжелом остром респираторном синдроме, вызванном коронавирусной инфекцией. J. Virol. 82 , 6984–6991 (2008).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 86.

    Becker, M. M. et al. Синтетический рекомбинантный коронавирус, похожий на SARS, заразен в культивируемых клетках и у мышей. Proc. Natl Acad. Sci. США 105 , 19944–19949 (2008).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 87.

    Ren, W. et al. Разница в использовании рецепторов между коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома (SARS) и SARS-подобным коронавирусом происхождения летучих мышей. J. Virol. 82 , 1899–1907 (2008).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 88.

    Menachery, V. D. et al. Кластер циркулирующих коронавирусов летучих мышей, напоминающий атипичную пневмонию, показывает потенциал для появления людей. Нат. Med. 21 , 1508–1513 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 89.

    Menachery, V. D. et al. SARS-подобный WIV1-CoV готов к появлению у людей. Proc. Natl Acad. Sci. США 113 , 3048–3053 (2016).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 90.

    Haagmans, B. L. et al. Коронавирус ближневосточного респираторного синдрома у верблюдов-верблюдов: расследование вспышки. Lancet Infect. Дис. 14 , 140–145 (2014). Эта статья представляет собой первую идентификацию БВРС-КоВ у верблюдов .

    CAS PubMed Google Scholar

  • 91.

    Azhar, E. I. et al. Доказательства передачи коронавируса MERS от верблюда человеку. N. Engl. J. Med. 370 , 2499–2505 (2014).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 92.

    Raj, V. S. et al. Выделение коронавируса MERS у верблюда-верблюда, Катар, 2014 г. Emerg. Заразить. Дис. 20 , 1339–1342 (2014).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 93.

    Sabir, J. S. et al. Совместная циркуляция трех видов верблюжьего коронавируса и рекомбинация БВРС-КоВ в Саудовской Аравии. Наука 351 , 81–84 (2016).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 94.

    Chu, D. K. W. et al. Коронавирусы MERS от верблюдов в Африке демонстрируют регионально-зависимое генетическое разнообразие. Proc. Natl Acad. Sci. США 115 , 3144–3149 (2018). В этой статье описывается генетическое разнообразие БВРС-КоВ у африканских верблюдов. .

    CAS PubMed Google Scholar

  • 95.

    Paden, C. R. et al. Зоонозное происхождение и передача коронавируса ближневосточного респираторного синдрома в ОАЭ. Зоопарк. Паб. Здравоохранение 65 , 322–333 (2018).

    CAS Google Scholar

  • 96.

    Perera, R.A. et al. Сероэпидемиология коронавируса MERS с использованием тестов микронейтрализации и нейтрализации псевдочастиц вируса показывает высокую распространенность антител у верблюдов-верблюдов в Египте, июнь 2013 г. евро. Surveill. 18 , 20574 (2013).

    PubMed Google Scholar

  • 97.

    Reusken, C. B. et al. Ближневосточный респираторный синдром нейтрализующие коронавирус сывороточные антитела у верблюдов-верблюдов: сравнительное серологическое исследование. Lancet Infect. Дис. 13 , 859–866 (2013).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 98.

    Hemida, M. G. et al. Коронавирус MERS в стаде верблюжьих верблюдов, Саудовская Аравия. Emerg. Заразить. Дис. 20 , 1231–1234 (2014).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 99.

    Корман, В. М. и др. Антитела к коронавирусу MERS у верблюдов-верблюдов, Кения, 1992–2013 гг. Emerg. Заразить. Дис. 20 , 1319–1322 (2014).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 100.

    Muller, M. A. et al. Антитела, нейтрализующие коронавирус MERS, у верблюдов, Восточная Африка, 1983–1997 гг. Emerg. Заразить. Дис. 20 , 2093–2095 (2014).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 101.

    Muller, M.A. et al. Наличие антител к коронавирусу ближневосточного респираторного синдрома в Саудовской Аравии: общенациональное кросс-секционное серологическое исследование. Lancet Infect. Дис. 15 , 559–564 (2015).

    PubMed Google Scholar

  • 102.

    Saqib, M. et al. Серологические доказательства инфекции БВРС-КоВ у верблюдов-верблюдов, Пенджаб, Пакистан, 2012–2015 гг. Emerg. Заразить. Дис. 23 , 550–551 (2017).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 103.

    Harcourt, J. L. et al. Распространенность антител к коронавирусу ближневосточного респираторного синдрома (БВРС-КоВ) у верблюдов-верблюдов в Израиле. Общественное здравоохранение по зоонозам 65 , 749–754 (2018).

    CAS Google Scholar

  • 104.

    de Groot, R.J. et al. Коронавирус ближневосточного респираторного синдрома (БВРС-КоВ): объявление группы по изучению коронавируса. J. Virol. 87 , 7790–7792 (2013).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 105.

    Corman, V. M. et al. Укоренение филогенетического древа коронавируса ближневосточного респираторного синдрома путем характеристики конспецифического вируса африканской летучей мыши. J. Virol. 88 , 11297–11303 (2014).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 106.

    Yang, L. et al. Связанный с БВРС бета-коронавирус у летучих мышей Vespertilio superans. Китай. Emerg. Заразить. Дис. 20 , 1260–1262 (2014).

    PubMed Google Scholar

  • 107.

    Дудас, Г. и Рамбаут, А. Рекомбинация БВРС-КоВ: значение резервуара и потенциал для адаптации. Virus Evol. 2 , vev023 (2016).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 108.

    Wang, Y. et al. Происхождение и возможная генетическая рекомбинация коронавируса ближневосточного респираторного синдрома из первого завезенного случая в Китае: филогенетика и анализ коалесценции. MBio 6 , e01280–15 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 109.

    Чжан З., Шен Л. и Гу X. Эволюционная динамика БВРС-КоВ: потенциальная рекомбинация, положительный отбор и передача. Sci. Отчетность 6 , 25049 (2016).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 110.

    Lau, S. K. P. et al. Использование рецепторов нового бета-коронавируса линии летучих мышей C выявляет эволюцию белков-шипов коронавируса, связанных с ближневосточным респираторным синдромом, для связывания дипептидилпептидазы 4 человека. J. Infect. Дис. 218 , 197–207 (2018).

    PubMed Google Scholar

  • 111.

    Luo, C.M. et al. Открытие новых коронавирусов летучих мышей в Южном Китае, которые используют тот же рецептор, что и коронавирус ближневосточного респираторного синдрома. J. Virol. 92 , e00116–18 (2018).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 112.

    Barlan, A. et al. Вариабельность рецепторов и восприимчивость к коронавирусной инфекции ближневосточного респираторного синдрома. J. Virol. 88 , 4953–4961 (2014).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 113.

    Matthews, KL, Coleman, CM, van der Meer, Y., Snijder, EJ & Frieman, MB Кодируемые ORF4b дополнительные белки коронавируса ближневосточного респираторного синдрома и двух родственных коронавирусов летучих мышей локализуются в ядре и подавляют передачу сигналов врожденного иммунитета. J. Gen. Virol. 95 , 874–882 (2014).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 114.

    Yang, Y. et al. Белок ORF4b коронавируса ближневосточного респираторного синдрома подавляет выработку интерферона I типа через цитоплазматические и ядерные мишени. Sci. Отчетность 5 , 17554 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 115.

    Menachery, V. D. et al. Дополнительные ОРС БВРС-КоВ играют ключевую роль в инфекции и патогенезе. MBio 8 , e00665–17 (2017).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 116.

    Энтони, С. Дж. И др. Еще одно свидетельство того, что летучие мыши являются эволюционным источником коронавируса ближневосточного респираторного синдрома. MBio 8 , e00373–17 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 117.

    Du, L. et al. Идентификация рецептор-связывающего домена в S-белке нового коронавируса человека, коронавируса ближневосточного респираторного синдрома, в качестве важной цели для разработки вакцины. J. Virol. 87 , 9939–9942 (2013).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 118.

    Mou, H. et al. Рецептор-связывающий домен нового коронавируса ближневосточного респираторного синдрома сопоставляется с областью из 231 остатка в спайковом белке, который эффективно вырабатывает нейтрализующие антитела. J. Virol. 87 , 9379–9383 (2013).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 119.

    Wang, N. et al. Структура спайкового домена связывания рецептора БВРС-КоВ в комплексе с человеческим рецептором DPP4. Cell Res. 23 , 986–993 (2013).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 120.

    Chen, Y. et al. Кристаллическая структура рецептор-связывающего домена недавно возникшего коронавируса ближневосточного респираторного синдрома. J. Virol. 87 , 10777–10783 (2013).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 121.

    Ли, Ф. Механизмы распознавания рецепторов коронавирусов: десятилетие структурных исследований. J. Virol. 89 , 1954–1964 (2015).

    PubMed Google Scholar

  • 122.

    Cockrell, A. S. et al. Мышиная дипептидилпептидаза 4 не является функциональным рецептором коронавирусной инфекции ближневосточного респираторного синдрома. J. Virol. 88 , 5195–5199 (2014).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 123.

    van Doremalen, N. et al. Ограничение видов-хозяев коронавируса ближневосточного респираторного синдрома через его рецептор, дипептидилпептидазу 4. J. Virol. 88 , 9220–9232 (2014).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 124.

    Peck, K. M. et al. Гликозилирование DPP4 мыши играет роль в подавлении коронавирусной инфекции ближневосточного респираторного синдрома. J. Virol. 89 , 4696–4699 (2015).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 125.

    Peck, K. M. et al. Допустимость ортологов дипептидилпептидазы 4 к коронавирусу ближневосточного респираторного синдрома определяется гликозилированием и другими сложными детерминантами. J. Virol. 91 , e00534–17 (2017).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 126.

    Yang, Y. et al. Использование рецепторов и проникновение в клетки коронавируса летучих мышей HKU4 дает представление о передаче коронавируса MERS от летучих мышей к человеку. Proc. Natl Acad. Sci. США 111 , 12516–12521 (2014).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 127.

    Wang, Q. et al. Происхождение БВРС-КоВ у летучих мышей подтверждается использованием коронавирусом летучих мышей HKU4 человеческого рецептора CD26. Клеточный микроб-хозяин 16 , 328–337 (2014).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 128.

    Gong, L. et al. Новый коронавирус, подобный летучей мыши-HKU2, у свиней, Китай, 2017 г. Emerg. Заразить. Дис. 23 , 9 (2017).

    Google Scholar

  • 129.

    Pan, Y. et al. Открытие нового кишечного альфа-коронавируса свиней (SeACoV) на юге Китая. Вет. Microbiol. 211 , 15–21 (2017).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 130.

    Lau, S. K. et al. Полная последовательность генома коронавируса летучих мышей HKU2 от китайских подковообразных летучих мышей выявила гораздо меньший ген-шип с эволюционной линией, отличной от остальной части генома. Вирусология 367 , 428–439 (2007).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 131.

    Ван, Н.и другие. Серологические доказательства заражения людей коронавирусом, вызванным атипичной пневмонией летучих мышей. Китай. Virol. Грех. 33 , 104–107 (2018).

    PubMed Google Scholar

  • 132.

    Memish, Z. A. et al. Коронавирус ближневосточного респираторного синдрома у летучих мышей, Саудовская Аравия. Emerg. Заразить. Дис. 19 , 1819–1823 (2013).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 133.

    Huynh, J. et al. Доказательства, подтверждающие зоонозное происхождение штамма человеческого коронавируса NL63. J. Virol. 86 , 12816–12825 (2012).

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 134.

    Tao, Y. et al. Эпиднадзор за коронавирусами летучих мышей в Кении позволяет выявить родственников коронавирусов человека NL63 и 229E и их историю рекомбинации. J. Virol. 91 , e01953–16 (2017). В этой статье описывается происхождение от летучих мышей двух коронавирусов человека, NL63 и 229E .

    CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 135.

    Corman, V. M. et al. Связь повсеместного человеческого коронавируса с верблюдами-верблюдами. Proc. Natl Acad. Sci. США 113 , 9864–9869 (2016).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 136.

    Дрекслер, Дж. Ф., Корман, В. М. и Дростен, К. Экология, эволюция и классификация коронавирусов летучих мышей после атипичной пневмонии. Antiviral Res. 101 , 45–56 (2014).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 137.

    Guindon, S. et al. Новые алгоритмы и методы для оценки филогении максимального правдоподобия: оценка производительности PhyML 3.0. Syst. Биол. 59 , 307–321 (2010).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 138.

    Lin, X. D. et al. Обширное разнообразие коронавирусов у летучих мышей из Китая. Вирусология 507 , 1–10 (2017).

    CAS PubMed Google Scholar

  • 139.

    Маккей И. М. и Арден К. Э. Коронавирус MERS: диагностика, эпидемиология и передача. Virol. Дж. 12 , 222 (2015).

    PubMed PubMed Central Google Scholar

  • 140.

    Эмсли, П. и Коутан, К. Кут: инструменты построения моделей для молекулярной графики. Acta Crystallogr. D Biol. Кристаллогр. 60 , 2126–2132 (2004).

    Google Scholar

  • 141.

    Li, F. et al. Структура домена связывания рецептора шипа коронавируса SARS в комплексе с рецептором. Наука 309 , 1864–1868 (2005).

  • События распространения SARS-CoV-2 | Science


    Мутировавший штамм коронавируса 2 тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV-2) был обнаружен на норковых фермах, таких как эта в Нестведе, Дания, что привело к массовой выбраковке в ноябре 2020 года.

    ФОТО: MADS КЛАУС РАСМУССЕН / РИТЦАУ SCANPIX / AFP ЧЕРЕЗ GETTY IMAGES

    Тяжелый острый респираторный синдром (SARS), ближневосточный респираторный синдром (MERS) и COVID-19, возникшие в последние десятилетия и вызванные различными штаммами коронавируса (CoV).Считается, что эти вирусы происходят от летучих мышей и передавались человеку через промежуточных хозяев. SARS-CoV был обнаружен у пальмовых циветт на рынках дикой природы и MERS-CoV у верблюдов-верблюдов ( 1 ), но прямой источник возбудителя COVID-19, SARS-CoV-2, до сих пор не установлен. На странице 172 этого выпуска Oude Munnink et al. ( 2 ) сообщает об углубленном исследовании инфекции SARS-CoV-2 у животных и людей, работающих или живущих на 16 норковых фермах в Нидерландах.Инфекции SARS-CoV-2 были выявлены у 66 из 97 (68%) владельцев, рабочих и их близких людей. Некоторые люди были инфицированы вирусными штаммами с сигнатурой последовательности животных, что свидетельствует о распространении SARS-CoV-2 туда и обратно между животными и людьми на норковых фермах.

    Помимо норки, несколько видов диких или домашних животных могут также переносить SARS-CoV-2 или связанные с ним вирусы. Экспериментальные инфекции и анализы сродства связывания между спайком SARS-CoV-2 (поверхностный белок, который опосредует проникновение в клетку) и его рецептором, ангиотензин-превращающим ферментом II (ACE2), демонстрируют, что SARS-CoV-2 имеет широкий диапазон хозяев ( 3 ).После вспышки SARS-CoV-2 несколько групп сообщили о связанных с SARS CoV у подковообразных летучих мышей в Китае и у панголинов, контрабандно ввезенных из стран Южной Азии, но, согласно сравнению геномных последовательностей, ни один из них не является прямым вирусом-предшественником SARS-CoV-2 ( 4 ). Было обнаружено, что домашние кошки и собаки, а также тигры в зоопарках естественным образом заражены SARS-CoV-2 от людей, но нет никаких доказательств того, что они могут заразить людей, и поэтому они вряд ли могут быть источниками-хозяевами. SARS-CoV-2 ( 4 , 5 ).

    По данным Всемирной организации здравоохранения животных, на сегодняшний день инфекции SARS-CoV-2 на норковых фермах зарегистрированы в восьми странах (Нидерланды, Дания, Испания, Франция, Швеция, Италия, США и Греция). ( 6 ). Помимо передачи вируса от животных человеку на фермах, серьезную озабоченность вызывают сети поставщиков холодных продуктов. В различных городах Китая было зарегистрировано несколько небольших вспышек COVID-19, вызванных зараженными вирусом сырыми морепродуктами или свининой из зарубежных стран.Было обнаружено, что сигнатуры вирусного генома во время этих вспышек отличались от вирусных штаммов, присутствующих в Китае ( 7 , 8 ). Имеются данные о том, что SARS-CoV-2 может выживать до 3 недель в мясе и на поверхности упаковок с холодной пищей без потери инфекционности ( 7 , 8 ). Таким образом, мясо животных, инфицированных SARS-CoV-2, или упаковка пищевых продуктов, зараженная SARS-CoV-2, может быть источником заражения человека (см. Рисунок).

    Это вызывает озабоченность в отношении общественного здравоохранения и сельского хозяйства в профилактике и борьбе с SARS-CoV-2.Большинство животных, инфицированных SARS-CoV-2, не демонстрируют очевидного клинического синдрома, и инфекции не могли бы быть распознаны без стандартного диагноза. Массовый отстрел норок на зараженных фермах — эффективный способ предотвратить дальнейшую передачу вируса. Однако его нельзя применять ко всем домашним животным (если обнаружены другие виды, являющиеся хозяевами SARS-CoV-2). Таким образом, из осторожности следует применять обширные и строгие карантинные меры во всех домашних хозяйствах с высокой плотностью поголовья животных.Поскольку вирус может перемещаться между некоторыми животными (такими как норка) и людьми, аналогичные стратегии следует применять к людям, занимающимся ключевыми профессиями, связанными с взаимодействием между животными и людьми, такими как животноводы, смотрители зоопарков или люди, работающие на бойнях. Примечательно, что доказательства передачи SARS-CoV-2 от животного человеку ограничены, за исключением норки. Следует изучить, являются ли другие домашние животные переносчиками SARS-CoV-2, могут ли они передавать его людям, а также факторы, связанные с вторичным распространением.

    РНК-геном SARS-CoV-2 кажется относительно стабильным во время передачи в человеческих популяциях, хотя накопленные мутации были обнаружены. Принято считать, что коронавирусы, как правило, быстро эволюционируют при переходе к другому виду. Чтобы снизить частоту ошибок репликации, коронавирусы кодируют несколько ферментов, обрабатывающих и проверяющих РНК, которые, как считается, повышают точность репликации вирусов. Тем не менее, вирусы, как правило, обладают пониженной верностью в пользу адаптации к новому виду хозяев ( 9 ), хотя механизмы, лежащие в основе этого явления, неясны.Белок коронавирусного шипа склонен к большему количеству мутаций, потому что он является первым белком взаимодействия вируса с хозяином и, таким образом, сталкивается с самым сильным давлением отбора. Эту молекулярную эволюцию можно наблюдать в геномах SARS-CoV, которые находились под более адаптивным давлением на ранней стадии эпидемии (от пальмовой циветты к человеку), чем на более поздних стадиях (от человека к человеку) ( 10 ).

