Posted in: Разное

Быстрый тюнинг: Ошибка 404. Нет такой страницы

Быстрый тюнинг фар светодиодной лентой

Новые неоновые ночники

Новые неоновые ночники

Мы хорошо потрудились и сделали новую линейку неоновых ночников ручной работы. Если не знаете что подарить — подарите такой ночник. Это будет необычно и в прямом смысле слова — ярко!

Наш неон засветился в клипе!

Наш неон засветился в клипе!

Всегда приятно увидеть результаты своей работы в жизни. В такие минуты понимаешь, что это все «не просто торговля». Ты помогаешь, консультируешь, находишь товарам новые способы применения и благодаря им гости магазина могут реализовать свои фантазии. 

Рисуем в черном блокноте!

Рисуем в черном блокноте!

Рисунок в блокноте с черными страницами смотрится совсем иначе, и порой даже самый простой скетч воспринимается как маленький шедевр. 

Блокноты из фетра, дерева, с черными страницами и другие новинки

Блокноты из фетра, дерева, с черными страницами и другие новинки

К нам приехал новый завоз блокнотов. Модели из фетра (на ощупь, как валенки), тетради с черными страницами, в деревянной обложке и другие интересности. Встречаем!

Фонари для свечей Часть 2

Фонари для свечей Часть 2

Вторая часть видео-презентации нового завоза фонарей для свечей. Модели из дерева, металла, стекла и витражей.

Фонари для свечей Часть 1

Фонари для свечей Часть 1

К нам приехали фонари для свечей! От разноообразия дизайнов разбегаются глаза, поэтому мы разбили видео-презентацию на две части. Представляем Вашему вниманию первую часть.

Еще одна композиция во флорариуме

Еще одна композиция во флорариуме

Интернет пока не позволяет пощупать изделие, однако мы стараемся снимать так, чтобы была видна каждая деталь. Перед вами несколько моделей флорариуммов для цветов и небольшой пример использования.

Свеча на аккумуляторах из нашей мастерской

Свеча на аккумуляторах из нашей мастерской

Свеча, в которой не нужно менять батарейки, которая не испортит интерьер своим китайским видом, была разаботана в нашей мастеркой. Подробнее в этом видео.

История одного рюкзака

История одного рюкзака

Жил-был рюкзак. Он очень любил своего хозяина. И однажды они вместе решили насладиться красивым видом и выпить чашку чая в приятном одиночестве.

Мастер-класс по флорариумам от Тани Вербы

Мастер-класс по флорариумам от Тани Вербы

Как и обещали, выкладываем полный мастер-класс по флорариумам от Тани Вербы. В нем мы расскажем, как сделать красивую композицию из растений, а так же, как использовать флорариум в качестве шкатулки для колец.

Флорариумы для колец и растений

Флорариумы для колец и растений

К нам приехали очаровательные флорариумы для колец и растений. Мы сразу попытались сделать из них нечто интересное. Представляем Вашему вниманию, что у нас уполучилось! p.s. Очень скоро на нашем канале выйдет полноценный видео-урок по флорариумам.

Блокноты из натуральной кожи

Блокноты из натуральной кожи

Коллекция крутых блокнотов из натуральной кожи, дерева, крафтовой бумаги.

Светящаяся буква из гирлянды своими руками

Светящаяся буква из гирлянды своими руками

Сегодня мы расскажем как сделать своими руками красивую светящуюся букву на основе гирлянды. Данный метод идеален, когда вы хотите с минимальными затратами сделать светящуюся объемную конструкцию.

Коллекция подставок для вина

Коллекция подставок для вина

Несколько подставок для вина ручной работы. В ближайшее время обещаем расширение ассортимента:)

Полигональные модели из бумаги

Полигональные модели из бумаги

Новый выпуск lights-market.TV посвящен полигональным моделям из картона, которые можно собрирать самостоятельно. Важная черта данных наборов — в результате получается далеко не поделка, а настоящий шедевр — стильный и современный.