    Возможные цепи передачи SARS-CoV-2

    Распространение коронавируса 2 (SARS-CoV-2) тяжелого острого респираторного синдрома, вероятно, произошло от летучих мышей и / или панголина (наследственный вирус) через неидентифицированных промежуточных животных-хозяев (прямой родительский вирус).Штаммы SARS-CoV-2 человека инфицируют восприимчивых домашних животных (таких как норка) и, вероятно, адаптируются к этим видам посредством мутаций. Вирус может передаваться от норки обратно к рабочим и близким людям. SARS-CoV-2 также может передаваться людям при контакте с зараженным сырым мясом или упаковкой пищевых продуктов.

    ГРАФИКА: MELISSA THOMAS BAUM / SCIENCE

    Мутации, которые происходят в SARS-CoV-2 у животных, могут усилить его патогенез или трансмиссивность у людей.У норок было обнаружено пять кластеров штаммов SARS-CoV-2, каждый из которых характеризовался конкретным родственным ему вариантом. В Дании штамм SARS-CoV-2 норки кластера 5 был менее иммуногенен по отношению к сыворотке пациентов с COVID-19, чем SARS-CoV-2 человека, из-за мутаций шиповых белков в штаммах норок ( 11 ). Этот штамм кластера 5 заразил не менее 12 человек, и клиническая картина, тяжесть и передача инфекции среди инфицированных аналогичны таковым у других циркулирующих штаммов SARS-CoV-2 человека ( 12 ).В настоящее время нет доказательств того, что какая-либо мутация SARS-CoV-2 у штаммов норок ускользает от нейтрализации антителами, предназначенными для нацеливания на преобладающие штаммы человека. Однако, учитывая возможный риск распространения SARS-CoV-2 между людьми и некоторыми животными, необходимо внимательно следить за мутациями в вирусном геноме инфицированных животных и людей, особенно в областях генома, влияющих на диагностические тесты, противовирусные препараты и вакцины. разработка.

    Ожидается, что вакцины позволят контролировать COVID-19.Вакцины были разработаны против распространенных в настоящее время штаммов вирусов и могут столкнуться с проблемами, если будет продолжаться распространение от животных. Мутации вирусного генома, вероятно, возникающие при межвидовой передаче от животных к человеку, вызывают опасения по поводу того, смогут ли нынешние вакцины защитить от новых штаммов в будущем. Обширное секвенирование вирусных геномов животных и людей и обмен данными во всем мире будут иметь центральное значение в усилиях по мониторингу ключевых мутаций, которые могут повлиять на эффективность вакцины.Лабораторные исследования должны проверить, влияют ли наблюдаемые мутации на ключевые характеристики вируса, включая патогенез, иммуногенность и перекрестную нейтрализацию. Более того, следует заранее рассмотреть вопрос о готовности вакцин на основе вновь обнаруженных вариантов. В долгосрочной перспективе следует также рассмотреть вопрос о вакцинации животных, чтобы избежать экономических потерь в сельском хозяйстве.

    Были споры о том, были ли летучие мыши или ящеры, которые несут коронавирусы с геномами, примерно на 90-96% похожими на SARS-CoV-2 человека, были животным источником первой вспышки среди людей ( 4 ).Эволюционный анализ вирусных геномов летучих мышей и ящеров показывает, что дальнейшие адаптации, будь то животные-хозяева или люди, произошли до того, как вирус вызвал пандемию COVID-19 ( 13 ). Следовательно, вид животных с высокой плотностью популяции, обеспечивающей естественный отбор, и компетентным белком ACE2 для SARS-CoV-2 — например, норка — мог бы стать возможным хозяином прямого предка SARS-CoV-2.

    Еще одна дискуссия касается источника SARS-CoV-2, вызвавшего вспышку COVID-19 в конце 2019 года.Текущие данные ставят под вопрос животное происхождение SARS-CoV-2 на рынке морепродуктов, где первые случаи были выявлены в Ухане, Китай. Учитывая обнаружение SARS-CoV-2 на поверхности импортных пищевых упаковок, контакт с зараженной сырой пищей может быть важным источником передачи SARS-CoV-2 ( 8 ). Недавно антитела против SARS-CoV-2 были обнаружены в образцах сыворотки человека, взятых за пределами Китая до того, как была обнаружена вспышка COVID-19 ( 14 , 15 ), что позволяет предположить, что SARS-CoV-2 существовал некоторое время до Первые случаи были описаны в Ухане.Ретроспективные исследования образцов до вспышки от норки или других восприимчивых животных, а также от людей должны быть проведены для выявления хозяев вируса-прямого предшественника и определения того, когда вирус распространился на людей.

    Благодарности: При поддержке Национального научного фонда Китая для выдающихся ученых, награда 81822028 (P.Z.) и Программы стратегических приоритетных исследований Китайской академии наук, награды XDB2

    01 (Z.-L.S.) и XDB2

    04 (P.З.).

    Неврологические проявления COVID-19, SARS и MERS

    Связаны ли коронавирусы с нейровоспалительным заболеванием?

    Коронавирусы человека (HCoV), как известно, обладают нейротропными и нейроинвазивными свойствами. Desforges et al. выдвигают гипотезу о том, что коронавирусы человека нейровирулентны, поскольку они могут способствовать развитию краткосрочных и долгосрочных неврологических расстройств, таких как энцефаломиелит и рассеянный склероз [6,7,8]. Наличие РНК HCoV в ЦНС человека подтверждает эти свойства [9].

    Вирусы, как правило, могут проникать в головной и спинной мозг через гематогенное или ретроградное нейрональное распределение. Уже известно, что HCoV может также передаваться из дыхательных путей в центральную нервную систему (ЦНС) транснейрональным и гематогенным путями [10].

    HCoV может сохраняться в мозге человека, поэтому предполагается, что могут развиваться долгосрочные последствия, связанные с возникновением или обострением хронических неврологических заболеваний, как это уже описано для коронавирусов человека HCOV-229E и HCOV-OC43.Последние обнаружены при различных неврологических заболеваниях, в том числе при рассеянном склерозе [9]. В нескольких недавних статьях сообщается о связанных случаях энцефалита, острого вялого паралича и других неврологических симптомов, таких как синдром Гийена-Барре или ADEM, как возможных осложнений инфекции HCoV [6].

    В этой статье мы сосредоточимся на неврологических проявлениях, описанных при SARS, MERS и COVID-19.

    Первоначальные клинические признаки SARS, MERS и COVID-19 включают неспецифические неврологические симптомы.

    SARS может проявляться неспецифическими симптомами, такими как стойкая лихорадка, непродуктивный кашель, миалгия, одышка и головная боль.Примерно у 20% пациентов исходная картина осложнялась острым респираторным дистресс-синдромом [6]. Помимо дыхательных путей, инфекция SARS-CoV также может поражать клетки слизистой оболочки кишечника, эпителиальные клетки и нейроны почечных канальцев, а также клетки лимфоидной и ретикулоэндотелиальной системы. Как следствие, внелегочные симптомы, включая водянистую диарею и рвоту, также могут быть частью клинической картины. Кроме того, также сообщалось о головокружении, тошноте, ухудшении общего самочувствия и спутанности сознания [5].

    Клиническая картина MERS также может быть неспецифической. Насморк, боль в горле, субфебрильная температура и миалгия могут проявиться еще до того, как виремия станет обнаруживаемой [4, 11]. В случае тяжелого заболевания может развиться острая респираторная недостаточность. В случае тяжелых заболеваний сообщалось о внелегочных проявлениях, включая желудочно-кишечные симптомы и острую почечную недостаточность, а также о неврологических проявлениях [11].

    Общие клинические признаки COVID-19 включают жар, кашель, боль в горле, головную боль, утомляемость, миалгию, аносмию и одышку.Инфекция может перерасти в пневмонию, дыхательную недостаточность, полиорганную недостаточность и смерть из-за чрезмерного повышения воспалительных цитокинов [1, 12].

    Неврологические проявления во время развития SARS

    Текущие данные, в основном из китайских исследований аутопсии мозга, подтверждают инвазию SARS-CoV в ЦНС [13, 14].

    Случаи, описанные в упомянутых ниже статьях и касающиеся неврологических проявлений во время инфекции SARS-CoV, представлены в таблице 1 [3].

    Таблица 1 Зарегистрированные неврологические проявления, связанные с инфекцией SARS-CoV
    Эпилепсия

    Hung et al.описали первые свидетельства попадания SARS-CoV в спинномозговую жидкость (CSF), вызывающую судороги. Они сообщили о случае 59-летней женщины, у которой случился эпилептический статус, связанный с атипичной пневмонией. И сыворотка, и спинномозговая жидкость дали положительный результат на РНК SARS методом ОТ-ПЦР [15].

    Lau et al. сообщили о случае 32-летней женщины, у которой на 22-й день болезни развился генерализованный тонико-клонический инсульт с обнаружением SARS-CoV в спинномозговой жидкости с помощью ОТ-ПЦР [7].

    Еще одним воздействием эпидемии атипичной пневмонии стало отрицательное влияние на контроль приступов из-за отмены противоэпилептического лекарственного лечения, поскольку многие пациенты избегали посещения больницы [16].

    Нервно-мышечные расстройства

    Нервно-мышечные расстройства при атипичной пневмонии — это преимущественно последствия с поздним началом и включают полинейропатию и миопатию в критических состояниях [17].

    Слабость мышц и повышенный уровень креатинкиназы в сыворотке крови встречаются более чем у 30% пациентов с SARS [18]. У пациентов с SARS со смертельным исходом Leung et al. изучили посмертные гистологические образцы мышц и описали миопатию, возникшую либо в результате тяжелой болезненной миопатии, либо в результате иммунного ответа против SARS-CoV [19].

    Миопатия при критическом заболевании и полинейропатия при критическом заболевании могут возникать в контексте, названном синдромом системной воспалительной реакции (SIRS). SIRS — это термин, включающий сепсис и полиорганную недостаточность, которые могут быть как аспектами SARS-CoV-инфекций, так и быть связаны с чрезмерным производством альфа-фактора некроза опухоли и оксида азота в макрофагах [20,21,22]

    ранее был связан со многими инфекционными заболеваниями, но редко встречается при SARS-CoV-инфекции [23].В серии случаев рабдомиолиз коррелировал с почечной недостаточностью и считался тяжелым проявлением атипичной пневмонии. Поэтому необходимо тщательно контролировать уровень креатинкиназы у больных ОРВИ [24].

    Обонятельная нейропатия

    В отличие от частого возникновения аносмии на ранних стадиях COVID-19 (см. Ниже), она является анекдотической для SARS и описывается только на поздних стадиях заболевания. Тем не менее, проверка обонятельной функции должна быть частью рутинного обследования пациентов с SARS [25].

    Инсульт

    В исследовании SARS было описано пять случаев ишемического инсульта крупных артерий. Предполагается, что у пациентов с ОРВИ может присутствовать прокоагулянтное состояние [26, 27]. Это может способствовать развитию тромбоэмболии крупных церебральных артерий, наряду с такими факторами, как системная гипотензия и сердечная дисфункция. Однако инсульт не является редкостью у тяжелобольных пациентов с сопутствующими заболеваниями. Кроме того, считается, что использование внутривенных иммуноглобулинов, используемых для лечения SARS, может играть роль в инсульте, связанном с SARS.Гипервязкость, вызванная внутривенным введением иммуноглобулинов у пациентов, уже предрасположенных к состоянию гиперкоагуляции из-за вирусной инфекции и воспалительной реакции, может играть ключевую роль при инсульте [26, 27].

    Хронический пост-SARS-синдром и вегетативная дисфункция

    Хронический пост-SARS-синдром описан Moldofsky et al. Синдром характеризуется стойкой утомляемостью, диффузной миалгией, слабостью, депрессией, невосстановительным сном с ассоциированными с REM-зависимыми апноэ / гипопноэ, повышенным циклическим изменяющимся паттерном ЭЭГ сна и аномалией сна альфа-ЭЭГ [28].

    Другие авторы предполагают, что длительная утомляемость и недомогание могут быть связаны с дисфункцией периферической и вегетативной нервной системы. Хроническая усталость может наблюдаться через несколько месяцев после выздоровления от острого заболевания. Одно исследование показывает, что вегетативная дисфункция присутствует у 50% выздоровевших пациентов с SARS. Субклинические ортостатические нарушения гемодинамики могут приводить к утомляемости и головокружению [29, 30].

    Неврологические проявления, связанные с инфекцией БВРС-КоВ

    Случаи, описанные в упомянутых ниже статьях и касающиеся неврологических проявлений во время инфекции БВРС-КоВ, представлены в таблице 2.

    Таблица 2 Зарегистрированные неврологические проявления, связанные с инфекцией БВРС-КоВ
    Поражение ЦНС

    Хотя это исключение, ЦНС может быть вовлечена в инфекцию БВРС-КоВ, в основном из-за аутоиммунной реакции через аутореактивные Т-клетки, которые распознают вирусные и миелиновые антигены как аналогичные молекулы, а не сама вирусная инфекция [31,32,33].

    Ретроспективное исследование, проведенное в Саудовской Аравии, показало, что у около 25% пациентов с MERS возникла спутанность сознания и 8.6% испытали приступ [34].

    Другая серия случаев трех пациентов с измененным уровнем сознания, варьирующимся от спутанности сознания до комы, атаксии и фокального моторного дефицита, описывает диффузное заболевание ЦНС с МРТ, показывающим новые начальные, широко распространенные двусторонние гиперинтенсивные поражения на Т2-взвешенных изображениях в белом веществе и подкорке. области различных долей, базальных ганглиев, мозолистого тела, моста, мозжечка и верхнего шейного отдела спинного мозга с неспецифическим повышенным уровнем белка в спинномозговой жидкости.

    Окончательными рабочими диагнозами у трех пациентов были, соответственно, острый диссеминированный энцефаломиелит, острый двусторонний неокклюзионный инсульт на фоне васкулопатии БВРС-КоВ и энцефалит [35].

    Отрицательный результат в спинномозговой жидкости для ОТ-ПЦР БВРС-КоВ может быть связан со сроками проведения теста, отсутствием поражения менингеальных сосудов, как показано на МРТ, или локализацией вируса внутри нейронов, как сообщается с SARS-CoV [36].

    Внутримозговое кровоизлияние в результате тромбоцитопении, диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови и дисфункции тромбоцитов возникает очень редко [32].

    В 2007 году Аль-Хамид и др. описал случай женщины-медицинского работника, у которой внезапно развился несахарный диабет и спонтанное массивное внутричерепное кровоизлияние с внутрижелудочковым расширением и грыжей миндалин.Количество тромбоцитов и профиль коагуляции не выявили никаких отклонений. Как указано в таблице, женщина страдала ожирением. Тяжесть MERS у пациентов с ожирением можно объяснить тем, что дипептидилпептидаза 4 (DPP4), трансмембранный белок, участвующий в проникновении в клетки вирусов, таких как MERS-CoV, сверхэкспрессируется у пациентов с ожирением [37, 38].

    Нервно-мышечные расстройства

    Сообщалось только об одном случае, когда 28-летний мужчина был ортопедом. После длительного пребывания в реанимации он страдал от слабости обеих ног и неспособности ходить, а также от онемения и покалывания при раздаче чулок.Ему поставили диагноз — критическое заболевание — полинейропатия [32].

    Ятрогенная неврологическая патология при лечении MERS

    Kim et al. опубликовал клинический случай четырех пациентов, у которых во время лечения MERS развились неврологические проявления. Всем пациентам в соответствующей больнице было назначено тройное противовирусное лечение, состоящее из подкожного пегилированного интерферона альфа-2а, высоких доз перорального рибавирина и перорального приема лопинавира / ритонавира. Характеристики, представление и диагноз зарегистрированных пациентов, у которых наблюдались неврологические симптомы во время лечения БВРС-КоВ-инфекции, обобщены в Таблице 3 [39].

    Таблица 3 Клиническая картина и диагностика пациентов с MERS, у которых возникли неврологические осложнения в результате лечения

    Интерферон альфа-2a является возможным лекарственным средством, вызывающим периферическую невропатию, сенсорную невропатию, васкулитную невропатию, паралич Белла, синдром Гийена-Барре, хроническую воспалительную демиелинизацию. полинейропатия и вегетативная полинейропатия [40,41,42]. Лопинавир / ритонавир — еще один возможный препарат, вызывающий периферическую невропатию [43]. Рибавирин не связан с периферической невропатией [42].

    Неврологические проявления, связанные с инфекцией SARS-CoV-2

    Подобно SARS-CoV, SARS-CoV-2 извлекает выгоду из рецептора ангиотензинпревращающего фермента 2 (ACE2-R) для проникновения во внутриклеточное пространство. Было описано, что мозг экспрессирует ACE2-R, который был обнаружен в глиальных клетках и нейронах, а также в эндотелиальных клетках и клетках гладких мышц. Следовательно, эти клетки и нейроны являются потенциальными мишенями для COVID-19. [44] COVID-19 может достигать центральной нервной системы через системный кровоток или через решетчатую пластинку решетчатой ​​кости на ранней или поздней стадии инфекции, как это было ранее. сообщается в SARS-CoV [45]. Как только нейронные ткани достигаются, взаимодействие между SARS-CoV-2 и ACE2-R может инициировать цикл вирусного роста с одновременным повреждением нейронов без значительного воспаления, как было замечено в случаях SARS-CoV [45].

    Что это означает в клинических условиях?

    Неврологические симптомы на ранних стадиях заболевания

    Они похожи на SARS и MERS и просто неспецифичны, включая головокружение, тошноту, рвоту и головную боль [46, 47].

    Часто сообщается о гипогевзии и гипосмии, которые стали кардинальным фактором в ранней диагностике COVID-19 [46].

    Скорее всего, это вызвано прямым проникновением в обонятельную луковицу, когда SARS-CoV-2 проникает в череп через решетчатую пластинку [44].

    В недавнем немецком отчете говорится, что это, кажется, хорошо отличить от постинфекционного обонятельного расстройства, вызванного ринитом или другой инфекцией верхних дыхательных путей: большинство пациентов описывают довольно внезапную, почти полную потерю запаха (то есть в основном аносмию, реже часто гипосмия). Пациенты с COVID-19 с меньшей вероятностью будут иметь другие назальные симптомы, такие как обструкция носового дыхания, клинически манифестный ринит или чрезмерное выделение из носа [48].

    Острая воспалительная демиелинизирующая полинейропатия может предшествовать респираторному заболеванию

    К концу апреля 2020 года, после 4 месяцев развития пандемии, синдром Гийена Барре (СГБ) был зарегистрирован менее чем у десяти пациентов с COVID-19, но о большем количестве случаев сообщается в прессе .

    Большинство случаев произошло на ранней стадии COVID-19 у пациентов с незначительными респираторными симптомами в начале СГБ. Хотя примечательно, что тяжесть заболевания как для GBS, так и для пневмонии может ухудшаться одновременно [49,50,51].

    В одном отчете описан СГБ у пациента без каких-либо респираторных симптомов, но с потерей запаха и вкуса, предшествовавшей СГБ [52].

    Цереброваскулярные заболевания во время COVID-19

    Недавно сообщалось о различных цереброваскулярных нарушениях, вероятно, из-за эндотелиальной дисфункции или гиперкоагуляции у пациентов с COVID-19.