Светящиеся камушки! Приветствуем новинку)

Светящиеся камушки! Приветствуем новинку)

Красивые светящиеся камушки, которые можно использовать для дизайна участка, аквариумов, цветочных горшков и т.д.

Неоновые таблички ручной работы

Неоновые таблички ручной работы

Крутые неоновые таблички ручной работы, которые сделали наши друзья. Приветствуем)

Новые вывески из нашей мастерской

Новые вывески из нашей мастерской

За месяц поднобралось несколько новых проектов. Рады их представить) Делается с помощью обычного неона, который можно приобрести на нашем сайте.

Наша мастерская выпустила новые коробочки

Наша мастерская выпустила новые коробочки

Урррра) Представляем Вашему вниманию новую коллекцию крафтовых деревянных коробок для цветов, бутылок, орехов — чего угодно! Сделано в России!

Маркерные штендеры для кафе

Маркерные штендеры для кафе

На склад поступила новая разновидность досок для кафе — маркерные штендеры. Для рисования на них используются специальные маркеры, такие же как и для LED досок. Изображение получается очень ярким и насыщенным.

MORENDI | Чип тюнинг двигателя — Быстрый и мощный Суперкар!

За последние три десятилетия BMW M5 удалось получить завидное звание «Пятиместный суперкар» и непревзойденную ауру благоговения и мистики. Конечно, некоторые энтузиасты Audi и Mercedes-Benz могут не согласиться с этим, но …

… последняя версия BMW M5 F90 с двигателем S63B44Tx содержит набор качеств, которые придают названию «Суперкар» больше доверия, чем когда-либо. 600 л.с. и 750 Нм крутящего момента плюс время разгона: 0-100 км/ч за 3,4 секунды; до 200 км/ч за 11,4 секунды и максимальная скорость 250 км/ч, а c пакетом V-Drives до 305 км/ч. Конечно же Суперкар, да еще самый быстрый и мощный!

Но самое главное, это революционная модель, так как первый раз в истории BMW M5 получила полный привод xDrive, который может быть отключен в угоду заднему, что наверняка понравится любителям классических BMW. Об этом можно сказать кратко — много тяги, с возможностью для скольжения.

Трансмиссия BMW M5 шестого поколения позволяет выбрать три режима работы стабилизационной системы распределения потенциала 4WD/MDM, 4WD Sport/DSC и 2WD/DSC off. В последнем режиме автомобиль становится заднеприводным. 4WD Sport/DSC улучшает управляемость авто на повышенных скоростях.

Двигатель BMW M5 F90 — 4.4-литровый Twin-Turbo V8 S63B44Tx, фантастическая отзывчивость и мощность которого сочетается с его способностью реветь. Шум, производимый M5, возможно, немного скромнее, чем крик гиперкара, но он все же достойный — громкий и глубокий. Предыдущая версия двигателя BMW 5M (S63B44T0) выдавала 560 л.с. и 680 Нм, теперь развивает 600 л.с. мощности и 750 Нм крутящего момента, что удалось добиться за счет установки новых турбокомпрессоров, увеличению до 350 бар давлению впрыска, улучшенному интеркулеру и высокопроизводительному маслонасосу.

Автомобиль серьезно напичкан электроникой. Почти все в центральной части консоли чувствительно к прикосновению — от клавиатуры, на которой расположены переключатели режимов движения, до верхней части колеса прокрутки iDrive и органов управления кондиционером. Приборная часть также полностью цифровая.

Даже у ключа есть сенсорный экран, способный сказать вам, сколько топлива у вас осталось, закрыты ли двери и тому подобную информацию.
Совокупность инженерных и технологических решений приводят в восторг. Благодаря переходу на полный привод и более легкое рулевое управление BMW M5 стал невероятно плавным и управляемым. Подвеска не дребезжит, даже в более жестких режимах, но при этом чувствуется ощутимая связь с дорогой.

У компании Morendi на данный момент уже есть ряд решений для увеличения мощности и улучшения динамических характеристик BMW M5 F90 с помощью модификации программного обеспечения данного автомобиля. Программы Morendi Stage 1,Stage 2, Stage 2+ и Stage 3 позволяют повысить мощность до 900 л.с. и 1000 Hm. В них использованы продвинутые алгоритмы контроля крутящего момента для максимальной отдачи при минимально возможной нагрузке на двигатель и АКПП.

Возможны следующие результаты:
🔲 Штатно: 600лс / 750Нм
🔲 MORENDI Stage1: 720Hp / 900Nm
🔲 MORENDI Stage2: 760Hp / 900Nm
🔲 MORENDI Stage2+: 850Hp / 1000Nm
🔲 MORENDI Stage3: 900+Hp /1000Nm

🔌 Прошивка через диагностический разъем
🏁 Без ограничения скорости
⏱️ Улучшенная реакция
🔥 Возможно добавить Отстрелы (Burble, popcorn)

>>> Чип тюнинг BMW M5 4.4 V8 Bi-Turbo (600 л.с.) — в нашем каталоге.

Audi RS7 Sportback превратили в самый быстрый броневик

Respected for designing the world’s most sophisticated mobile safe-rooms, AddArmor is excited to announce its latest creation: the world’s fastest armored car. The new 202 mph AddArmor APR-tuned RS 7 showcases the new developments in lightweight combat-proven polycarbonate armor paneling. With armored vehicles long being associated with slower, heavy duty trucks, AddArmor wanted to showcase an armored car to highlight just how far modern armoring technology has come. The polycarbonate weave cocooning the AddArmor APR RS 7 is 10 times stronger than ballistic steel while weighing 60% less. All in car that can perform at speeds of more than 200 mph.

“With the new AddArmor APR RS 7, we wanted to demonstrate how today’s armoring technology allows drivers to pick from a wide range of cars not normally associated with armored vehicles. The total armoring weight of the AddArmor APR RS 7 is no more than 200 pounds,” comments AddArmor President Jeff Engen. “That small amount of weight allows for exotic sports cars and even electric vehicles to be nicely armored without compromising their performance or range. The key difference is AddArmor uses a polycarbonate composite instead of heavy steel plating. The weave offers a much stronger, lighter package that simultaneously allows the car to be much faster.”

With speed being a critical element of safety, the lightweight armoring from AddArmor provides comprehensive 360-degree protection without compromising acceleration or braking. The AddArmor RS 7 also features an APR Plus Stage II system to further compliment the RS 7’s 4.0L twin-turbo engine. This special performance package produces 760 horsepower/800 lb-ft of torque (665/726 on website) with a manufacturer-clocked 0 – 60 mph time of 2.9 seconds.

AddArmor’s elite team of specialists upfitted European B4-level armoring to the RS 7 (AddArmor offers up to B7 protection for vehicles that can stop armor-piercing rounds.) The AddArmor APR RS 7 B4 package combines front-seat 360-degree polycarbonate body panels and ballistic glass to limit weight and protect the primary the occupants. AddArmor ballistic glass is comprised of a multi-layer mixture of polycarbonate and ballistic glass, which provides a transparent layer of armor that can withstand prolonged attacks from blunt objects such as bats or cinder blocks. Ballistically, the B4 armor can stop a .44 Magnum round, allowing drivers and passengers to evade attack.

The AddArmor APR RS 7 features Delta Force-tested security throughout. Hidden security countermeasures include a sonic sound cannon with a PA system and siren capable of 120 dB. Other security items include electric-shock door handles equivalent to a high-powered taser gun and pepper spray dispensers. For ramming, AddArmor installed a front barrier bumper that protects the car’s radiator while also allowing the automobile to comfortably drive through most ambush situations. The AddArmor APR RS 7 also includes a specially developed rear blinding light system that uses aircraft landing technology to temporarily blind assailants. The new vehicle also features a custom smokescreen system. For added security, the AddArmor APR RS 7 includes biometric gun racks hidden in the trunk that can accommodate assault rifles and handguns.