    Эти заболевания включают ишемический инсульт, внутримозговое кровоизлияние и тромбоз венозного синуса головного мозга [44, 54,55,56]. Цереброваскулярное заболевание было связано с плохим исходом (более выраженный респираторный дистресс, более выраженная полиорганная дисфункция и более высокая смертность) у пациентов с COVID-19 [56].

    Оценка пациентов, проходящих обследование на инфекцию БВРС-КоВ, США, январь 2013 г. — октябрь 2014 г. — Том 21, номер 7 — июль 2015 г. — Журнал Emerging Infectious Diseases

    Принадлежность к авторам: Центры по контролю и профилактике заболеваний, Атланта, Джорджия, США

    Инфекция, вызванная коронавирусом ближневосточного респираторного синдрома (БВРС-КоВ), впервые была зарегистрирована в сентябре 2012 года у пациента со смертельной пневмонией в Саудовской Аравии ( 1 ).Последующее расследование показало, что более ранняя инфекция БВРС-КоВ произошла в Иордании в апреле 2012 года среди группы пациентов с пневмонией ( 2 , 3 ). По состоянию на 5 февраля 2015 г. Всемирная организация здравоохранения зарегистрировала 971 лабораторно подтвержденный случай во всем мире и не менее 356 связанных смертей ( 4 ). Все известные зарегистрированные случаи прямо или косвенно связаны с регионом Ближнего Востока; о большинстве случаев сообщили Саудовская Аравия и Объединенные Арабские Эмираты. Обычно первоначальными симптомами у пациентов с БВРС, обращающихся за медицинской помощью, являются лихорадка, озноб, кашель, одышка и миалгия.Эти симптомы часто прогрессируют до тяжелой инфекции нижних дыхательных путей, что может потребовать искусственной вентиляции легких и интенсивной терапии ( 5 , 6 ). Сообщалось о нескольких бессимптомных или легких случаях БВРС ( 7 ), особенно у здоровых молодых людей. Мало что известно о путях передачи, выделении вируса, факторах риска и резервуарах животных, хотя летучие мыши и верблюды были причастны к передаче и как резервуары ( 8 , 9 ). Кластеры передачи от человека к человеку были связаны с домашними хозяйствами и медицинскими учреждениями ( 2 , 3 , 5 ).

    Используя руководящие принципы и определения Всемирной организации здравоохранения ( 4 ), CDC разработал руководство по оценке пациента, находящегося под обследованием (PUI) на инфекцию БВРС-КоВ, сбору образцов, проведению лабораторных исследований и управлению инфекционным контролем (http: // www. cdc.gov/coronavirus/mers/index.html). Руководство PUI было создано, чтобы помочь поставщикам медицинских услуг определить, каких пациентов следует рассматривать для оценки и тестирования на БВРС-КоВ. Чтобы проинформировать государственные и местные департаменты здравоохранения об основных демографических и клинических характеристиках PUI и об использовании тестов, мы обобщили описательный анализ PUI в Соединенных Штатах.

    В октябре 2012 года CDC разработала методы ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени (рОТ-ПЦР) для обнаружения БВРС-КоВ ( 10 ). Первоначально CDC проводил тестирование, но 5 июня 2013 года Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов выдало разрешение на использование в чрезвычайных ситуациях, которое разрешило развертывание набора для анализа в лабораториях через сеть лабораторного реагирования. По состоянию на 12 марта 2015 года в 47 штатах и ​​округе Колумбия была возможность тестирования на БВРС-КоВ. Набор для анализа предназначен для обнаружения РНК БВРС-КоВ в образцах респираторных органов, сыворотки и стула.CDC также разработал серологические тесты для выявления антител к БВРС-КоВ; Эти тесты используются CDC с лета 2013 года. Поскольку БВРС-КоВ является новым патогеном, рекомендации и рекомендации CDC, касающиеся характеристик PUI, периодически обновляются по мере выявления новой информации о БВРС-КоВ и факторов риска. CDC рекомендует оценивать и тестировать PUI на БВРС-КоВ и другие распространенные респираторные патогены.

    1 января 2013 г. CDC начал сбор данных о PUI для инфекции MERS-CoV.Поставщики медицинских услуг для лиц с подозрением на MERS должны были связаться с отделом здравоохранения своего штата или местным отделом здравоохранения для консультации и организации тестирования на MERS-CoV, если это указано. О PUI сообщали CDC через государственные и местные департаменты здравоохранения с использованием одностраничной короткой формы PUI, которая не содержит личных идентификаторов ( 11 ). С момента внедрения краткая форма была пересмотрена 3 раза, чтобы отразить изменения в руководстве PUI. Краткая форма собирает информацию об основных демографических данных, симптомах, тяжести заболевания, госпитализации, истории поездок, факторах риска и результатах лабораторных тестов на момент тестирования на БВРС-КоВ.Последующий сбор данных по отсутствующей информации обычно не проводился. По крайней мере 370 (76%) PUI соответствовали руководящим характеристикам PUI для MERS. Остальные 120 (24%) PUI имели неполные клинические данные или данные о поездках; Наиболее часто отсутствующей информацией были данные о пневмонии у людей с респираторными симптомами и недавние поездки. Краткая форма была отправлена ​​в CDC в электронном виде по защищенному факсу или электронной почте. Данные, собранные в краткой форме, были введены в базу данных CDC с помощью Microsoft Access (Microsoft Corporation, Редмонд, Вашингтон, США).Для анализа данных использовалась версия 9.3 SAS (Институт SAS, Кэри, Северная Каролина, США).

    Рисунок 1

    Рис. 1. Количество PUI, протестированных на БВРС-КоВ (N = 490), по штатам, США, с 1 января 2013 г. по 31 октября 2014 г. Округ Колумбия, округ Колумбия; PUI, пациенты под обследованием.

    Рисунок 2

    Рис. 2. Количество PUI, протестированных на БВРС-КоВ (N = 490), по месяцам, США, 1 января 2013 г. — 31 октября 2014 г. PUI, пациенты, находящиеся под исследованием.

    В период с 1 января 2013 г. по 31 октября 2014 г. в CDC поступило в общей сложности 490 PUI из 45 штатов и округа Колумбия (Рисунки 1, 2; Таблица 1).Из 490 PUI 381 (78%) сообщили о поездках с Аравийского полуострова или соседних стран в США в течение 14 дней до начала болезни (Таблица 2). В общей сложности 113 (23%) PUI также сообщили о тесном контакте с недавно заболевшим путешественником с Аравийского полуострова или соседних стран в течение 14 дней с момента появления симптомов; наиболее частыми контактами были выходцы из Саудовской Аравии (55/113 [49%]), Объединенных Арабских Эмиратов (10/113 [9%]) и Катара (9/113 [8%]). Нерезиденты США составили 113 (23%) PUI.

    Наиболее частыми симптомами были кашель, лихорадка и одышка (Таблица 1). Всего было госпитализировано 292 (60%) ИВЛ, из которых 112 (38%) были госпитализированы в отделение интенсивной терапии и 61 (21%) потребовалась ИВЛ. Наиболее часто сообщаемыми основными состояниями среди PUI были иммуносупрессия и диабет. Одиннадцать (2%) PUI погибли.

    Всего 488 PUI оказались отрицательными на БВРС-КоВ с помощью рОТ-ПЦР, серологического анализа или того и другого. В мае 2014 года два PUI дали положительный результат на БВРС-КоВ с помощью серологического анализа и рОТ-ПЦР в образцах сыворотки и дыхательных путей, включая образцы из нижних дыхательных путей.Эти 2 пациента были медработниками, у которых респираторные симптомы развились в течение 14 дней после поездки из Саудовской Аравии; оба случая были идентифицированы как завозные MERS ( 12 , 13 ). Ни одному из пациентов не потребовалась ИВЛ.

    Наиболее часто обнаруживаемыми патогенами среди 490 PUI были вирус гриппа A и риновирус / энтеровирус; однако для 359 PUI (73%) тесты на другие патогены не проводились или обнаруженные патогены не сообщались (Таблица 1).Своевременное сообщение о PUI в CDC могло повлиять на сообщение ожидающих результатов тестов на этиологический патоген, не связанный с БВРС-КоВ.

    В настоящее время в США предпочтительным методом выявления MERS в PUI с недавним появлением симптомов является тестирование образцов нижних дыхательных путей, носоглотки и сыворотки с использованием анализа CDC rRT-PCR. Для PUI, у которых симптомы проявились более чем за 2 недели до сбора образца, рекомендуется тестирование с использованием серологического анализа CDC на БВРС-КоВ на одном образце сыворотки.CDC также рекомендует тестирование на общие респираторные патогены (например, вирус гриппа), но идентификация респираторного патогена не должна препятствовать тестированию на БВРС-КоВ ( 14 ). Руководство PUI помогает поставщикам медицинских услуг и департаментам здравоохранения штатов выявлять пациентов для оценки и тестирования на инфекцию БВРС-КоВ; однако, поскольку мы все еще изучаем естественное течение БВРС-КоВ, разумно рассмотреть возможность тестирования на БВРС-КоВ даже при отсутствии некоторых характеристик PUI, особенно при наличии строгой клинической или эпидемиологической оценки БВРС-КоВ.В процессе оценки инфекции БВРС-КоВ необходимо как можно скорее принять соответствующие меры инфекционного контроля для госпитализированных и негоспитализированных ПИН ( 15 ).

    Два случая завезенного MERS в США были выявлены у поставщиков медицинских услуг из Саудовской Аравии. Эти случаи послужили поводом для обновления руководства CDC, в котором рекомендовалось обследование и тестирование людей с менее тяжелыми респираторными заболеваниями, у которых были сильные эпидемиологические факторы риска, в частности, медицинская помощь, на инфекцию БВРС-КоВ.При обследовании лиц с респираторными заболеваниями следует определять род занятий, недавние поездки, недавнее посещение медицинского учреждения и контактных лиц. По мере увеличения объемов тестирования, особенно серологического, выявляются дополнительные случаи MERS, в том числе случаи с легкой симптоматикой и случаи среди более молодых людей. Эти случаи подчеркивают диапазон тяжести инфекции БВРС-КоВ и необходимость рассмотрения возможности тестирования лиц с совместимой историей поездок, которые могут не соответствовать клиническому профилю первоначально описанных пациентов.CDC планирует при необходимости пересмотреть руководство по MERS-CoV.

    Доктор Шнайдер — старший медицинский эпидемиолог отдела вирусных заболеваний CDC. В настоящее время ее исследовательские интересы включают респираторные вирусы.

    Вершина

    Выводы, выводы и мнения, выраженные авторами, работающими в этом журнале, не обязательно отражают официальную позицию Министерства здравоохранения и социальных служб США, Службы общественного здравоохранения, Центров по контролю и профилактике заболеваний или аффилированных с авторами учреждения.Торговые наименования используются только для идентификации и не подразумевают одобрения какой-либо из вышеперечисленных групп.

    Отчет о двух случаях и обзор литературы

    Ближневосточный респираторный синдром Коронавирус (БВРС-КоВ) был впервые обнаружен в сентябре 2012 года в Саудовской Аравии. С тех пор он стал причиной более 1600 лабораторно подтвержденных случаев заболевания и более 580 смертельных исходов. Клиническое течение болезни варьируется от бессимптомной инфекции до тяжелого заболевания нижних дыхательных путей с поражением нескольких органов и смертью.Заболевание может вызывать легочные, почечные, гематологические и желудочно-кишечные осложнения. В этой статье мы сообщаем о неврологических осложнениях БВРС-КоВ у двух взрослых пациентов и предполагаем их патофизиологию. У первого пациента было внутримозговое кровоизлияние в результате тромбоцитопении, диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови и дисфункции тромбоцитов. Второй случай — полинейропатия в критическом состоянии, осложняющая длительное пребывание в отделении интенсивной терапии. В этих случаях неврологические осложнения были вторичными по отношению к системным осложнениям и длительному пребыванию в ОИТ.Для дальнейшего понимания патологического механизма необходимы вскрытие трупа.

    1. Введение

    Ближневосточный респираторный синдром Коронавирус (БВРС-КоВ) был впервые выявлен и изолирован в Джидде, Саудовская Аравия, у 60-летнего мужчины с острой пневмонией, осложненной почечной недостаточностью и смертью [1] . После этого отчета до конца 2015 года было зарегистрировано более 1600 лабораторно подтвержденных случаев заражения БВРС-КоВ в 26 странах. Среди них более 580 умерли, что составляет около 35% от общего числа случаев [2].Синдром обычно представляет собой заболевание нижних дыхательных путей, которое включает лихорадку, кашель и одышку, которые могут прогрессировать до острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС), полиорганной недостаточности и смерти [3]. Неврологические осложнения БВРС-КоВ были описаны в литературе только один раз в трех случаях из Эр-Рияда, Саудовская Аравия [4]. В другой статье из Саудовской Аравии сообщается о путанице при представлении симптомов 18 (25,7%) из 70 подтвержденных случаев БВРС-КоВ [5]. В этой статье мы сообщаем о двух случаях неврологических осложнений БВРС-КоВ, которые затронули как центральную, так и периферическую нервную систему, и предполагаем их патофизиологию.

    2. Метод

    Мы ретроспективно рассмотрели все случаи БВРС-КоВ, госпитализированные в Медицинском городке им. Короля Абдулазиза, Джидда, с начала эпидемии в 2012 году. Мы выявили в общей сложности 120 подтвержденных случаев инфекции БВРС-КоВ. Объектами нашего исследования были два пациента с неврологическими осложнениями БВРС-КоВ. Они были помещены в разные палаты и находились под контролем разных медицинских бригад до поступления в отделение интенсивной терапии (ОИТ). Были рассмотрены клинические, лабораторные и радиологические данные этих случаев.Тестирование на БВРС-КоВ проводили с использованием полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени (ОТ-ПЦР). Это исследование было одобрено институциональным наблюдательным советом (IRB) Международного медицинского исследовательского центра имени короля Абдаллы (KAIMRC), и, поскольку это обсервационное исследование, согласие было отклонено в соответствии с политикой учреждения.

    3. Пациентка 1

    Женщина тридцати четырех лет, у которой впервые был диагностирован сахарный диабет, поступила в отделение неотложной помощи с высокой температурой в анамнезе продолжительностью один день.Лихорадка была зафиксирована дома и купирована пероральным приемом парацетамола. Она отрицала кашель или одышку в анамнезе, но жаловалась на общую боль в костях и усталость. Системное обследование показало, что у женщины плохого вида лихорадка, без увеличения лимфатических узлов или кожной сыпи. Обследование грудной клетки показало уменьшение поступления воздуха с обеих сторон с крепитацией. Неврологическое обследование было нормальным, включая высшие психические функции, черепные нервы, двигательную систему, сенсорную систему и координацию. Лабораторные исследования при поступлении выявили 4 лейкоцитов.7 с лимфопенией, гемоглобином 11,3, тромбоцитами 203, СОЭ 47 и СРБ 56,5. Визуализация грудной клетки показала однородное помутнение правого легкого, и пациенту было начато внутривенное введение гидратации, тазоцина и азитромицина. ОТ-ПЦР показал положительный результат на БВРС-КоВ из мокроты. Ей стало улучшаться, и ее состояние стабилизировалось. К сожалению, через две недели после госпитализации у пациента появилась сильная головная боль, тошнота и рвота. Через несколько часов уровень ее сознания ухудшился, и GCS упал до 3/15.Срочная КТ показала внутримозговое кровоизлияние в правую лобную долю с массивным отеком мозга и сдвигом средней линии (рис. 1). Ей сделали интубацию и искусственную вентиляцию легких, а также внутривенно вводили маннит и дексаметазон. Лабораторные исследования выявили картины диссеминированного внутрисосудистого свертывания, включая тромбоцитопению и пролонгированный профиль коагуляции. К сожалению, у нее начали развиваться полиорганная недостаточность и признаки необратимой дисфункции ствола головного мозга, и она умерла через два месяца.


    4. Пациент 2

    Мужчина 28 лет, ординатор-ортопед, поступил в отделение неотложной помощи с четырехдневной историей лихорадки, генерализованной миалгии, головокружения и продуктивного кашля. Он сообщил историю контактов с подтвержденным случаем БВРС-КоВ. Он был помещен в изолированную палату в связи с острым вирусным заболеванием с бронхитом, и ему было начато поддерживающее и симптоматическое лечение азитромицином и осельтамивиром. Он был полностью обследован, и на 13 день после поступления ОТ-ПЦР на БВРС-КоВ дала положительный результат по респираторным секретам.С момента поступления его лихорадка никогда не снижалась, а дыхательные функции постепенно ухудшались из-за десатурации и потребности в добавках с высоким содержанием кислорода. На 4-й день после поступления его интубировали, искусственно вентилировали и перевели в отделение интенсивной терапии. В отделении интенсивной терапии у пациента было бурное течение с вторичной бактериальной пневмонией, при которой антибиотики были назначены полными курсами. В конце концов он поправился, экстубировал и перешел на пол. В полу потребовалась консультация невролога из-за слабости обеих ног и неспособности ходить с онемением и покалыванием при раздаче чулок.Его обследовали на всем протяжении, включая нейровизуализацию, анализ спинномозговой жидкости, исследования скорости нервной проводимости (NCV) и ЭМГ. МРТ всего позвоночника и анализ спинномозговой жидкости в норме. Исследования NCV показали низкую амплитуду при нормальной латентности и скорости проведения, особенно в нижней конечности, что указывает на аксональную полинейропатию, зависящую от длины. Окончательный диагноз — полинейропатия в критическом состоянии, осложняющая длительное пребывание в ОИТ. Он получал внутривенные иммуноглобулины 400 мг / кг ежедневно в течение пяти дней и тщательно контролировал его дыхательные функции.Он также ежедневно получал обширную физиотерапию и был отправлен домой через 40 дней после госпитализации. Через шесть месяцев его осмотрели в клинике, и состояние его здоровья постепенно улучшалось.

    5. Обсуждение

    Коронавирусы — это семейство оболочечных одноцепочечных вирусов с положительной РНК, которые преобладают у летучих мышей и могут поражать многие другие виды, включая человека. Название corona обозначает коронообразный вид поверхностных выступов вируса под электронным микроскопом.Они могут вызывать респираторные, желудочно-кишечные, печеночные и неврологические заболевания у различных видов [1]. Они сгруппированы в четыре разных рода: альфа, бета, гамма и дельта коронавирусы. Существует шесть типов коронавирусов, поражающих людей и, следовательно, называемых коронавирусами человека (HCoV): HCoV-229E, HCoV-OC43, HCoV-NL63, HCoV-HKU1, SARS-CoV и MERS-CoV (Таблица 1) [6 ]. Считается, что летучие мыши являются естественным резервуаром коронавирусов, а вирусы могут передаваться к человеку через промежуточный резервуар.Доказано, что эти вирусы обладают способностью преодолевать видовой барьер и заражать людей и других животных [7]. Заражение человека коронавирусами было в основном легким и безвредным, за исключением SARS-CoV и MERS-CoV, где они вызывают тяжелую заболеваемость и смертность. Среди коронавирусов человека HCoV-229E, HCoV-OC43, SARS-CoV и совсем недавно было доказано, что MERS-CoV связаны с неврологическими заболеваниями [4, 5, 8].

    9 1763 Капельки SARS 9176 3 Летучие мыши, енотовидные собаки и циветты

    63 верблюдов 3 верблюдов 3 известный как CD26


    Вирус Год открытия Резервуар Рецептор Тип клеток Зараженный Способ передачи Клиническая картина и прогноз

    OC43 1966 Летучие мыши Рецептор неизвестен, сиаловая кислота и вовлеченность HLA класса 1 Ресничные эпителиальные клетки дыхательных путей, макрофаги в культуре и нейронные клетки Droplets Инфекция верхних дыхательных путей, желудочно-кишечная инфекция и пневмония Легкая и безвредная

    229E 1967 Летучие мыши и верблюды APN эпителиальных клеток дыхательных путей

    ячейки
    Насморк, кашель и лихорадка Инфекция верхних дыхательных путей, желудочно-кишечная инфекция и пневмония Легкая и безвредная

    NL63 17 B1 клетки Капли Лихорадка, кашель, боль
    горло и ринит
    Инфекции верхних и нижних дыхательных путей, ассоциированные с крупом у детей Легкие и безвредные

    HKUU Неизвестно Эпителиальные клетки ресничных дыхательных путей Капли Ринорея, лихорадка, кашель, хрипы и миалгия Инфекция верхних дыхательных путей
    и пневмония,
    кишечные симптомы
    2003 ACE2, роль DC-SIGN, также известного как CS209 Эпителиальные клетки, реснитчатые клетки и пневмоциты типа II Капли Недомогание, головная боль, озноб, миалгия, лихорадка, кашель и одышка Инфекция нижних дыхательных путей, пневмония, диффузное поражение альвеол и ОРДС Тяжелое респираторное заболевание с высокой заболеваемостью и смертностью

    MERS 2012 Эпителиальные клетки дыхательных путей, почечные эпителиальные клетки и дендритные клетки Капли Лихорадка, кашель и затрудненное дыхание Инфекция нижних дыхательных путей, пневмония, ОРДС, почечная недостаточность и полиорганная недостаточность Тяжелое респираторное заболевание с высокая заболеваемость и смертность

    HLA : лейкоцитарный антиген человека, APN: аминопептидаза N, ACE2: ангиотензинпревращающий фермент 2, DC-SIGN: молекула межклеточной адгезии, специфичная для дендритных клеток, нонинтегрин, захватывающий 3, CD209: кластер дифференцировки 209, DPP4: дипептидилпептидаза 4, CD26: кластер дифференциации 26, ОРДС: острый респираторный дистресс-синдром.

    БВРС-КоВ впервые появился в сентябре 2012 года в Саудовской Аравии у 60-летнего мужчины, умершего от дыхательной и почечной недостаточности и полиорганного поражения [1]. Считается, что он произошел от летучих мышей и передан людям через верблюдов-верблюдов в качестве промежуточного хозяина. Верблюды-однодневки являются частью культуры и экономических ресурсов для многих бизнесменов и малообеспеченных граждан Саудовской Аравии. Хотя летучие мыши в большом количестве встречаются в Африке, Америке, Азии и Европе, они также были обнаружены в небольшом количестве в пещерах и горах Саудовской Аравии [9].Болезнь у верблюдов может протекать так же, как простуда. Однако это может привести к катастрофическим последствиям для человека. У людей вирус вызывает заболевание нижних дыхательных путей и в тяжелых случаях может прогрессировать до ОРДС, полиорганной недостаточности и смерти. Пожилые люди и пациенты с множественными сопутствующими заболеваниями оказываются более уязвимыми и имеют плохой прогноз [3]. Наиболее пострадавшей страной была Саудовская Аравия, на которую приходится более трех четвертей подтвержденных случаев в мире. До конца 2015 г. в Саудовской Аравии было зарегистрировано 1280 лабораторно подтвержденных случаев заболевания [10].Способ передачи полностью не изучен, но считается, что он передается при длительном тесном контакте с инфицированным человеком или верблюдом. Средний инкубационный период БВРС-КоВ составляет от пяти до шести дней и колеблется от двух до шестнадцати дней [3]. На сегодняшний день не существует эффективного лечения БВРС-КоВ, и пациенты получают поддерживающее лечение в зависимости от потребности пациента [11]. Были предприняты некоторые попытки разработать вакцину, но на сегодняшний день нет эффективной и одобренной вакцины от БВРС-КоВ [12].

    Вирусы, как правило, могут проникать в головной и спинной мозг через гематогенное или ретроградное распространение нейронов. Гематогенное распространение происходит через виремию (присутствие и размножение данного вируса в кровотоке). С другой стороны, ретроградное распространение вируса происходит, когда данный вирус поражает нейронную ткань на периферии с последующим распространением в ЦНС с использованием транспортных механизмов внутри нейронов для получения доступа к пораженным уязвимым областям.Примеры последнего типа включают бешенство и энцефалит, вызванный вирусом простого герпеса [13]. Хотя исследования показали, что некоторые коронавирусы обладают нейротропными и нейроинвазивными свойствами у различных хозяев, включая людей, свиней и грызунов, MERS-CoV никогда не выделялся из нервных тканей или жидкостей пораженных людей [8]. Это может быть связано с устойчивостью коронавирусов к культивированию с помощью систем культивирования in vitro. Кроме того, обычные услуги по культивированию коронавирусов недоступны в большинстве клинических лабораторий, а процесс выделения требует использования трудоемких культур эмбриональных органов, что требует много времени [14].В некоторых сообщениях объясняется механизм, с помощью которого коронавирусы достигают нервной системы, в основном гематогенным путем, когда вирус может либо оставаться в спящем состоянии в течение периода, прежде чем он сможет заразить эндотелиальные клетки гематоэнцефалического барьера, либо инфицировать лейкоциты, которые станут резервуар для распространения на другие сайты [8]. Это никогда не было доказано исследованиями. Кроме того, гематоэнцефалический барьер обладает рядом защитных свойств, препятствующих проникновению вирусов в мозг.В недавнем сообщении Joob и Wiwanitkit они предположили, что размер MERS-CoV (150–320 нм) является препятствием для проникновения через поры размером 1 нм в гематоэнцефалический барьер [15]. С нашей точки зрения и путем обзора исследований нейровизуализации, мы не обнаружили какого-либо менингеального усиления в большинстве случаев, которые подтверждают эту теорию. Мы предлагаем другую теорию, а именно аутоиммунную теорию с несколькими вовлечениями нервных тканей и кровеносных сосудов через аутореактивные Т-клетки, распознающие как вирусные, так и миелиновые антигены как сходные молекулы.Этот иммунный ответ, участвующий в индукции или обострении невропатологий, встречается конкретно у генетически предрасположенных людей [16]. Эта теория преобладает при объяснении неврологических осложнений других вирусов, таких как пандемический грипп A h2N1 pdm09 [17]. Это имеет терапевтическое значение, которое включает возможное улучшение при раннем применении пульсовой стероидной терапии и внутривенного введения иммуноглобулина до того, как произойдет повреждение тканей. Ранее в литературе сообщалось о стероидах и иммуноглобулинах для лечения пациентов, инфицированных SARS-CoV, наряду с рибавирином.Не было доказано, что они эффективны или снижают заболеваемость или смертность от болезни. Фактически, четыре исследования сообщили о вреде из-за стероидной терапии в виде аваскулярного некроза и стероид-индуцированного психоза у пациентов, инфицированных SARS-CoV [18]. Стероиды также использовались эмпирически для лечения некоторых пациентов, инфицированных БВРС-КоВ, без доказанной пользы или наблюдаемого положительного эффекта [19]. Однако мы считаем, что использование стероидов в случаях инфицирования БВРС-КоВ, которые проявляются или развиваются неврологическими осложнениями, будет полезно для снижения смертности и помощи в лечении заболевания благодаря их известным преимуществам при лечении неврологических заболеваний.Отсутствие опубликованных в литературе по этой теме исследований аутопсии может способствовать тому, что объяснение неврологических осложнений коронавирусов остается неясным.

    В наших случаях ни одна из упомянутых выше теорий не способствует развитию, поскольку у наших пациентов наблюдались последствия системных осложнений. Первый случай объяснен внутримозговым кровоизлиянием в результате тромбоцитопении, диссеминированного внутрисосудистого свертывания и дисфункции тромбоцитов. Второй случай — полинейропатия в критическом состоянии, осложняющая длительное пребывание в отделении интенсивной терапии.Он полностью выздоровел с помощью поддерживающих мер, иммуномодулирующего лечения и физиотерапии. Три случая, описанные в литературе ранее вместе с нашими случаями, обобщены в таблице 2.


    Пациент Возраст / пол Наличие симптомов Сопутствующие заболевания Диагностика 917 Результат Причина смерти

    Пациент 1 [4] 74 / M Атаксия, рвота, спутанность сознания и лихорадка Диабет, гипертензия, 56 и дислипитическая энцефалита
    (ADEM)
    Антибиотики широкого спектра действия, осельтамивир,
    бронходилататоров, метилпреднизолон, внутривенная седация, нейромышечные блокаторы, ингаляционный оксид азота, вазопрессоры, заместительная почечная терапия, пегинтерферон альфа-2b и рибавирин
    Смерть Общая смерть состояние и ухудшение сердечно-сосудистой
    и дыхательной статус

    Пациент 2 [4] 57 / M Гриппоподобное заболевание, лихорадка и гангренозная болезнь стопы Диабет, гипертония и заболевание периферических сосудов Двусторонняя передняя мозговая артерия
    инсульт
    Антибиотики широкого спектра действия Смерть Тяжелый шок, острое повреждение почек и множественная остановка сердца

    Пациент 3 [4] 45 / M Продуктивный кашель, ригидный кашель, спазмы , лихорадка и диарея Диабет, артериальная гипертензия, хроническая болезнь почек и ишемическая болезнь сердца Энцефалит Антибиотики широкого спектра действия, осельтамивир, заместительная почечная терапия, нейромышечные блокаторы, оксид азота, вазопрессоры, пегинтерферон альфа-2b и рибон-2b Восстановление Не применимо

    Пациент 4 34 / F Лихорадка, генерализованная боль в костях и утомляемость Сахарный диабет Внутримозговое кровоизлияние Внутривенное введение жидкости, тазоцин, азитромицин, маннитол и дексаметазон Смерть Смерть

    Пациент 5 28 / M Лихорадка, генерализованная миалгия, головокружение и продуктивный кашель Нет Критическая полинейропатия Азитромицин, антивирусная терапия , антивирусная терапия Восстановление Не применимо

    6.Заключение

    Инфекция БВРС-КоВ — серьезное заболевание, поражающее несколько органов и вызывающее легочные, почечные, гематологические и желудочно-кишечные осложнения. БВРС-КоВ вызвал тревожную тревогу в секторе здравоохранения из-за количества подтвержденных случаев и смертей, особенно из-за отсутствия лечения для борьбы с этой вирусной инфекцией. Органы здравоохранения выпустили различные инструкции по предотвращению передачи болезни. Исследования и исследования продолжаются, чтобы найти лекарство или, возможно, способы правильно вести этот случай и минимизировать заболеваемость и смертность от этого заболевания.Было предложено несколько механизмов, посредством которых этот вирус влияет на центральную нервную систему, но точный механизм до конца не изучен. Для дальнейшего понимания механизма необходимы вскрытие трупа.

    Конкурирующие интересы

    Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

    Границы | Тенденции в стратегиях диагностики MERS-CoV, SARS-CoV и SARS-CoV-2 (COVID-19): патентный обзор

    Введение

    Коронавирусы (CoV) представляют собой оболочечные вирусы с положительной РНК, которые принадлежат к семейству Coronaviridae, филогенетически подразделяются на роды α, β, γ и δ (1).β-коронавирусы включают SARS-CoV, MERS-CoV и SARS-CoV-2 (2), причем эти вирусы идентифицированы как возбудители зоонозных инфекций (3). Первый из них, тяжелый острый респираторный синдром (SARS), возник в Южном Китае в 2003 г. (1). Ближневосточный респираторный синдром (БВРС-КоВ) появился в Саудовской Аравии почти через десять лет после вспышки SARS-CoV (1, 3). Последний из них, тяжелый острый респираторный синдром, вызванный коронавирусом 2 (SARS-CoV-2), стартовал в китайской провинции Гуандун в ноябре 2019 года (4).

    Коммерчески доступные тесты на CoV в настоящее время делятся на две основные категории: (A) Молекулярные анализы для обнаружения вирусной РНК с использованием методов на основе ОТ-ПЦР или стратегий, связанных с гибридизацией нуклеиновых кислот, и (B) Серологические и иммунологические анализы, которые в значительной степени зависят от обнаружения антител. продуцируются людьми в результате воздействия вируса или в результате обнаружения антигенных белков у инфицированных лиц (5).

    CoV могут вызывать заболевания печени, нейронов и желудочно-кишечного тракта (6) и различные симптомы, такие как заболевание нижних дыхательных путей, что может привести к прогрессирующей и потенциально летальной атипичной пневмонии с клиническими симптомами, включая лихорадку, недомогание, лимфопению, затрудненное дыхание и т. Д. в некоторых случаях также понос (6, 7).Есть много способов передачи вируса, включая личный контакт, передачу аэрозоля и передачу через прикосновение. «Скрытая» передача может происходить через бессимптомных инфицированных людей, передающих вирус (8).

    Было показано, что быстрое и точное обнаружение CoV полезно для предотвращения распространения болезни, а также для принятия решений руководителями общественного здравоохранения (9). Первым шагом в выявлении возможного присутствия вируса является измерение температуры человека, а физикальное обследование может помочь выявить пациентов с более тяжелым состоянием (6).Кроме того, образцы, такие как слюна, мазки из носа, экстракты трахеи и носоглотки, легочная ткань, мокрота, фекалии и кровь, должны быть изолированы и использоваться для тестирования (10, 11). Выделение вируса и обнаружение вирусных нуклеиновых кислот являются основными способами идентификации патогена (11). Полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой в реальном времени (rRT-PCR) была основным методом диагностики CoV и характеризуется быстрым обнаружением, хорошей чувствительностью и специфичностью (9, 12). Хотя ПЦР является «золотым стандартом» для обнаружения вирусов, были разработаны и другие методы для обнаружения РНК CoVs, в том числе несколько молекулярных методов, не основанных на ПЦР, таких как изотермическая амплификация нуклеиновых кислот (изотермическая амплификация с использованием петли — LAMP) и амплификации на основе последовательностей нуклеиновых кислот (9).

    Кроме того, обнаружение вирусов с использованием таких методов, как иммунофлуоресцентный анализ, прямой флуоресцентный анализ антител, белковый микрочип, полупроводниковые квантовые точки, быстрое обнаружение нуклеокапсидных белков на основе MAb и анализы микронейтрализации, которые можно использовать для быстрого исследования наличия вирусов, имеют также были предложены (6, 11). Иммуноанализы особенно полезны, поскольку в них можно использовать моноклональные антитела для обнаружения вирусных антигенов менее чем за 30 минут без необходимости в дорогостоящих инструментах (6).

    Наборы для обнаружения

    могут ускорить точную диагностику, но они имеют разные уровни чувствительности и специфичности теста (8, 13). Чувствительность теста характеризуется его способностью обнаруживать истинно положительный результат, то есть правильно идентифицировать людей, у которых есть заболевание. С другой стороны, специфичность идентифицирует истинно отрицательные, правильно идентифицируя людей, у которых нет заболевания (14). Однако достижение заявленных тестами значений специфичности и чувствительности может зависеть от того, как применяются тесты и как обрабатываются образцы.Параметры, которые могут быть изменены, включают процесс взятия пробы, ее транспортировку и хранение, а также подготовку и тестирование пробы (15). Тесты должны быть быстрыми и надежными, чтобы определять места вспышек вирусов и позволять органам здравоохранения предлагать соответствующие меры (16).

    Таким образом, этот обзор направлен на оценку патентов, касающихся тенденций в стратегиях диагностики лиц, инфицированных SARS-CoV, MERS-CoV и SARS-CoV-2. Предоставляя эти данные, мы стремимся внести свой вклад в усилия по борьбе с текущей пандемией.

    Методы

    В рамках настоящего обзора патентов в базах данных Европейского патентного ведомства (ЕПВ) и Всемирной организации интеллектуальной собственности (ВОИС) был проведен поиск названий и отрывков, содержащих дескрипторы «коронавирус и MERS», «коронавирус и COVID», «коронавирус и 2019- nCoV »и« коронавирус и атипичная пневмония ». Всего для предварительной оценки из баз данных было выявлено 402 патента, из которых 224 были исключены из-за дублирования. После тщательной проверки названий и аннотаций было исключено 120 патентов, которые не попали в фокус (диагностика заболевания) нашего обзора.Еще 18 были исключены из-за отсутствия полных текстов. После ознакомления с полным текстом патентов еще 13 патентов были исключены, так как не вошли в обзор. В результате этого процесса отбора 27 патентов были отобраны для нашего критического анализа в соответствии с целью исследования. На рисунке 1 показана стратегия систематического поиска и проверки, использованная в этом обзоре, основанная на заявлении PRISMA.

    Рисунок 1 . Схема патентного поиска и проверки.

    Патентный поиск и проверка

    Этот обзор охватывал патенты, опубликованные между 2003 и 2020 годами, период, который охватывает возникновение эпидемий SARS-CoV в Азии, MERS-CoV в Саудовской Аравии и нынешнюю пандемию SARS-CoV-2. Наибольшее количество патентов на методы диагностики, нацеленные на эти патогены, было зарегистрировано в период с 2003 по 2011 год (19 патентов) (рис. 2A).

    Рисунок 2 . Окончательный отбор патентов. (A) Дата публикации. (B) Страна публикации патента. CN, Китай; КР, Республика Корея; США, Соединенные Штаты Америки. Другие: Калифорния, Канада; DE, Германия; JP, Япония; NL, Нидерланды; SG, Сингапур; WO, Всемирная организация интеллектуальной собственности. (C) Заявитель на патент. (D) Международный патентный класс (IPC). Прочее: A61K, Препараты для медицинских, стоматологических или туалетных целей; C07H, сахара; их производные; нуклеозиды; нуклеотиды; C12N, Микроорганизмы или ферменты; их композиции; размножение, сохранение или поддержание микроорганизмов; мутации или генная инженерия; питательные среды; нуклеиновые кислоты.

    Китай (CN) произвел наибольшее количество патентов, с девятью, за ним следует Республика Корея (KR) с шестью патентами и Соединенные Штаты (США) с четырьмя патентами (Рисунок 2B). Эти страны обычно хорошо представлены в области подачи заявок на патенты благодаря своим передовым технологическим и научным секторам и, в этой области, их сильным новаторским достижениям в производстве методов диагностики заболеваний. Кроме того, в этих странах базируется большое количество медицинских и биотехнологических компаний (в том числе стартапов), которые являются мировыми лидерами в области диагностики и молекулярной биологии (17, 18).