Another unique security measure included on the AddArmor APR RS 7 is a special Global 911 concierge service. This satellite-activated 24/7 system monitors the vehicle’s occupants via their cell phones and an array of beacons. Any sign of trouble automatically sets off a siren in a command center staffed by highly trained security staff with military and first-responder backgrounds. The Global 911 concierge service assesses all security situations as they arise and dispatches solutions in the case of any emergency. These systems allow AddArmor to protect their clients anywhere around the globe.

For added security, the new AddArmor APR RS 7 includes a multitude of other on-board tactical electronics. An overseas-compliant drone-denial frequency-jamming satellite communications system has been installed alongside active mine/explosion detection, as well as a state-of-the-art 360-degree night-vision camera system. In the case of any airborne attacks, the AddArmor APR RS 7 has an overpressure gas detection unit with onboard gas masks and air tanks to supply filtered fresh breathing air.

The RS7 runs on high-performance 275/30ZR21 Pirelli P Zero Run Flat tires capable of driving 30 miles after sustaining multiple high-powered rifle shots.

The AddArmor APR RS 7 demonstrates how AddArmor provides custom protection packages to meet clients’ needs for either new or existing vehicles. Security packages for executive, work, personal, and family vehicles are available starting at $28,000. The new AddArmor APR RS 7 is available for $205,000. For more information, please visit AddArmor.com, email [email protected], or call 888.878.0021.

Модификация машин в Need for Speed™ Heat

Выберите свой стиль

У каждого водителя есть свои предпочтения, навыки и требования, в соответствии с которыми он тюнингует свою машину. Теперь у вас есть больше возможностей настроить машину по своему желанию.

Готовитесь к игровому событию, во время которого нужно будет дрифтовать? Хотите, чтобы на скользкой дороге ваш автомобиль держал сцепление даже на резких поворотах? Или просто мечтаете создать самую быструю и мощную тачку, которая когда-либо появлялась на улицах Палм-Сити? В игре Need for Speed Heat вы можете настроить любую машину под собственный стиль вождения и нужды. От грипа до дрифта и бездорожья. Выбор за вами. Какую бы машину вы не хотели создать, мы вам поможем. 

 

Замена двигателя для улучшения машины

С самой первой минуты в гараже у вас будут детали для создания и улучшения вашей мощной и надежной машины. И впервые в Need for Speed вы сможете менять двигатели, чтобы до предела улучшить производительность практически каждой машины в игре. Замена двигателя поможет превратить свою любимую потрепанную машину в настоящего зверя на колесах.

 

Ночные гонки — дело опасное

Участвуя в ночных и дневных событиях в Need for Speed Heat, вы будете получать новое снаряжение. Правда после заката награда будет лучше. Но нельзя забывать о том, что ночные гонки — дело опасное. Насколько опасное, вы спросите? Ну, если вы не протянете до восхода солнца, то очень быстро потеряете всё, что имеете. Победы в ночных событиях могут принести вам уникальные высококлассные запчасти для машины, но вам придется сначала доставить их в гараж, потому что копы отберут лакомый кусок, если догонят вас!           

Ночью вы можете получать крупные награды и повышать уровень погони. Для этого надо врезаться в полицейские машины, уходить от преследований и выигрывать гонки. 

 

Это сладкое слово — победа

Нет ничего приятнее, чем оставлять соперников далеко позади, оглушенных рёвом вашего двигателя, в облаке из пыли и выхлопного газа.

В Need for Speed Heat, звук выхлопной трубы меняется в зависимости от двигателя и выхлопной системы вашего автомобиля. И впервые в Need for Speed вы сможете настроить выхлопную систему для того, чтобы создать поистине уникальный и запоминающийся звук двигателя.

Огорошите ли вы соперников и продажных копов высоким протяжным воем или оглушительным рёвом? Выбор за вами, главное, сделайте так, чтобы вас не скоро позабыли.      

 

Полная свобода самовыражения

Конечно, вам нужна быстрая машина, но ведь хочется, чтобы она ещё и стильно выглядела. К счастью, вы можете настроить внешний вид своего автомобиля с помощью огромного ассортимента красок и вариантов покрытия, включая те, которых не было ни в одной игре серии Need for Speed.

Блёстки. Градиент. Углеродное волокно. Переливающиеся материалы. Глянцевые, атласные и матовые варианты покрытия. Вы точно захотите выглядеть на все сто, зарабатывая себе репутацию в ночном неоновом городе!

 

Настройка персонажа

Теперь вы можете настраивать внешность своего персонажа — ещё одно нововведение в Need for Speed. Когда вы будете довольны внешним видом и характеристиками своей машины, можете приступить к созданию персонажа, который соответствует вашему настроению, стилю и автомобилю.

Создайте аватар, который запомнится каждому, и заставьте говорить о себе в Палм-Сити — рае для уличных гонщиков.

Хотите узнать подробнее, как властвовать во тьме и следовать за светом в Need for Speed Heat? Изучите наши статьи «Добро пожаловать в Палм-Сити», «Достижения и призы» и полный список машин, чтобы быть в курсе событий с самого первого дня.

 

Need for Speed Heat выходит 8 ноября 2019 года на Xbox One, PlayStation® 4 и PC. Ранний доступ в игру откроется 5 ноября для подписчиков сервисов Origin Access и EA Access.*

Оформите предзаказ стандартного изданияи получите стартовый автомобиль K.S Edition или оформите предзаказ издания Deluxe и получите стартовый автомобиль K.S Edition и три машины K.S, которые можно открыть в игре. Особые машины и многое другое! ** 

Подпишитесь на новостную рассылку, чтобы получать последние новости о Need for Speed, закулисный контент, специальные предложения и многое другое (включая прочие новости EA, информацию о продуктах, событиях и акциях) по электронной почте.

Следите за новостями в Twitter и Instagram, нажмите «Нравится» на нашей странице в Facebook и подпишитесь на наш канал в YouTube.

*ДЕЙСТВУЮТ ОПРЕДЕЛЁННЫЕ УСЛОВИЯ, ОГРАНИЧЕНИЯ И ИСКЛЮЧЕНИЯ.  ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ СВЕДЕНИЯ СМ. НА СТРАНИЦАХ ea.com/ru-ru/ea-access/terms И origin.com/store/origin-access/terms.

**ДЕЙСТВУЮТ ОПРЕДЕЛЕННЫЕ ПРАВИЛА И ОГРАНИЧЕНИЯ. ПОДРОБНОСТИ ПО ССЫЛКЕ: www.ea.com/ru-ru/games/need-for-speed/need-for-speed-heat/pre-order-disclaimers.

Manhant Performance создали тюнинг проект Lamborghini Urus

Немецкое тюнинг-ателье взялось за доработку одного из самых быстрых кроссоверов мира.

Lamborghini Urus от тюнинг-ателье Manhant Performance

Многие думают, что эта машина итак является практически идеальной во всех планах. Многие, но не немецкие инженеры из тюнинг-ателье Manhant Performance. Их не устроило, что «стоковый» кроссовер, обладающий 4-литровым V8 с двойным турбонаддувом реализовывает 650 л.с. и 850 Нм максимального крутящего момента. Они решили внести свои коррективы, в результате которых с мотора удалось «снять» 812 л.с. и 980 Нм. Причем улучшений удалось добиться путем перепрограммирования электронного блока управления двигателем, установки более производительных турбин и доработки выпускной системы. Естественно, 8-ступенчатая автоматическая коробка подверглась качественной доработке. Прирост л.с составил примерную мощность 1,5-литровой Mazda MX-5. А мощность доработанной версии теперь превосходит своего «спортивного» собрата по марке Lamborghini Aventador SVJ, чей благородный атмосферный 6,5-литровый V12 способен реализовать 770 л.с. и 720 Нм крутящего момента.