    Патент может быть подан несколькими различными научными организациями, включая промышленные лаборатории, университеты и / или независимых исследователей. Как и ожидалось, сектор промышленных лабораторий подал наибольшее количество патентов (19 из 27 заявок на патенты) (рис. 2C). В промышленном секторе компании, подавшие заявки на патенты, включали Gen-Probe Incorporated, Biomerieux BV, Beijing Applied Biological Tech Co. Ltd., Adaltis Inc., Корейский научно-исследовательский институт бионауки и биотехнологии, Шанхайский институт биологических наук, Институт биотехнологии Могама и Самсунг Электроникс Ко.Ltd. Университеты подали восемь патентов, иногда в партнерстве с компаниями, а иногда и независимо. Из выявленных в обзоре патентов семь были зарегистрированы независимыми исследователями. Процесс сотрудничества между университетами и промышленностью в разработке инновационных продуктов для здоровья и в других областях — это глобальная тенденция, которая приносит пользу как университетам, так и промышленности и, в конечном итоге, обществу (19). Каждый зарегистрированный патент имеет Международную патентную классификацию (IPC), которая классифицирует изобретение на основе технологической области, к которой оно принадлежит.В настоящем обзоре код C12Q означает « Измерение или тестирование процессов с участием ферментов, нуклеиновых кислот или микроорганизмов; композиции или бумаги для испытаний, следовательно, способы приготовления таких композиций; контроль состояния в микробиологических или энзимологических процессах » был представлен в 15 патентах (рис. 2D), за ним следуют C07K (пептиды) и G01N (исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств) с четырьмя патентами на каждый.В патентах, указанных в обзоре, использовались два основных метода целевой амплификации и иммуноферментный анализ (ELISA).

    Методы и методы, использованные в патентах

    Методы усиления цели

    Методы амплификации стремятся использовать различные методы для многократной амплификации определенных участков генетического материала, присутствующего в образце, до обнаруживаемых диагностических уровней. Различные методы улучшают как чувствительность, так и специфичность техники, будь то путем добавления олигонуклеотидов и ферментов или путем контроля конкретных условий реакции.Большинство методов автоматизированы и дают количественные и точные результаты за короткий период времени. Они также устраняют необходимость в специализированном обучении и снижают риск заражения и человеческой ошибки (20). Эти методы позволяют производить рентабельные, воспроизводимые тесты с высокой чувствительностью и специфичностью, которые обеспечивают надежную диагностику (21). Существует два основных метода амплификации: полимеразная цепная реакция (ПЦР) и технологии изотермической амплификации (IAT), каждая из которых включает ряд методов, описанных ниже.

    Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

    ПЦР — это ферментативный метод, который разделяет две цепи ДНК для получения множества копий гена с использованием праймера для маркировки местоположения и ДНК-полимеразы для непрерывной сборки копии в каждом сегменте (9). ПЦР с обратной транскриптазой в реальном времени (рОТ-ПЦР) — это недавно разработанный метод обнаружения на основе ПЦР, используемый для обнаружения и количественного определения нескольких видов в образце (22). Вирусные антигены, вирусные РНК, ДНК и биомаркеры могут быть обнаружены с помощью рОТ-ПЦР крови / сыворотки и образцов тканей (23).рОТ-ПЦР — популярный метод, поскольку он имеет множество преимуществ, включая скорость, обеспечивающую простой и чувствительный количественный анализ (9, 24). Однако были ситуации, в которых рОТ-ПЦР давала ложноположительные результаты, что ограничивало ее клиническое использование для обнаружения (25). Другим признанным недостатком рОТ-ПЦР является ее относительно высокая стоимость, связанная с приобретением оборудования, обслуживанием и необходимыми реагентами по сравнению с другими методологиями (26). Примечательно, что нехватка реагентов, необходимых для рОТ-ПЦР во время вспышки SARS-CoV-2, была серьезным ограничением для использования этой методологии, особенно в развивающихся странах (27).

    Амплифицированный продукт и плавление зонда во время rRT-PCR распознавались по непрерывной флуоресценции (25), и ее измеряли после каждого цикла, причем ее интенсивность отражала количество ДНК в образце в определенный момент времени (28). Было разработано несколько видов rRT-PCR, таких как мультиплексная rRT-PCR, которая дает результаты, основанные на размере ампликона патогена при гель-электрофорезе. Однако этот метод имеет некоторые недостатки по сравнению с традиционной ПЦР, такие как невозможность контролировать размер ампликона без открытия системы и его несовместимость с некоторыми другими платформами (29).Количественная rRT-PCR (RT-qPCR) использует ту же методологию, но метод более эффективен, чем мультиплексная rRT-PCR, а также позволяет избежать контаминации (30).

    Тест-наборы

    RT-PCR страдают некоторыми ограничениями, такими как сложная работа; длительное время выполнения работ, требующее в среднем более 2–3 часов для получения результатов; их неспособность функционировать с низкой вирусной нагрузкой или с образцами, которые были собраны не очень тщательно; вариация в частоте диагностики; и потребность в дорогостоящем оборудовании и обученных специалистах для его использования (31, 32).Экспериментальный метод приводит к эффективности метода. Например, в тестах RT-PCR количество термических циклов может отражаться на концентрации вирусной РНК за счет увеличения количества циклов, что приводит к более высокой неопределенности в точности теста из-за небольшой вирусной нагрузки (33). По этой причине сообщается о высоком уровне ложноотрицательных результатов заражения COVID-19 (34).

    Патенты, идентифицированные в обзоре с использованием ПЦР

    В таблице 1 представлена ​​сводка опубликованных патентов на тесты на коронавирус SARS и MERS.Mei et al. (39) в 2004 году запатентовали многоканальный комбинированный микрожидкостный чип, пригодный для обнаружения вируса SARS. В изобретении используется метод ПЦР для реализации интермодального обнаружения RT-PCR, чтобы обеспечить лучшую точность, чувствительность, стабильность, простоту работы и быстрое обнаружение. Тест занимает 25 минут и является недорогим, поскольку праймер не требует флуоресцентной метки. Как правило, для обнаружения патогенов используется вложенная двойная ПЦР; однако его работа считается утомительной, а точность составляет всего 40–60%.Однако вирус SARS может быть обнаружен в очень низких концентрациях, предел обнаружения достигает 10 -2 копий / 100 мкл. Тип используемого образца — слюна пациента. Микрожидкостный чип основан на трубопроводе, резервуаре, содержащем жидкость, и реакционном резервуаре, расположенном на трубопроводе подачи пробы между резервуаром, содержащим жидкость. Материалы, из которых состоит микрожидкостный чип ПЦР, такие как поликарбонатный (ПК) пластик, кварц и стекло, устойчивы к светопроницаемости. В состав чипа входит множество резервуаров для жидкости, микроканалов и реакционных трубок миллиметрового размера или реакционных лунок (бассейнов) (62, 63).

    Таблица 1 . Опубликованы патенты на тесты на коронавирус SARS и MERS.

    Artus Ges Fuer Molekular Biolog (40) в 2004 году описал количественный метод ПЦР в реальном времени для обнаружения SARS. В наборах используются олигонуклеотиды для обнаружения вируса SARS с использованием биологического образца, такого как биологическая жидкость (в частности, мокрота), фекалии или кровь. Авторы изобретения заявляют, что изобретение обеспечивает эффективный, чувствительный и надежный метод qRT-PCR для обнаружения вирусов и позволяет обнаруживать все известные варианты вируса и исключать всех других близкородственных Coronaviridae.Преимущество метода заключается в количественном обнаружении вируса, связанного с SARS, с теоретическим пределом текучести 10 генома, что соответствует 120 копий РНК на мл биологического образца. Таким образом, метод ОТ-ПЦР верен как минимум в 95% исследованных случаев.

    Briese et al. (36) в 2004 году разработали анализ ПЦР и ОТ-ПЦР для обнаружения SARS-CoV. В изобретении используются биологические образцы, такие как биологические жидкости, включая спинномозговую жидкость, перикардиальную жидкость, перитонеальную жидкость, слюну, сыворотку, кал и мочу, и позволяет проводить быструю, чувствительную и специфическую молекулярную диагностику вируса.Кроме того, изобретение обеспечивает синтетическую последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую 10-30 последовательных нуклеотидов, включая N-область SARS. Более того, синтезированные цепи ДНК могут впоследствии служить дополнительными матрицами для тех же последовательностей праймеров, и поэтому ПЦР может использоваться для обнаружения существования определенной последовательности в образце ДНК. Чувствительность метода показала, что 500 копий в ~ 100 нг общей РНК, извлеченной посмертно у жертвы SARS.

    Wu и Gao (43) в 2004 году запатентовали целевую последовательность для идентификации вируса SARS-ассоциированного вируса с использованием технологии генной диагностики с использованием праймера RT-PCR, зонда с короткой ручкой и круглого кольца и набора.В изобретении кровь используется для быстрого, своевременного, специфического и чувствительного определения наличия вируса. Обнаружение может быть выполнено за 2 часа для 1–10 копий, что значительно повышает чувствительность обнаружения гибридизации. Более того, отбор целевой точки производился со стабильной точкой без мутировавшего участка длиной в диапазоне 120–180 п.н. Набор по изобретению включает экстракт РНК, раствор для ПЦР, положительный контроль и автономный реагент.

    Изобретение Иноуэ и Хонга (44) в 2005 году предоставило простой, чувствительный и специфический диагностический тест по сравнению с тремя доступными коммерческими тестами.Для обнаружения SARS-CoV использовался одноэтапный метод ПЦР, а не два обычных. Этот тест основан на качественном анализе амплификации нуклеиновых кислот для обнаружения SARS-CoV в образцах пациентов, таких как плазма, мазок из горла, сыворотка, слюна, мокрота, и использует специальные пары праймеров, разработанные из неструктурного белка SARS-CoV. 1 (NSP1), предполагаемая протеиназа. В изобретении предлагается набор для обнаружения ОТ-ПЦР на основе геля, который включает один или несколько праймеров и / или зондов и может содержать нуклеиновую кислоту положительного контроля или, по крайней мере, ее часть, содержащую область NSP1, в виде либо РНК, либо ДНК.

    Праймеры, используемые в изобретении, должны иметь длину от 16 до 20 нуклеотидов, и продукт амплификации может быть обнаружен путем определения длины продукта амплификации. Предпочтительная часть области NSP1 для амплификации составляет от 4 609 до 7 003 нуклеотидов. Три других теста (диагностика SARS Эйкена, Артуса и Roche) были использованы для сравнения эффективности изобретения, что обеспечило наиболее чувствительное обнаружение. Изобретение достаточно чувствительно, чтобы обнаруживать несколько молекул РНК в каждой реакции ОТ-ПЦР с получением результатов за часы.

    Кострикис (45) в 2005 году описал мультиаллельный анализ qRT-PCR на основе молекулярных маяков для обнаружения и различения между SARS-ассоциированными и другими изолятами CoV в клинических образцах, таких как носоглоточный аспират, стул или цельная кровь. Метод включает в себя толерантные к несоответствиям молекулярные маяки, четыре набора праймеров ПЦР для четырех различных вирусных генов и четыре разных молекулярных маяка, стандарт экзогенной РНК, который добавляется к образцу, который может быть подвергнут обратной транскрипции и амплифицирован одним из наборов праймеров. и пятый молекулярный маяк, который помечен другим флуорофором, специфичным для стандарта экзогенной РНК.

    Множественные последовательности-мишени по настоящему изобретению представляют собой гены S, E, M и N в SARS-CoV. Образцы, протестированные с использованием четырех генов, показали 100% специфичность. Таким образом, обнаружение четырех целевых аллелей в одной пробирке сводит к минимуму вероятность пропуска вируса в образце и увеличивает чувствительность и специфичность метода. Набор содержит реагенты для проведения реакций амплификации, включая ПЦР, а также для предварительной обработки образцов, включая реагент, необходимый для высвобождения и / или очистки CoV (45).

    В 2005 г. Lim et al. (46) разработали метод ПЦР и набор для выявления SARS-CoV. Данное изобретение обеспечивает набор праймеров, специфичных для CoV, и мишенями являются гены ORF1ab, S, E, M, N вируса. Набор праймеров может специфически обнаруживать вирус без перекрестной реактивности с другими CoV и снижать вероятность обнаружения ложных или ложноположительных результатов. ПЦР можно проводить в различных материалах, таких как полипропиленовые пробирки, 96-луночный планшет или микросхема ПЦР на основе силикона.Однако при использовании в микросхеме микросхемы ПЦР на основе кремния ПЦР также может быть проведена с помощью термоциклирования, что сокращает время реакции до 30 мин.

    Park et al. (50) в 2006 году запатентовали набор для обнаружения SARS с использованием олигонуклеотидов, включая праймер и / или зонд, который был более чувствительным и специфичным, чем обычные тесты. Изобретение может обнаруживать раннюю стадию инфекции с использованием ОТ-ПЦР и биологических образцов, таких как фекалии, для выделения и очистки вирусной РНК. В способе можно смешивать ферменты, содержащие ДНК-полимеразу и / или обратную транскриптазу, с реакционной смесью, содержащей олигонуклеотиды, и можно добавлять образец РНК к подготовленной смеси и реакционный раствор для амплификации, содержащий образец РНК, полученный с использованием процесса RT-PCR. .

    В 2008 году Парк (51) описал метод с использованием нуклеокапсида или антигена спайкового белка для диагностики SARS-CoV. Изобретение включает раствор, содержащий АТФ-церамид-N_моноклональное антитело SARS, хромогенное вещество. Антитело включает моноклональное антитело, а хромофор содержит фермент или золото. В этом методе в качестве типа образца используется кровь, а в качестве мишени для обнаружения вируса — гены IgG или N и S. Пациенту может быть поставлен диагноз только в том случае, если два разных образца дали положительный результат или один и тот же образец дал положительный результат дважды.

    В 2012 году Jeong et al. (54) сформулировали олигонуклеотид определенной последовательности и фармацевтическую композицию в качестве физиологически приемлемого носителя, который можно использовать для обнаружения SARS-CoV. В изобретении предложен способ лечения и диагностики с использованием олигонуклеотидного аптамера, который имеет особое сродство с нуклеокапсидом и имеет больший эффект, чем антитело, будучи меньшим по размеру. Кроме того, молекула нуклеотида нечувствительна к изменениям температуры и быстро регенерируется.Мишень, используемая в этом изобретении, может представлять собой белок N или IgG. Аптамеры, используемые в изобретении, включают лиганды одноцепочечной ДНК, поскольку они обладают высокой аффинностью и сложной структурой, которая связывается с целевым белком и может быть идентифицирована с использованием системной эволюции лигандов путем экспоненциального обогащения (SELEX). Метод SELEX разделяет высокоаффинные ДНК и РНК-лиганды на целевые молекулы, включая белки и небольшие органические молекулы. Фармацевтическая композиция может быть приготовлена ​​путем смешивания и использования веществ, таких как смазывающие вещества, разрыхлители, солюбилизаторы, диспергаторы, стабилизаторы, суспендирующие агенты, пигменты и другие.Однако его использование ограничено, поскольку образцы, проанализированные этим методом, должны обрабатываться в сертифицированных лабораториях, что приводит к задержке результатов (64).

    В 2012 году Kaiyuan et al. (55) описали пробирочный метод множественной флуоресцентной ПЦР-детекции для пяти типов коронавируса человека, OC43, 229E, NL63, HKU1 и SARS, который можно использовать в качестве реагента обнаружения для научных исследований и клинических применений. Образец, используемый в этой методике, представляет собой мазок из носоглотки, и зонды могут гибридизоваться с последовательностью нуклеиновой кислоты, амплифицированной праймерами.

    Изотермическое усиление мишени

    В отличие от ПЦР, методы изотермической амплификации требуют только одной температуры, что устраняет необходимость в термоциклерах (65). Этот метод быстр, чувствителен, не требует сильных источников энергии и легко реализуется в местах обслуживания или в ситуациях с ограниченными ресурсами. Однако этот метод имеет некоторые недостатки, такие как проблема создания совместимых пар праймеров, возможность генерировать неспецифические амплифицированные продукты (20, 66).Технологии целевой изотермической амплификации включают амплификацию на основе последовательностей нуклеиновых кислот (NASBA), транскрипционно-опосредованную амплификацию (TMA), петлевую изотермическую амплификацию (LAMP), амплификацию с помощью рекомбиназ (RAA) и амплификацию рекомбиназной полимеразы (RPA), которые обсуждаются ниже (67).

    Представленный в 1991 г. Комптоном, NASBA представляет собой метод, обычно используемый для селективной амплификации фрагментов РНК (68). Это чувствительная к транскрипции система, идеально подходящая для специфической репликации нуклеиновых кислот in vitro (69), в которой используются два специфических олигонуклеотидных праймера и три фермента обратной транскриптазы вируса миелобластоза птиц (AMV) (70).РНКаза Н, РНК-полимераза и Т7 вместе с праймерами амплифицируют РНК-мишени при 41 ° C (71), образуя в конце реакции конечный продукт, оцРНК, детектируемый такими методами, как электрохемилюминесценция, гель-электрофорез и др. сферическое ферментативное детектирование и ферментно-связанный гель-анализ (20).

    Подобно NASBA, TMA также использует изотермическую амплификацию с использованием обратной транскриптазы для получения кДНК из целевой РНК. Затем РНК-полимераза генерирует комплементарную РНК, полученную из кДНК, таким образом амплифицируя исходную интересующую РНК-мишень.Он демонстрирует быструю кинетику, производя до 1000 копий целевой РНК за реакцию. Полученные ампликоны можно детектировать с помощью гель-электрофореза или олигонуклеотидных зондов (20, 72). Как и NASBA, ему необходимо тщательно контролировать температуру реакции, чтобы денатурировать вторичные структуры. Результаты коммерчески доступных анализов ТМА на вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вирус гепатита С (ВГС) и вирус гепатита В (ВГВ) аналогичны результатам для коммерческой ОТ-ПЦР (73).

    За последние 10 лет LAMP стал часто используемым методом из-за его эффективности, чувствительности и специфичности для диагностики.Метод основан на использовании четырех специфических внешних и внутренних праймеров, ответственных за амплификацию нуклеиновой кислоты (65). Он обеспечивает быстрое обнаружение (около часа), простоту использования и только одну температуру для инкубации (74). Несколько тестов LAMP были применены для обнаружения различных патогенов, таких как паразиты, бактерии и вирусы, включая грипп, лихорадку Эбола, вирус Зика, желтую лихорадку, MERS-CoV и SARS-CoV-2 (75). Более того, это можно проводить с различными образцами, такими как кровь, моча, слюна и сперма (76).