Мощность доработанной модели составляет 812 л.с. и 980 Нм максимального крутящего момента

Выпущенный с завода Lamborghni Urus может разгоняться с места до 100 км/ч всего за 3,6 секунды. Это весьма нескромный показатель, тем более для кроссовера. Максимальная скорость ограничена электроникой и составляет 305 км/ч. К сожалению, инженеры Manhant Performance не сообщили точных данных своей «доработки», но складывается впечатление, что она покажет куда лучший результат, чем «заводской» вариант модели.

Новый проект займет достойное место в списке известного тюнинг-ателье Manhant Performance. 

Также изменения коснулись и экстерьера. Новый Lamborghni Urus получил карбоновый капот и аэродинамический кузовной обвес, тоже из углеволокна. Он представлен передним сплиттером, расширителями колесных арок, переработанными «жабрами» передних крыльев, накладками на пороги, задним спойлером и задним же диффузором. Цветовое оформление кузова претерпело значительные изменения: добавилось множество черных акцентов. Зеркала заднего вида, пластиковые накладки на бампера и наклейки в виде полос по всему кузову. Черными стали и 21-дюймовые эксклюзивные диски с низкопрофильной резиной Pirelli P-Zero.

Самый быстрый кроссовер Lamborghini Urus стал еще быстрее, получив доработки тюнинг-ателье Manhant Performance

Тюнинг. Закись азота – быстрый результат

Тюнинг Субару. Часть 12.

Закись азота, NOS (от англ. Nitrous Oxide System) или, по-простому, нитрос – это химическое соединение,  являющееся дополнительным окислителем топлива. Из-за высокой температуры в камере сгорания происходит разложении N2O на кислород и азот. Для справки: в состав закиси азота входит 36% кислорода, то есть почти в 2 раза больше, чем в воздухе. Автомобильное топливо сгорает эффективнее, давление в цилиндрах увеличивается, что и приводит в скачку мощности. При этом есть дополнительный плюс – азот препятствует детонации.

Если необходимость  форсирования двигателя возникает нечасто, например, при старте или обгоне, хорошей альтернативой механическому тюнингу будет оснащение автомобиля закисью азота.  Прирост «лошадиных сил» происходит только при кратковременном впрыске состава во впускной коллектор,  а в остальное время машина остается обычным средством передвижения с установленной мощностью и без перерасхода топлива. Система проста в установке и может быть легко демонтирована, имеет демократичную стоимость по сравнению с другими инструментами тюнинга двигателя.

Существует 3 вида систем  впрыска: сухая, мокрая, системе прямого впрыска (но это отдельная тема). Безусловно, при выборе системы нельзя превышать возможности двигателя Субару, в противном случае возникает риск выхода его из строя.

И в заключении хотим еще раз напомнить, что планируя проведение тюнинга, необходимо составить точную схему работ, чтобы не ухудшить имеющиеся технические характеристики.

В представленном цикле статей мы постарались коснуться основных видов тюнинга двигателя Субару. Но даже в таком большом материале невозможно осветить все технические нюансы.

Если у вас появились вопросы, пожалуйста, обращайтесь. Вы всегда сможете проконсультироваться со специалистами сервиса «Субару на Лихоборке» по телефону +7 (925) 041-97-17 или электронной почте: [email protected]

По мере готовности остальных статей вы сможете перейти к нужному разделу по ссылке из Оглавления:

1. Виды тюнинга
2. Диагностика и ремонт двигателя – первый шаг к тюнингу
3. Чип-тюнинг Субару, экономично и эффективно
4. Установка турбины Субару
5. Тюнинг топливной системы Субару
6. Настройка выхлопной системы Субару как необходимый этап для тюнинга двигателя
7. Мелкий подготовительный тюнинг
8. Тюнинг двигателя: повышение параметров надежности
9. Новый коленвал, поршни и шатуны Субару – новые возможности
10. Строкер-кит и гильзовка
11. Спортивный распредвал для Субару
12. Закись азота – быстрый результат

Гидрокрыло (тюнинг ПЛМ для мотолодки).

Поиск

Гидрокрыло (антикавитационное крыло) можно отнести к тюнингу Вашего ПЛМ (моторной лодки или катера). Гидрокрыло крепится на кавитационной плите в нижней части сапога ПЛМ, под водой. Каждый владелец подвесного лодочного мотора не раз задумывался над целесообразностью тюнинга. Иногда, выйдя на воду можно увидеть точно такую же технику как и у Вас, точно такой же мотор, который ведет себя по-другому. Возникают вопрос, например: почему лодка с таким же мотором и количеством людей на борту быстрее выходит на глиссирование?

Возможно, все дело в приспособлении для лодочного мотора с загадочным названием «hydrofoil» или «антикавитационное крыло» (название получено от места установки — антикавитационная плита).

Русскоязычных названий у крыльев несколько:

— антикавитационные крылья,
— гидрокрылья,
— гидростабилизатор,
— подводные крылья.

Визуально гидрокрылья можно разделить на два типа — монокрыло и стандартные крылья состоящие из двух частей. По размеру приспособления делятся на три типоразмера — для моторов до 30л.с., для моторов до 50л.с. и для моторов свыше 50л.с. Монокрылья рекомендуется устанавливать на лодочные моторы средней и высокой мощности от 50л.с. Монтаж любой модели крыльев достаточно прост: необходимо просверлить 4 отверстия в антикавитационной плите мотора, и закрепить крылья болтами.

Технические задачи, которые можно решить, установкой гидрокрыла:

1. Устранение режима дильфинирования. Когда на глиссирующем катере или мотолодке идешь по короткой волне выжимая, все имеющиеся лошади из своего ПЛМ (двигатель периодически издает звуки, как будто винт вытащили из воды и происходит сброс скорости). Этот режим часто сопровождается прорывом воздуха к винту, что приводит к эффекту временной кавитации винта и скоростному рывку на подхвате. Гидрокрыло позволяет полностью устранить этот эффект.

2. Гидрокрыло минимизирует этот вынос при движении катера или мотолодки в повороте или развороте и проскальзывание (вынос корпуса наружу радиуса поворота), давая возможность совершить спортивный разворот (поворот).

3. Гидрокрыло помогает более быстрому выходу на глиссер, однако стоит отметить что особо рассчитывать на эту способность не следует, эффект слишком незначителен. Гидрокрыло не заменит транцевые плиты.

Стоит добавить, что популярность гидрокрыльев растет. Появляются новые, совершенные модели. Бывают специальные гидрокрылья для троллинга, складывающиеся в направлении винта и создающие дополнительное сопротивление, движению катера, замедляя его скорость. Возможно, что гидрокрылья в РФ станут такими же популярными как в Финляндии, где можно встретить множество разнообразных моделей, в том числе и самодельного производства.

Подводя итоги можно сказать, что основным плюсом гидрокрыльев является обеспечение более быстрого выхода в режим глиссирования(время сокращается на 10-15%). Также применение крыльев увеличивает площадь антикавитационной плиты, что улучшает курсовую устойчивость хода лодки. Основным минусом антикавитационных крыльев можно назвать небольшое снижение скорости на 3-5%, но если стоит проблема выхода на глиссирование из-за увеличенного кормового дифферента (центр тяжести лодки смещен в заднюю часть), то установка гидрокрыльев может решить проблему. После установки крыльев центр тяжести смещается и нос лодки опускается, убирая эффект свечки.

Хотелось бы дать совет — если нет проблем с выходом на глиссирование и кормовым дифферентом, то не нужно устанавливать антикавитационные крылья в качестве эстетического аксессуара.

Быстрая настройка двойного резонанса Фано с использованием метаматериала с фазовым переходом при малой мощности

  • Папасимакис Н., Федотов В.А., Желудев Н.И., Просвирнин С.Л. Метаматериальный аналог электромагнитно-индуцированной прозрачности. Phys. Rev. Lett. 101, 253903 (2008).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • Лю Н. и др. Плазмонный аналог электромагнитно-индуцированной прозрачности на пределе затухания Друде.Nature Mater. 8, 758–762 (2009).