    В исследовании Wang et al. (77), анализ LAMP продемонстрировал 100% чувствительность и специфичность, при этом реакция завершилась за 60 минут, в то время как анализ RT-PCR потребовал 82 минуты. Полученные результаты были наглядными и легко наблюдаемыми. Этот метод оказался мощным инструментом для мониторинга подозреваемых пациентов и групп риска путем выявления SARS-CoV-2. Исследование Park et al. (78) использовали неочищенный образец непосредственно с методом LAMP, поскольку его высокая эффективность амплификации позволяла детектировать результаты с помощью колориметрических методов.Исследования уже продемонстрировали, что анализ RT-LAMP можно использовать для обнаружения MERS-CoV с использованием праймеров, направленных на последовательность вирусного N-белка.

    RPA характеризуется минимальной потребностью в пробоподготовке, низкой рабочей температурой (37 ° C), использованием лиофилизированных реагентов, простотой, чувствительностью, селективностью и быстрой амплификацией (около 104 раз за 10 мин). В этом методе используются два праймера и один зонд, а для раскручивания ДНК и отжига праймеров используются ферменты рекомбиназы (79, 80).Он может использовать несколько образцов, таких как кровь, сыворотка, плазма, кал, моча. Кроме того, поскольку реагенты были высушены вымораживанием, набор RPA можно хранить при комнатной температуре в течение нескольких месяцев (81).

    RAA использует два праймера, три специфических фермента и три белка для амплификации ДНК при 39 ° C примерно за 30 минут. Ферменты включают рекомбиназу UvsX, экстрагированную из E.coli , для отжига праймеров модельной ДНК, одноцепочечного ДНК-связывающего белка (SSB), для образования структуры D-петли для поддержания одноцепочечного состояния модельной ДНК с помощь ДНК-полимеразы для амплификации и удлинения (82).В этих методах можно использовать обратную транскриптазу с флуоресцентным зондом или без него для обнаружения в реальном времени ампликонов РНК (83, 84), имеет высокую специфичность и чувствительность, проста в использовании и может поставить клинический диагноз за считанные минуты ( 85).

    Патенты с использованием изотермической амплификации мишени

    В патентах, указанных в этом обзоре, Silleke и Biomerieux B.V. (41) использовали последовательности нуклеиновых кислот в качестве праймеров для обнаружения SARS-CoV с помощью NASBA. Выбранные для амплификации области-мишени соответствуют гену, который кодирует нуклеокапсидный белок SARS-CoV.В изобретении также рассматривается использование методологии и предлагаемых праймеров для количественного определения вируса до и после терапии путем сбора образцов из носоглоточной аспирации, кала или крови. При оценке аналитической чувствительности праймеров они показали 2,5 копии РНК in vitro при амплификации (41).

    Изобретение 2005 года Mineka et al. (48) также используют метод обнаружения SARS-CoV с помощью RT-LAMP путем обнаружения генов ORF1ab, R2 и R3 за 20-35 минут при наличии 2.5–10 экз. Сначала был приготовлен олигонуклеотидный праймер, который селективно гибридизуется с нуклеотидной последовательностью, специфичной для SARS-CoV, а затем используется метод LAMP для идентификации вируса.

    Патент 2010 г., выданный Kacian и Gen-Probe Inc. (53), описывает метод обнаружения SARS-CoV с помощью TMA. Тесты достигли чувствительности 100–1000 копий со 100% реактивностью с конечной точкой обнаружения 80 копий / мл. Тесты проводились с использованием мазка из носоглотки в качестве образца. При оценке специфичности и чувствительности зонд обнаружения не реагировал перекрестно с ВИЧ, HBV, парвовирусом и HCoV-229E (вирусной нуклеиновой кислотой из штамма коронавируса человека).

    Патент 2018 г.Ан и др. (57) использовали праймеры, нацеленные на гены ORF1b и N в образцах мокроты и легочной ткани, для идентификации БВРС-КоВ. Метод имеет высокую специфичность и не требует контроля температуры, поэтому оборудование было относительно недорогим. Для проверки специфичности праймеров по отношению к БВРС-КоВ использовали шесть различных вирусов: грипп-A (h2), грипп-A (h4), грипп-B1, грипп-B2, метапневмовирус человека (MPV) и 229E. отправлено в RT-LAMP. Праймеры амплифицировали только образец, содержащий БВРС-КоВ, тем самым доказав его специфичность.Наконец, эффективность LAMP сравнивалась с эффективностью анализов ОТ-ПЦР, доступных на рынке, и было показано, что она имеет лучшую чувствительность и более короткое время реакции.

    Патент 2018 Wang et al. (58) описывает набор для обнаружения SARS-CoV и MERS-CoV с использованием RPA. Специфичность зонда и праймера оценивалась, и перекрестных реакций с другими тестируемыми типами вирусов не наблюдалось. Минимальный предел обнаружения составил 10 копий в модели SARS-CoV и 100 копий в модели MERS-CoV.Показано, что срок службы тестов составляет 1 год, что является одним из основных преимуществ этого теста, помимо его низкой стоимости и предотвращения ложноотрицательных результатов.

    Патент Чжоу и др. (59), опубликованный в 2018 году, описывает метод RAA с обратной транскрипцией (RT-RAA) для обнаружения MERS-CoV с использованием праймера и флуоресцентного зонда. Тесты занимают ~ 20 минут и используют мазок из носоглотки. Предел обнаружения составлял 10 копий / мл, а специфичность была доказана путем внесения в метод распространенных патогенов, таких как вирус гриппа A h2N1, грипп N, респираторно-синцитиальный вирус и риновирус.

    Иммуноферментный анализ, связанный с ферментом (ELISA)

    Наконец, количественные аналитические методы, которые выполняют реакции антиген-антитело посредством колориметрического изменения с помощью ферментного конъюгата и субстрата, полезны для количественных и качественных результатов в отношении молекул в биологических жидкостях. Одним из наиболее популярных из этих методов является твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), поскольку его можно использовать для количественного определения веществ при очень низких концентрациях (86).

    Этот метод состоит из аналитического биохимического анализа с высокой чувствительностью и специфичностью для обнаружения и качественного или количественного анализа аналита без использования дорогих и сложных устройств.В качестве аналита можно использовать любое вещество, будь то конкретный белок или его смесь. Его методология включает производство моноклональных или поликлональных антител с использованием антигенов. Для обнаружения белков часто выбирают методы радиоиммуноанализа с использованием радиоизотопов или флуоресцентных маркеров. В последнем методе количественная оценка белка происходит косвенно, при этом поглощение цвета, создаваемое химической связью из-за присутствия красителя, пропорционально количеству белка.Эти методы демонстрируют хорошую чувствительность и пределы обнаружения, а также возможность количественной оценки ниже наномасштаба (87). Исследование, проведенное Xiang et al. (88) сообщили об использовании ELISA в тестах на антитела IgM и IgG, направленных на диагностику COVID-19, с получением высокой чувствительности и специфичности в отношении их обнаружения.

    Тем не менее, в тестах, основанных на обнаружении антител, могут быть ложноотрицательные результаты. Антитела IgM вырабатываются как часть раннего иммунного ответа на начальной стадии инфекции, в то время как антитела IgG указывают на то, что болезнь вступила в период выздоровления или могут присутствовать, если ранее была инфекция (89, 90).Тесты на антитела используются в случаях, когда ОТ-ПЦР отрицательна и существует эпидемиологическая связь с инфекцией SARS-CoV-2, а также в период, когда симптомы впервые проявляются и вирусная нагрузка высока (91). Ложноотрицательные случаи в этом типе теста могут возникать в ситуациях, когда антитела находятся рядом с зародышевой линией, способной связываться с антигенами SARS-CoV-2 (92). Другой проблемой, которую представляет иммунологический анализ, является высокая частота ложноположительных случаев у серонегативных пациентов.Вероятно, это связано с несоответствующим временем сбора образцов в зависимости от стадии инфекции, а также с наивными антителами IgM, которые могут давать неверный результат из-за низкого действия антител. Однако поиск изотипов с переключением классов, в данном случае IgG, может помочь снизить риск ошибок. Кроме того, антиген-мишень также важен, когда тестируемый вирус способен мутировать, поскольку в его структуре будут присутствовать те же вирусные антигены (93).

    Патенты с использованием ELISA

    В 2004 г. Che et al.(37) разработали и запатентовали группу моноклональных антител, принадлежащих к IgG1 или IgG2b, со специфической способностью связываться с белком SARS-CoV N через гибридому, в дополнение к предоставлению реагента для делеции антигена SARS-CoV. В клиническом исследовании сэндвич-набор для ELISA с двойными антителами обнаружил антиген SARS-CoV в сыворотке крови пациентов, получив высокую специфичность и чувствительность. Не было перекрестной реактивности с культурами клеток, которые не были инфицированы SARS-CoV.

    Houde and Lacroix (38) в 2004 году создали in vitro диагностический метод для обнаружения наличия или отсутствия антител, указывающих на SARS-CoV, путем связывания их с пептидом или его аналогом с образованием иммунного комплекса.В анализе ELISA пептид был адсорбирован или ковалентно связан в лунках микротитрационного планшета, обработанного сывороткой или исследуемой биологической жидкостью. После промывания антителами против человеческого IgG или против человеческого IgM, IgA метили пероксидазой и добавляли в лунки и для определения пероксидазы с соответствующим субстратом. Клинические образцы могут варьироваться от культивируемых клеток, клеточных супернатантов, клеточных лизатов, сыворотки, плазмы, биологической жидкости до образцов тканей.

    В 2005 г. Qin et al. (49) разработали эпитоп белка нуклеокапсида SARS-CoV.Этот полипептид имеет высокое сродство к антивирусным антителам SARS, а антитело, разработанное в соответствии с изобретением, имеет высокое сродство к SARS-CoV. Сообщается, что метод обнаружения прост, чувствителен и отличается высокой точностью. Он использует IgG и IgM, а также образцы сыворотки или мокроты от пациентов для обнаружения вируса. Парк (51) сформулировал метод диагностики SARS-CoV с использованием антигена нуклеокапсидного белка (SARS-CoV-N) или белка-шипа (SARS-CoV-S). В этом методе используется человеческое антитело против IgG, конъюгированное с HRP, или моноклональное антитело SARS-CoV-N, смешанное с образцом, содержащим SARS-CoV, для адсорбции антитела SARS-CoV-N.Наконец, в 2019 году Jeong et al. (61) и Han et al. (60) разработали антиген для диагностики БВРС-КоВ с использованием слитого белка NC, который включал фрагмент N-концевого домена и фрагмент С-концевого домена белка N CoV. Они использовали IgG и сравнили свои инновации с уже доступным на рынке набором от Euroimmun ® . Изобретение Han et al. показал положительные результаты для сыворотки человека, разведенной в 128 раз, тогда как коммерческий набор показал положительные результаты только для сыворотки, разведенной в 16 раз.В этом патенте использовали блокирующий ИФА, а также в качестве образцов крови, биологической жидкости, слюны и мокроты. Хотя оба патента показали высокую специфичность, последний показал более высокую чувствительность (60).

    Диагностические тесты на COVID-19

    Аналогичный поиск в Google Patents был выполнен с использованием ключевых слов «SARS-CoV-2 и diag * » с IPC C12Q для патентов, опубликованных с января 2020 года для тестов на выявление нового коронавируса. Это позволяет выделить текущие тенденции в этой области, а также сравнить сходства и различия в запатентованных тестах на SARS-CoV-1 и MERS-CoV с тестами, относящимися к SARS-COV-2.В таблице 2 показаны основные обнаруженные патенты и характеристики каждого изобретения.

    Таблица 2 . Опубликованные патенты на тесты SARS-CoV-2 (COVID-19).

    В некоторых идентифицированных патентах также использовались методы ПЦР, аналогично предыдущим патентам. В одном из изобретений Xu et al. (94) опубликовали набор для быстрого обнаружения SARS-CoV-2, разработанный с использованием метода флуоресцентной ОТ-ПЦР и зонда гидролиза. Набор состоит из зонда, праймеров и положительного и отрицательного контроля для обнаружения.Три фрагмента обратной транскрипции сегментов вируса и комплементарной ДНК человека использовали в качестве положительного и отрицательного контроля соответственно. Среди преимуществ набора, описанного изобретателями, — простота использования, экономия реагентов и снижение перекрестного загрязнения. Время обнаружения составляло около 2 часов, что свидетельствует о хорошей специфичности при использовании трех областей вируса для амплификации и обнаружения. В наборе [A] можно использовать образцы, полученные с помощью мазка из глотки, экстракта носоглотки и мокроты.

    Gu et al. (95) описали изобретение пары праймеров для обнаружения вирусной РНК нового коронавируса с помощью количественной флуоресцентной ПЦР. Ген нуклеокапсида является мишенью для амплификации в этом изобретении, поскольку он обеспечивает высокую степень детектирования из-за его низкой молекулярной массы и генерации большого числа амплифицированных копий. Кроме того, разработанный праймер устойчив к мутации вируса, что позволяет избежать снижения чувствительности и образования ложноотрицательных результатов. Метод позволяет использовать несколько образцов, таких как мазок из глотки, альвеолярный лаваж, слюна, кровь, моча и кал.

    Используя ту же методологию ПЦР с множественной флуоресценцией, Yan et al. (96) разработали другой набор для одновременного обнаружения нескольких генов SARS-CoV-2. Он имеет 70-минутный процесс обнаружения и может использоваться с мазками из глотки, мокротой и жидкостями альвеолярного лаважа. Тест показал минимальный предел обнаружения 2 пг / мл. Другой патент Wang et al. (97) использовали цифровой микрокапельный набор для ПЦР для обнаружения SARS-CoV-2 путем амплификации генов ORF1ab и N. Преимущества этого теста описаны как получение результатов с более прямой интерпретацией и более высокая чувствительность обнаружения, чем количественная ПЦР, а также высокая стабильность, повторяемость, низкая способность обнаружения вирусной нагрузки и уменьшение количества ложноотрицательных результатов.

    Другие патенты, связанные с COVID-19, используют методы изотермической амплификации, наборы и компоненты для обнаружения SARS-CoV-2 также были запатентованы. Сон Мин-Сок и Пэк Юн-хи (98) разработали набор праймеров, позволяющий детектировать вирус любым методом изотермической амплификации в течение 90 минут от гена нуклеокапсида. В том же духе другое изобретение Wan et al. (99) представили набор для быстрого обнаружения с использованием метода LAMP, имеющий в качестве целевых генов ORF1ab и N. В этом изобретении реагент для обнаружения был получен путем сублимационной сушки, что позволяет его транспортировать при комнатной температуре, а не в жестких условиях хранения при — 20 ° C, при которой часто необходимо хранить эти реагенты.Время обнаружения набора составляет около 1-2 часов, и его можно прочитать невооруженным глазом. Метод LAMP также был использован в другом изобретении Cui et al. (100) с использованием гена-мишени ORF1ab. Применяемая методика позволяет идентифицировать наличие вируса по изменению цвета образца. После 30 мин обнаружения ярко-зеленый цвет указывает на положительный результат, а желтый / оранжевый — на отрицательный.

    Альтернативные методики испытаний

    Иммуноферментный магнитный хемилюминесцентный анализ на основе пептидов (101, 102) — еще один метод с хорошей чувствительностью, который не был обнаружен при поиске патентов.Его также можно использовать в сочетании с рОТ-ПЦР, имея положительную частоту для IgG и IgM 71,4 и 57,2% соответственно. Следовательно, сочетание этого иммуноанализа с ОТ-ПЦР в реальном времени может повысить точность диагностики COVID-19 (103–106).

    Что касается метода ELISA, то он обычно широко используется из-за его практичности, низкой стоимости и простоты выполнения, в идеале, когда каждая страна разрабатывает свои собственные технологии, очищая свои местные антигены для достижения хороших результатов тестирования (107–109).

    Другими методологиями, не включенными в наш обзор, но с многообещающими характеристиками, являются методологии на основе CRISPR (110–113), иммуноанализ латерального потока (5), вязкоупругие испытания (114) и биосенсоры на COVID-19 (115), задуманные как альтернативы обычным методам.В выявленных патентах изотермическая амплификация оказалась более быстрым, простым и более чувствительным методом обнаружения SARS-CoV-2 (116–119).

    Возможные ограничения патентованных тестов

    Мы знаем, что тестирование на антитела необходимо, но результаты реагента на IgG не могут гарантировать новые положительные результаты для рОТ-ПЦР, и необходимы дальнейшие исследования, чтобы продемонстрировать защиту от COVID-19 у пациентов с реагирующим IgG (109, 120). Существует огромное количество тестов, но они используются с критериями, основанными на литературе, потому что только массовое тестирование может гарантировать критерии открытия и закрытия городов (47, 121–125).Специфичность и чувствительность тестов, описанных в этом обзоре, могут измениться из-за факторов окружающей среды. Согласно Younes et al. (126), в анализах ELISA могут быть ложноположительные результаты, поскольку белок N является наиболее консервативным вирусным белком среди бета-коронавирусов человека. Таким образом, антигены, используемые в наборах, могут давать неточные результаты. Среди других возможных причин неточных результатов — перекрестное связывание с другими коронавирусами (MERS-CoV, SARS-CoV-1) или потому, что используемые антигены обладают способностью реагировать с вирусами, вызывающими простуду (HKU1, 229E, OC43, NL63) зимой, когда они циркулируют в больших количествах (126).Чтобы обойти эту проблему, методы диагностики были улучшены с использованием белка spike, который обнаруживает два домена белка S (S1 и S2) (127).

    В исследовании Yang et al. (128), LAMP продемонстрировал аналогичную чувствительность к ПЦР и специфичность 99% в 208 протестированных клинических образцах. Это было связано с использованием от шести до восьми инициаторов для идентификации различных регионов. Несмотря на то, что ПЦР считается золотым стандартом, она чувствительна к факторам окружающей среды, которые могут вызывать изменения обсуждаемых параметров.Проблемы, связанные с вирусной нагрузкой и медленным или отсутствующим ответом антител, могут повлиять на результаты. Его рекомендуется применять с третьего дня появления симптомов при высокой вирусной нагрузке (129, 130). Интересно, что также наблюдается заметная нехватка технологических продуктов из развивающихся стран и даже из стран Европы, которые обычно играют важную роль в разработке диагностических продуктов. Таким образом, существует потребность в больших инвестициях в разработку практичных, быстрых и надежных технологий, которые можно использовать для проведения массовых испытаний, необходимых для победы в этой битве с COVID-19.Более того, текущие публичные патентные знания могут быть ограничителем в разработке нового фармацевтического продукта или процессов, и в конкретное время, например, во время вспышки COVID-19, поэтому эти препятствия должны быть на месте. Таким образом, эти пробелы в знаниях только создают новые сомнения, которые закладывают фундамент (131).

    Сильные стороны и ограничения

    Среди сильных сторон этого исследования — акцент на патенты в обзоре, который дает обзор ситуации и тенденций роста в конкретной области знаний или интересующем продукте.Кроме того, патенты часто содержат технологическую информацию, которая не может быть найдена полностью в статьях, поскольку компании тщательно защищают свои изобретения, и это может обеспечить лучшее общее понимание тестов. Что касается ограничений этого обзора, некоторые инновационные методы диагностики не запатентованы немедленно, и авторы предпочитают публиковать свои данные быстро с помощью научных статей. Таким образом, большинство патентов, обнаруженных для диагностики COVID-19, основаны на известных методах, таких как ПЦР, изотермическая амплификация и ELISA.Потенциальная предвзятость в патенте идентификации и включения может произойти из-за 18-месячного периода конфиденциальности, который патентные ведомства предоставляют изобретателям. Однако поиск проводился в соответствующих патентных базах данных с использованием комплексных поисковых терминов и тщательного процесса отбора, чтобы избежать этого риска.

    Заключение

    Известно, что постановка быстрого и надежного диагноза заболевания имеет первостепенное значение для принятия фундаментальных мер по контролю и лечению болезни.Это особенно верно в случае вирусов, особенно CoV, которые поражают людей множеством различных способов и могут потребовать быстрой и специальной помощи в случае заражения. Мы описываем патенты, содержащие диагностические методы, ориентированные на CoV, необходимые для обнаружения SARS-CoV, MERS-CoV и SARS-CoV-2. Мы также представили в этом обзоре некоторые данные из исследований испытаний, уже проведенных исследователями, а также из патентов, направленных на другие инфекции, вызванные CoV. Молекулярные методы, такие как RT-PCR, ELISA и технологии изотермической амплификации, положительно влияют на простые, быстрые, чувствительные, специфические и недорогие тесты.Знания, полученные с другими типами CoV, могут способствовать борьбе с COVID-19 и текущей пандемией.

    Заявление о доступности данных

    Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без излишних оговорок.

    Авторские взносы

    JN, AS и AO проанализировали и интерпретировали данные и выполнили черновик. AG, LQ-J и LB сделали критический обзор интеллектуального контента. М.С. реализовал концепцию и дизайн рукописи.HC и NM внесли свой вклад в окончательный вариант рукописи и предоставили ресурсы для исследования. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

    Финансирование

    Это исследование частично финансировалось Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior — Brasil (CAPES) — Финансовый кодекс 001.

    Конфликт интересов

    Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

    Благодарности

    Авторы благодарят компании CAPES, FAPITEC / SE и CNPq (Бразилия) за финансовую поддержку. Мы посвящаем эту статью всем работникам здравоохранения, которые умирают или сталкиваются с COVID-19. NM выражает признательность Португальскому фонду науки и технологий в рамках программы Horizon 2020 (PTDC / PSI-GER / 28076/2017).

    Список литературы

    1. Alsaadi EA, Jones IM. Мембранные связывающие белки коронавирусов. Future Virol. (2019) 14: 275–86. DOI: 10.2217 / fvl-2018-0144

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    4. Ди Дженнаро Ф., Пиццол Д., Маротта С., Антунес М., Ракальбуто В., Веронезе Н. и др. Коронавирусные заболевания (COVID-19): текущее состояние и перспективы на будущее: обзорный обзор. Int J Environ Res Public Health. (2020) 17: 2690. DOI: 10.3390 / ijerph27082690

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    5. Картер Л.Дж., Гарнер Л.В., Смут Д.В., Ли Й., Чжоу К., Савесон С.Дж. и др.Методы анализа и разработка тестов для диагностики COVID-19. САУ Cent Sci. (2020) 6: 591–605. DOI: 10.1021 / acscentsci.0c00501

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    6. Мунгру М.Р., Хан Н.А., Сиддиги Р. Новый коронавирус: современное понимание клинических особенностей, диагностики, патогенеза и вариантов лечения. Патогены. (2020) 9: 297. DOI: 10.3390 / pathogens

    97

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    7.Adhikari SP, Meng S, Wu YJ, Mao YP, Ye RX, Wang QZ и др. Эпидемиология, причины, клинические проявления и диагностика, профилактика и борьба с коронавирусной болезнью (COVID-19) в период ранней вспышки: обзорный обзор. Заражение бедностью. (2020) 9:29. DOI: 10.1186 / s40249-020-00646-x

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    8. Ян И, Пэн Ф, Ван Р., Гуань К., Цзян Т., Сюй Г. и др. Смертельные коронавирусы: пандемия атипичной пневмонии 2003 года и эпидемия нового коронавируса 2020 года в Китае. J Аутоиммунный. (2020) 109: 102434. DOI: 10.1016 / j.jaut.2020.102434

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    9. Шен М., Чжоу Й., Йе Дж., Аль-Маскри ААА, Кан Й., Зенг С. и др. Последние достижения и перспективы обнаружения нуклеиновых кислот для коронавируса. J Pharm Anal. (2020) 10: 97–101. DOI: 10.1016 / j.jpha.2020.02.010

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    11. Yu F, Du L, Ojcius DM, Pan C, Jiang S.Меры по диагностике и лечению инфекций, вызванных новым коронавирусом, вызвавшим вспышку пневмонии, возникшую в Ухане, Китай. Microbes Infect. (2020) 22: 74–9. DOI: 10.1016 / j.micinf.2020.01.003

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    12. Чжан Дж., Лю П., Ван М., Чен Дж., Юань В., Ли М. и др. Клинические данные 19 тяжелобольных пациентов с коронавирусной болезнью 2019: одноцентровое ретроспективное наблюдательное исследование. Z Gesundh Wiss. (2020) 21: 1–4. DOI: 10.21203 / RS.3.RS-20800 / v1

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    14. Trevethan R. Чувствительность, специфичность и прогностическая ценность: основы, гибкость и подводные камни в исследованиях и практике. Фронт общественного здравоохранения. (2017) 5: 307. DOI: 10.3389 / fpubh.2017.00307

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    15. Ли Нью-Йорк. Типы и частота преаналитических ошибок в клинической лаборатории университетской больницы Кореи. Clin Lab. (2019) 65: 1–11. DOI: 10.7754 / Clin.Lab.2019.1

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    16. Мадор Д.В., Мид Б.Д., Рубин Ф., Дил С., Линн Ф. Использование серологических анализов для подтверждения эффективности вакцин в доклинических и клинических испытаниях: встреча на перепутье. Вакцина. (2010) 2: 4539–47. DOI: 10.1016 / j.vaccine.2010.04.094

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    17. Фрю С., Саммут С., Шор А., Рамджист Дж. К., Аль-Бадер С., Резай Р. и др.Китайские биотехнологии здоровья и рынок миллиарда пациентов. Nat Biotechnol. (2008) 26: 37–53. DOI: 10.1038 / nbt0108-37

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    18. Киселев Д., Мацвай А., Абрамов И., Дедков В., Шипулин Г., Хафизов К. Современные тенденции диагностики вирусных инфекций неясной этиологии. вирусов. (2020) 12: 211. DOI: 10.3390 / v12020211

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    19.Roesler C, Broekel T. Роль университетов в сети субсидируемого сотрудничества в области НИОКР: пример биотехнологической промышленности в Германии. Ред. Рег. (2017) 37: 135–60. DOI: 10.1007 / s10037-017-0118-7

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    21. Бинсаид А.А., Аль-Хедхайри А.А., Мандил А.М., Шейх С.А., Куреши Р., Аль-Хаттаф А.С. и др. Валидационное исследование, сравнивающее чувствительность и специфичность нового набора для ОТ-ПЦР Dr. KSU h2N1 с ОТ-ПЦР в реальном времени для диагностики гриппа A (h2N1). Ann Saudi Med. (2011) 31: 351–5. DOI: 10.4103 / 0256-4947.83212

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    22. Кан ТС. Основные принципы разработки методов ПЦР в реальном времени, используемых в анализе пищевых продуктов: обзор. Trends Food Sci Technol. (2019) 91: 574–87. DOI: 10.1016 / j.tifs.2019.07.037

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    23. Nunes BTD, de Mendonça MHR, Simith DdeB, Moraes AF, Cardoso CC, Prazeres ITE, et al.Разработка ОТ-КПЦР и полувложенных ОТ-ПЦР для молекулярной диагностики хантавирусного легочного синдрома. PLoS Negl Trop Dis. (2019) 13: e0007884. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0007884

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    24. Но Дж.Й., Юн С.В., Ким Диджей, Ли М.С., Ким Дж.Х., На В и др. Одновременное обнаружение тяжелого острого респираторного синдрома, ближневосточного респираторного синдрома и родственных коронавирусов летучих мышей с помощью ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени. Arch Virol. (2017) 162: 1617–23. DOI: 10.1007 / s00705-017-3281-9

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    26. Лай Ю.Л., Чунг Ю.К., Тан Х.С., Яп Х.Ф., Яп Г., Оои Э.Е. и др. Экономичная ПЦР с обратной транскриптазой в реальном времени (ОТ-ПЦР) для скрининга вируса денге с последующей быстрой мультиплексной ОТ-ПЦР в одной пробирке для серотипирования вируса. J Clin Microbiol. (2007) 45: 935–41. DOI: 10.1128 / JCM.01258-06

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    28.Кралик П., Риччи М. Базовое руководство по ПЦР в реальном времени в микробной диагностике: определения, параметры и все остальное. Передний микробиол . (2017) 8: 108. DOI: 10.3389 / fmicb.2017.00108

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    30. Ван З., Чжан И, Хе З, Лю Дж., Лан К., Ху И и др. Мультиплексный анализ RT-qPCR на основе кривой плавления для одновременного обнаружения четырех коронавирусов человека. Int J Mol Sci. (2016) 17: 1880. DOI: 10.3390 / ijms17111880

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    31.Li Z, Yi Y, Luo X, Xiong N, Liu Y, Li S и др. Разработка и клиническое применение экспресс-теста комбинированных антител IgM-IgG для диагностики инфекции SARS-CoV-2. J Med Virol. (2020) 92: 1518–24. DOI: 10.1002 / jmv.25727

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    32. Аббаси-Ошаги Э., Мирзаи Ф., Фарахани Ф., Ходадади И., Тайебиния Х. Диагностика и лечение коронавирусных заболеваний 2019 (COVID-19): результаты лабораторных исследований, ПЦР и компьютерной томографии грудной клетки. Int J Surg. (2020) 79: 143–53. DOI: 10.1016 / j.ijsu.2020.05.018

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    34. Лю Р., Лю Х, Юань Л., Хань Х., Шерин М.А., Чжэнь Дж. И др. Анализ дополнительного серологического обнаружения к тесту на нуклеиновую кислоту для диагностики инфекции тяжелого острого респираторного синдрома, вызванной коронавирусом 2 (SARS-CoV-2). Int Immunopharmacol. (2020) 86: 106746. DOI: 10.1016 / j.intimp.2020.106746

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    35.Wang J. Reagent Kit for LgG Immunoblotting Diagnosis of SARS Coronavirus Antibody. Патент Китая № 1,453,590. Хубэй, Китай: Гуанчжоу Ванфу Биотехнология (2003).

    Google Scholar

    36. Бризе Т., Липкин В., Паласиос Дж., Джабадо О. Методы и наборы для обнаружения коронавируса, связанного с атипичной пневмонией. Патент США № 20 040 265 796. Нью-Йорк, Нью-Йорк: Попечители Колумбийского университета (2004).

    Google Scholar

    37. Che X, Qiu L, Wen K. Моноклональные антитела к белку нуклеокапсида коронавируса SARS, гибридома для получения того же самого, агент для обнаружения, содержащий то же самое, и его использование.Патент Китая № 1,557,838. Guǎngzhōu, CN: Первый военный госпиталь Чжуцзян (2004 г.).

    Google Scholar

    38. Houde M, Lacroix J-M. Пептиды и их смеси для использования при обнаружении тяжелого острого респираторного синдрома, связанного с коронавирусом (SARS). Патент Канады № 2524609. Монреаль, Калифорния: Adaltis Inc. (2004).

    Google Scholar

    39. Мэй X, Чжоу X, Лю Д. Коробка с диагностическим реагентом для обнаружения коронавируса SARS с использованием метода транскрипционной ПЦР. Патент Китая №1,514,010. Далянь, Китай: Zhenao Group Co., Ltd. (2004).

    Google Scholar

    40. Artus Ges Fuer Molekular Biolog. Набор для диагностического обнаружения вируса, связанного с тяжелым острым респираторным синдромом, включает праймеры и зонды для полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени. Патент Германии № 000,020,315,159. Германия, Германия: Artus Ges Fuer Molekular Biolog. (2004).

    Google Scholar

    41. Sillekens PTG, Biomerieux BV. Последовательности нуклеиновых кислот, которые можно использовать в качестве праймеров и зондов при амплификации и обнаружении коронавируса SARS.Патент Всемирной организации № 2 004 111 274. Нидерланды, Нидерланды: Biomerieux BV. (2004).

    Google Scholar

    42. Виджайсри С., Гетман Д.К., Нельсон Н.С. и др. Составы и методы определения наличия коронавируса SARS в образце. Патент Канады № 2520146. Сан-Диего, Калифорния: Gen-Probe Inc. (2004).

    Google Scholar

    43. Ву Б., Гао Дж. Праймер для ОТ-ПЦР последовательности-мишени, зонд с короткой ручкой, набор реагентов и метод обнаружения коронавирусов, связанных с SARS, и их применение.Патент Китая № 1,548,550. Пекин, Китай: У Бинцюань. (2004).

    Google Scholar

    44. Иноуэ М., Хонг В. Чувствительный и специфический тест для обнаружения коронавируса SARS. Патент Всемирной организации № 2,005,059,177. Сингапур, SG: Агентство науки, технологий и исследований (2005).

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    45. Кострикис Л.Г. Мультиаллельное молекулярное обнаружение коронавируса, связанного с SARS. Патент Всемирной организации № 2 005 021 798. Делавэр, США: Birch Biomedical Research LLC.(2005).

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    46. Лим Х. К., Ким Ш., Хван Дж. Дж., Ли Ю. С., Ким Я. Сеул, КР. Праймер для обнаружения коронавируса SARS без перекрестной реакции с другими коронавирусами за короткое время, достаточное для полного обнаружения в полевых условиях, метод и набор для обнаружения коронавируса SARS с использованием того же . Патент Республики Корея № 1,020,050,058,620. Самсунг Электроникс Ко., Лтд. (2005 г.).

    Google Scholar

    47. Ма Дж., Джи М.Антитело, направленное на антиген белка коронавируса N SARS, и его использование для обнаружения коронавируса SARS или его антигена. Патент Китая № 15. Пекин, Китай: Ма Цзе. (2005).

    Google Scholar

    48. Минекава Х., Ватанабэ К., Кодзия С. Метод обнаружения коронавируса SARS. Патент Всемирной организации № 2,005,001,097. Токио, Япония: Эйкен Кагаку Кабусики Кайша (2005).

    Google Scholar

    49. Qin L, Li Y, Shi T. Антигенный детерминант белка нуклеокапсида коронавируса SARS и его применение.Патент Китая № 1566143. Шанхай, Китай: Шанхайский институт биологических наук (2005).

    Google Scholar

    50. Пак Х. Дж., Ха И-Дж., Ким М. Х. Праймер и зонд для обнаружения коронавируса SARS, набор, состоящий из праймера и / или зонда, и метод их обнаружения. Патент Всемирной организации № 2 006 022 459. Сеул, КР: Институт биотехнологии Могама (2006).

    Google Scholar

    51. Park JH. Безопасные и точные методы диагностики SARS с использованием нуклеокапсида или белка-шипа мутантного коронавируса SARS-Cov в качестве антигена.Патент Республики Корея № 1 020 080 012 449. Сеул, КР: Сеульский национальный университет; Промышленный фонд (2008 г.).

    Google Scholar

    52. Лу Дж., Прайс Дж. А. Младший, Юрсис Д. А., Вулф Д. М., Келлер Л. М., Хеллиер Т. Дж. И др. Анализ на коронавирус SARS путем амплификации и обнаружения последовательности репликазы. Патент США № 2 009 258 340. Нью-Джерси, Нью-Джерси: Becton Dickinson Co. (2009).

    Google Scholar

    53. Качян DL. Методы определения наличия коронавируса SARS в образце.Патент США №2010279276. Сан-Диего, США: Gen-Probe Inc. (2010).

    Google Scholar

    54. Jeong YJ, Je CS, Min WH. Аптамер, специфичный для тяжелого острого респираторного синдрома (SARS) — нуклеокапсид коронавируса и фармацевтическая композиция, содержащая его. Патент Республики Корея №20,120,139,512. Сонбук-гу, КР: Университет Кукмин; Фонд индустриально-академического сотрудничества (2012 г.).

    Google Scholar

    55. Кайюань К., Ли М., Сюй Л., Ву Дж, Чжан Д., Сюй С. и др.Метод обнаружения коронавируса человека OC43, 229E, NL63, HKU1 и SARS с помощью мультиплексной флуоресцентной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в одной пробирке, а также праймеры, зонды и набор, принятые для данного метода. Патент Китая № 102 732 638. Гуанчжоу, Китай: Университет Сунь Ятсена (2012).

    Google Scholar

    56. Яна А., Мацунага Т., Ямаока Ю., Курояма Х. Йокогама, Япония. Антитело против коронавируса MERS, метод обнаружения коронавируса MERS с использованием антитела и набор, содержащий антитело .Патент Японии №2017145246. Yokohama City Univ; Kanto Chem Co. Inc. (2017).

    Google Scholar

    57. Ан Дж. Я., Сон М. С., Бэк Ю. Х. Набор праймеров для обнаружения БВРС-коронавируса и его использования. Патент Республики Корея № 1,020,180,125,141. Чхонджу, КР: Национальный университет Чунгбук; Фонд индустриально-академического сотрудничества (2018).

    Google Scholar

    58. Ван Л., Ван И, Чжан З. Набор зондов для праймера, комплект и метод обнаружения для выявления SARS-CoV (коронавирус тяжелого острого респираторного синдрома) и MERS-CoV (коронавирус ближневосточного респираторного синдрома).Патент Китая № 08,060,266. Пекин, Китай: Beijing Applied Biological Tech Co. Ltd. (2018).

    Google Scholar

    59. Чжоу Д., Ло Дж, Инь Q, Сюэцзюнь Ю. Флуоресцентный праймер RT-RAA (обратная транскрипционная рекомбиназа, способствующий амплификации) для обнаружения MERS-CoV (коронавирус ближневосточного респираторного синдрома), зонд и метод обнаружения. Патент Китая № 107,557,496. Нинбо, Китай: Международный туристический центр здравоохранения Нинбо (2018).

    Google Scholar

    60.Хан С.Л., Сон С.К., Джу ИЛ, Хе К.К., Дэ ГДж, Джиён Н. и др. Метод обнаружения коронавируса MERS с использованием слитого белка нуклеокапсида коронавируса MERS. Патент Республики Корея №102019008. Сеул, КР: Корейский центр по контролю и профилактике заболеваний, Korea Res Inst Bioscience & Biotechnology (2019).

    Google Scholar

    61. Чжон Д.Г., Юн С.В., Ким Г.К., Сон Д., Но Дж., Ан MJ. Сеул, КР. NC Fusion Protein, содержащий фрагмент N-концевого домена и фрагмент C-концевого домена нуклеокапсидного белка коронавируса MERS, и набор для диагностики коронавирусной инфекции MERS с использованием того же .Патент Всемирной организации № 2,019,066,389. Корейский научно-исследовательский институт биологии и биотехнологии (2019).