    ADS CAS Google ученый

  • Лю С., Янг З., Лю Р. и Ли X. Высокочувствительный локализованный поверхностный плазмонный резонанс с использованием двойной полости NanoRing. J. Phys. Chem. С. 115, 24469–24477 (2011).

    CAS Google ученый

  • О’Хара, Дж. Ф. и др. Тонкопленочное зондирование плоскими метаматериалами терагерцового диапазона: чувствительность и ограничения.Опт. Express 16, 1786–1795 (2008).

    ADS PubMed Google ученый

  • Ломбарди, Дж. Р. и Бирке, Р. Л. Унифицированный взгляд на поверхностно-усиленное комбинационное рассеяние. В соотв. Chem. Res. 42, 734–742 (2009).

    CAS PubMed Google ученый

  • Chang, W. S. et al. Плазмонный переключатель Фано. Nano Lett. 12. С. 4977–4982 (2012).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • Wu, C., Ханикаев А. Б., Швец Г. Широкополосный медленный световой метаматериал на основе резонанса двойного континуума Фано. Phys. Rev. Lett. 106, 107403 (2011).

    ADS PubMed Google ученый

  • Чжу Ю., Ху Х., Хуанг Ю., Ян Х. и Гонг К. Быстрый и маломощный полностью оптический перестраиваемый резонанс Фано в плазмонных микроструктурах. Adv. Опт. Матер. 2013. Т. 1. С. 61–67.

    Google ученый

  • Чжан, Ю.Б., Ху, X. Y., Фу, Ю. Л., Янг, Х. и Гонг, К. Х. Сверхбыстрый полностью оптический перестраиваемый резонанс Фано в нелинейных сегнетоэлектрических фотонных кристаллах. Прил. Phys. Lett. 100, 031106 (2012).

    ADS Google ученый

  • Хо, Дж. Ф., Лукьянчук, Б. и Чжан, Дж. Б. Настраиваемые резонансы Фано в многослойных нанооболочках серебро – кремнезем – серебро. Прил. Phys. А 107, 133–137 (2012).

    ADS CAS Google ученый

  • Вентилятор, W.Дж., Чжан, С., Минхас, Б., Маллой, К. Дж. И Брюк, С. Р. Дж. Улучшенная передача инфракрасного излучения через субволновые коаксиальные металлические решетки. Phys. Rev. Lett. 94, 033902 (2005).

    ADS PubMed Google ученый

  • Christ, A. et al. Управление интерференцией Фано в плазмонной решетке. Phys. Ред. B 76, 201405 (R) (2007).

    ADS Google ученый

  • Артар, А., Яник А.А., Алтуг Х. Направленные двойные резонансы Фано в плазмонных гетероолигомерах. Nano Lett. 11. С. 3694–3700 (2011).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • Fan, J. A. et al. Самосборные кластеры плазмонных наночастиц. Science 328, 1135–1138 (2010).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • Федотов В.А., Роза М., Просвирнин С.Л., Папасимакис Н., Желудев Н. И. Резонансы острых захваченных мод в плоских метаматериалах с нарушенной структурной симметрией. Phys. Rev. Lett. 99, 147401 (2007).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • Сингх Р. и др. Наблюдение индуцированной метаматериалом прозрачности в отдельных резонаторах Фано с нарушенной симметрией. Прил. Phys. Lett. 99, 201107 (2011).

    ADS Google ученый

  • Cao, W.и другие. Плазмонные метаматериалы Фано со сверхвысокой добротностью в темной моде с низкими потерями. Опт. Lett. 37, 3366–3368 (2012).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • Gu, J. et al. Активный контроль аналога электромагнитно-индуцированной прозрачности в метаматериалах терагерцового диапазона. Nat. Commun. 3, 1151 (2012).

    ADS PubMed Google ученый

  • Пенья-Родригес, О., Ривера, А., Campoy-Quilesb, M. & Palc, U. Настраиваемый резонанс Фано в симметричных многослойных золотых нанооболочках. Наноразмер. 5. С. 209–216 (2013).

    ADS PubMed Google ученый

  • Wu, C. et