    Google Scholar

    62. Li Z, Li Y, Sekine S, Xi H, Amano A, Zhang D, et al. Разработка и изготовление портативного микрожидкостного чипа для непрерывной проточной ПЦР для репликации ДНК. Biomed Microdev. (2019) 22: 5. DOI: 10.1007 / s10544-019-0457-y

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    63. Бареа Дж. С., Ли Дж., Кан Д. К.. Последние достижения в области микрожидкостных технологий на основе капель для биохимии и молекулярной биологии. Микромашины. (2019) 10: 412. DOI: 10.3390 / mi10060412

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    64. Бачелет В.К. Знаем ли мы диагностические свойства тестов, используемых при COVID-19? Быстрый обзор недавно опубликованной литературы. Medwave. (2020) 20: e7890. DOI: 10.5867 / medwave.2020.03.7891

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    65. Ли Х, Ли К, Би З, Гу Дж, Сонг Д., Лей Д. и др. Разработка метода изотермической амплификации, опосредованной обратной транскрипцией (RT-LAMP), для обнаружения пегивируса свиней. J Virol Methods. (2019) 270: 59–65. DOI: 10.1016 / j.jviromet.2019.04.019

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    66. Лу Х, Ши Х, Ву Г., Ву Т, Цинь Р., Ван Ю. Визуальное обнаружение и дифференциация штаммов вируса классической чумы свиней с использованием амплификации на основе последовательности нуклеиновых кислот (NASBA) и анализа ДНКзима G-квадруплекса. Научный доклад (2017) 7: 44211. DOI: 10.1038 / srep44211

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    68.Zhai L, Liu H, Chen Q, Lu Z, Zhang C, Lv F и др. Разработка анализа амплификации на основе последовательностей нуклеиновых кислот в реальном времени для быстрого обнаружения сальмонелл. от еды. Braz J Microbiol. (2019) 50: 255–61. DOI: 10.1007 / s42770-018-0002-9

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    69. Хонсвалл Б.К., Робертсон Л.Дж. Анализ амплификации на основе последовательностей нуклеиновых кислот (NASBA) в реальном времени, нацеленный на MIC1, для обнаружения ооцист cryptosporidium parvum и cryptosporidium hominis. Exp Parasitol. (2017) 172: 61–7. DOI: 10.1016 / j.exppara.2016.12.009

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    70. Хео С., Ким Х.Р., Ли Х.Дж. Разработка количественного анализа на основе последовательности нуклеиновых кислот в реальном времени (NASBA) для раннего обнаружения вироида кожи яблочного рубца. Plant Pathol J. (2019) 35: 164–71. DOI: 10.5423 / PPJ.OA.10.2018.0206

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    71.Ма И, Дай Х, Хонг Т., Мунк Г.Б., Либера М. НАСБА на микрогеле-привязанном микрочипе с молекулярным маяком для микробной молекулярной диагностики в реальном времени. Аналитик. (2016) 142: 147–55. DOI: 10.1039 / C6AN02192A

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    72. Liu W, Li J, Wu Y, Xing S, Lai Y, Zhang G. Индуцированное мишенью лигирование близости запускает амплификацию полимеразы рекомбиназы и опосредованную транскрипцией амплификацию для обнаружения опухолевых экзосом в карциноме носоглотки с высокой чувствительностью. Biosens Bioelectron. (2018) 102: 204–10. DOI: 10.1016 / j.bios.2017.11.033

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    73. Ву Д., Тао С., Лю С., Чжоу Дж., Тан Д., Хоу З. Применение транскрипционной амплификации и полимеразной цепной реакции обратной транскрипции в реальном времени для обнаружения РНК вируса иммунодефицита человека. Чжун Нан Да Сюэ Бао И Сюэ Бань. (2017) 42: 776–82. DOI: 10.11817 / j.issn.1672-7347.2017.07.006

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    74.Ширато К., Семба С., Эль-Кафрави С.А., Хассан А.Х., Толах А.М., Такаяма I и др. Разработка флуоресцентной изотермической амплификации, опосредованной петлей обратной транскрипции (RT-LAMP), с использованием тушащих зондов для обнаружения коронавируса ближневосточного респираторного синдрома. J Virol Methods. (2018) 258: 41–8. DOI: 10.1016 / j.jviromet.2018.05.006

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    75. Ян Ц., Цуй Дж., Хуанг Л., Ду Б, Чен Л., Сюэ Дж. И др. Быстрое и визуальное обнаружение нового коронавируса 2019 года (SARS-CoV-2) с помощью анализа изотермической амплификации, опосредованного обратной транскрипцией. Clin Microbiol Infect. (2020) 26: 773–9. DOI: 10.1016 / j.cmi.2020.04.001

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    77. Ван Х, Чжун М., Лю И, Ма П, Данг Л., Мэн Кью и др. Быстрое и чувствительное обнаружение COVID-19 Использование обнаружения на основе CRISPR / Cas12a с считыванием невооруженным глазом, CRISPR / Cas12a-NER. Sci Bull. (2020) 65: 1436–9. DOI: 10.1016 / j.scib.2020.04.041

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    78.Пак Г-С, Ку К., Бэк С.-Х, Ким С.-Дж, Ким С.И., Ким Би-Т и др. Разработка методов изотермической амплификации, опосредованной обратной транскрипцией (RTLAMP), нацеленных на SARS-CoV-2. J Mol Diagn. (2020) 22: 729–35. DOI: 10.1101 / 2020.03.09.983064

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    79. Дахер Р.К., Стюарт Дж., Буассино М., Бержерон М.Г. Амплификация рекомбиназной полимеразы для диагностических приложений. Clin Chem. (2016) 62: 947–58. DOI: 10.1373 / Clinchem.2015.245829

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    81. Davi SD, Kissenkotter J, Faye M, Bohlken-Faschert S, Stahl-Henning C, Faye O, et al. Анализ амплификации рекомбиназной полимеразы для быстрого обнаружения вируса оспы обезьян. Diagn Microbiol Infect Dis. (2019) 95: 41–5. DOI: 10.1016 / j.diagmicrobio.2019.03.015

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    82. Chen C, Li X-N, Li G-X, Zhao L, Duan S-X, Yan T-F и др.Использование быстрого анализа амплификации с помощью рекомбиназы обратной транскрипции для обнаружения респираторно-синцитиального вируса. Diagn Microbiol Infect Dis. (2018) 90: 90–5. DOI: 10.1016 / j.diagmicrobio.2017.10.005

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    83. Ци Дж, Ли Х, Чжан И, Шэнь Х, Сонг Дж, Пан Дж и др. Разработка дуплексного теста амплификации с использованием рекомбиназы с обратной транскрипцией для респираторно-синцитиального вируса, включающего внутренний контроль. Arch Virol. (2019) 164: 1843–50. DOI: 10.1007 / s00705-019-04230-z

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    84. Ван Цюй, Ли Ф, Шен ХХ, Фу Ш, Хе И, Лэй У.В. и др. Анализ амплификации с использованием рекомбиназы с обратной транскрипцией для быстрого обнаружения дальневосточного подтипа вируса клещевого энцефалита. Biomed Environ Sci. (2019) 32: 357–62. DOI: 10.3967 / bes2019.047

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    85.Wang W, Wang C, Zhang P, Yao S, Liu J, Zhai X и др. Анализ амплификации с использованием рекомбиназы обратной транскрипции в сочетании с тест-полоской с боковым потоком для обнаружения вируса птичьего инфекционного бронхита. Poult Sci. (2019) 99: 89–94. DOI: 10.3382 / пс / pez559

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    86. Aydin S. Краткая история, принципы и типы ELISA, а также наш лабораторный опыт с анализами пептидов / белков с использованием ELISA. Пептиды. (2015) 72: 4–15. DOI: 10.1016 / j.peptides.2015.04.012

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    88. Xiang F, Wang X, He X, Peng Z, Yang B, Zhang J, et al. Обнаружение антител и динамические характеристики у пациентов с COVID-19. Клин Инфекция Дис . (2020) 19: ciaa461. DOI: 10.1093 / cid / ciaa461

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    92. Nielsen SCA, Yang F, Jackson KJL, Hoh RA, Roltgen K, Jean GH и др.Клональная экспансия В-клеток человека и ответы конвергентных антител на SARS-CoV-2. Клеточный микроб-хозяин. (2020) 28: 1–10. DOI: 10.1016 / j.chom.2020.09.002

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    94. Xu S, Xie S, Li Y, Feng J, Zhang S, Lye C, et al. Новый набор нуклеиновых кислот, способный быстро определять 2019-nCoV и применение. Патент Китая № 111 074 010. Шандун, Китай: Медицинский колледж Биньчжоу (2020).

    Google Scholar

    95.Гу Л., Ху В., Се Х, Се С., Донг Х, Чжан Дж. И др. Новая пара праймеров для обнаружения нуклеиновых кислот коронавируса с мутационной устойчивостью, набор и их применение. Патент Китая № 111 321 252. Жичжао, CN: Shandong Stars Bio-Industry Co. Ltd. (2020).

    Google Scholar

    96. Ян Дж., Ян С., Лю X, Дин В. Набор для обнаружения нуклеиновых кислот для нового коронавируса COVID-19 и метод его использования. Патент Китая № 111,118,228. Шанхай, Китай: Shanghai Bangxian Medical Tech Co. Ltd. (2020).

    Google Scholar

    97.Ван И, Донг Дж, Лин И, Ли К., Лю И, Чжан Х. Набор для цифровой ПЦР капельного типа для теста на нуклеиновую кислоту COVID-19 и применение набора. Патент Китая № 111,118,225. Сучжоу, Китай: Suzhou Rainsure Biological Tech Co. Ltd. (2020).

    Google Scholar

    98. Сонг М.С., Бэк Ю.Х. Наборы праймеров для обнаружения вирусов короны и их использования. Канвон, КР: Патент Республики Корея № 102,113,596. Bionics Co Ltd. (2020).

    Google Scholar

    99. Ван Кью, Ву Кью, Чжоу Ю., Цай З., Лу М., Чен Б. и др.Набор для быстрого обнаружения сухого порошка LAMP для SARS-CoV-2. Патент Китая № 111,154,922. Гуанчжоу, Китай: Guangdong Huankai Biotechnology Co. Ltd. (2020).

    Google Scholar

    100. Цуй С., Лян Л., Цзя И, Лян Р. Набор для быстрого обнаружения нового коронавируса с визуальной постоянной температурой. Патент Китая № 110 982 944. Пекин, Китай: Институт зоологии CAAS (2020).

    PubMed Аннотация | Google Scholar

    101. Инфантино М., Гросси В., Лари Б., Бэмби Р., Перри А., Маннески М. и др.Диагностическая точность автоматического хемилюминесцентного иммуноанализа на антитела IgM и IgG к SARS-CoV-2: опыт Италии. J Med Virol. (2020) 92: 1671–5. DOI: 10.1002 / jmv.25932

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    102. Липпи Г., Сальваньо Г.Л., Пегораро М., Милителло В., Калои С., Перетти А. и др. Оценка иммунного ответа на SARS-CoV-2 с помощью полностью автоматизированного хемилюминесцентного иммуноанализа MAGLUMI 2019-nCoV IgG и IgM. Clin Chem Lab Med .(2020). 58: 1156–9. DOI: 10.1515 / cclm-2020-0473

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    103. Xie J, Ding C, Li J, Wang Y, Guo H, Lu Z, et al. Характеристики пациентов с коронавирусной болезнью (COVID-19) подтверждены с помощью теста на антитела IgM-IgG. J Med Virol . (2020) 92: 2004–10. DOI: 10.1002 / jmv.25930

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    104. Cai X-F, Chen J, Hu J-L, Long Q-X, Deng H-J, Fan K и др.Иммуноферментный магнитный хемилюминесцентный анализ на основе пептидов для серологической диагностики коронавирусной болезни 2019 (COVID-19). Дж. Заразить Дис . (2020) 8: jiaa243. DOI: 10.1093 / infdis / jiaa243

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    105. Long Q-X, Deng H-J, Chen J, Hu J, Liu B-Z, Lia P и др. Антительный ответ на SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19: перспективное применение серологических тестов в клинической практике. medRxiv . (2020) 1: 1–20. DOI: 10.1101 / 2020.03.18.20038018

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    106. Сунь Б., Фэн И, Мо Х, Чжэн П., Ван Ц., Ли П. и др. Кинетика специфических для SARS-CoV-2 ответов IgM и IgG у пациентов с COVID-19. Emerg Microbes Infect. (2020) 9: 940–8. DOI: 10.1080 / 22221751.2020.1762515

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    107. Штадлбауэр Д., Аманат Ф., Хромикова В., Цзян К., Стромайер С., Арункумар Г.А. и др. Сероконверсия SARS-CoV-2 у людей: подробный протокол серологического анализа, продукции антигена и настройки тестирования. Curr Protoc Microbiol. (2020) 57: e100. DOI: 10.1002 / cpmc.100

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    108. Woo PCY, Lau SKP, Wong BHL, Tsoi H-W, Fung AMY, Kao RYT и др. Дифференциальная чувствительность при тяжелом остром респираторном синдроме (SARS), иммуносорбентный иммуноферментный анализ спайк-полипептида коронавируса (ELISA) и ELISA на нуклеокапсидный белок коронавируса SARS для серодиагностики пневмонии, вызванной коронавирусом SARS. J Clin Microbiol. (2005) 43: 3054–8.DOI: 10.1128 / JCM.43.7.3054-3058.2005

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    109. Чжао Р., Ли М., Сонг Х., Чен Дж., Рен В., Фэн Ю. и др. Раннее выявление антител SARS-CoV-2 у пациентов с COVID-19 как серологического маркера инфекции. Клин Инфекция Дис . (2020) 1: ciaa523. DOI: 10.1093 / cid / ciaa523

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    110. Эсбин М.Н., Уитни О.Н., Чонг С., Маурер А., Дарзак Х, Тьянь Р.Преодоление узкого места в широкомасштабном тестировании: быстрый обзор подходов к тестированию на нуклеиновые кислоты для обнаружения COVID-19. РНК . (2020) 26: 771–83. DOI: 10.1261 / rna.076232.120

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    111. Abbott TR, Dhamdhere G, Liu Y, Lin X, Goudy L, Zeng L, et al. Разработка CRISPR как противовирусной стратегии борьбы с SARS-CoV-2 и гриппом. Ячейка . (2020) 181: 865–76.e12. DOI: 10.1016 / j.cell.2020.04.020

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    112.Маккарти MW. Использование потенциала платформ на основе CRISPR для развития больничной медицины. Expert Rev Anti Infect Ther. (2020) 2020: 1–7. DOI: 10.1080 / 14787210.2020.1761333

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    113. Ван С., Хуанг Б., Ма Х, Лю П, Ван И, Чжан Х и др. Анализ амплификации с использованием рекомбиназы обратной транскрипции для вируса птичьего гриппа подтипа H7. Transbound Emerg Dis. (2020) 67: 877–83. DOI: 10.1111 / т. 13411

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    114. Раваль Дж. С., Бернетт А. Е., Роллинз-Раваль М. А., Григгс Дж. Р., Розенбаум Л., Нильсен Н. Д. и др. Тестирование вязкоупругости при COVID-19: возможный инструмент скрининга на тяжелое заболевание? Переливание. (2020) 6: 1131–2. DOI: 10.1111 / trf.15847

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    116. Пэк Й. Х., Эм Дж., Антигуа, К. Джей Си, Пак Дж. Х., Ким Й, О С. и др. Разработка изотермической амплификации, опосредованной обратной транскрипцией, как быстрого метода раннего обнаружения нового SARS-CoV-2. Заболевшие микробы заражают . (2020) 9: 998–1007. DOI: 10.1080 / 22221751.2020.1756698

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    117. Лу Р, Ву Х, Ван З, Ли И, Цзо Л, Цинь Дж и др. Поправка к: разработке нового метода изотермической амплификации, опосредованного обратной транскрипцией, для быстрого обнаружения SARS-CoV-2. Вирол Син . (2020) 35: 344–7. DOI: 10.1007 / s12250-020-00218-1

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    118.Хуанг В.Е., Лим Б., Сюй С-С, Сюн Д., Ву В., Юй и др. RT-LAMP для быстрой диагностики коронавируса SARS-CoV-2. Микроб Биотехнология . (2020) 13: 950–61. DOI: 10.1111 / 1751-7915.13586

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    119. Yu L, Wu S., Hao X, Dong X, Mao L, Pelechano V, et al. Быстрое обнаружение коронавируса COVID-19 с использованием диагностической платформы изотермической амплификации, опосредованной обратной транскрипцией (RT-LAMP). Clin Chem . (2020) 66: 975–7.DOI: 10.1093 / Clinchem / hvaa102

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    120. Fu W, Chen Q, Wang T. Письмо в редакцию: три случая повторно обнаруживаемой положительной РНК SARS-CoV-2 у выздоровевших пациентов с COVID-19 с антителами. J Med Virol . (2020) 92: 2298–301. DOI: 10.1002 / jmv.25968

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    122. Тил Е.С., Слев П., Уилер С., Кутюрье М.Р., Вонг С.Дж., Кадхода К. Роль тестирования антител на SARS-CoV-2: есть ли оно? Дж. Клин Микробиол .(2020) 58: e00797–20. DOI: 10.1128 / JCM.00797-20

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    123. Пето Дж., Алван Н. А., Годфри К. М., Берджесс Р. А., Хантер Д. Д., Риболи Е. и др. Универсальное еженедельное тестирование в качестве стратегии выхода из режима блокировки COVID-19 в Великобритании. Ланцет. (2020) 395: 1420–21. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (20) 30936-3

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    126. Юнес Н., Аль-Садек Д.В., Аль-Джигефи Х., Юнес С., Аль-Джамаль О., Даас Н.И. и др.Проблемы лабораторной диагностики нового коронавируса SARS-CoV-2. вирусов. (2020) 12: 582. DOI: 10.3390 / v12060582

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    128. Ян В., Данг Х, Ван Ц., Сюй М., Чжао Ц., Чжоу Ц. и др. Быстрое обнаружение SARS-CoV-2 методом обратной транскрипции RT-Lamp. medRxiv. (2020) 3: 1–25. DOI: 10.1101 / 2020.03.02.20030130

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    129. Лауэр С.А., Грантц К.Х., Би К., Джонс Ф.К., Чжэн К., Мередит Х.Р. и др.Инкубационный период коронавирусной болезни 2019 (COVID-19) из официально зарегистрированных подтвержденных случаев: оценка и применение. Ann Intern Med. (2020) 172: 577–82. DOI: 10.7326 / M20-0504

    PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

    131. Насименто-Хуниор Х.А.К., Сантос А.М., Кинтанс-Хуниор Л.Дж., Уокер С.И.Б., Борхес Л.П., Серафини М.Р. и др. Лечение SARS, MERS и SARS-CoV-2 (COVID-19): обзор патента. Мнение эксперта Ther Pat. (2020) 30: 567–79.DOI: 10.1080 / 13543776.2020.1772231

    CrossRef Полный текст | Google Scholar

    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *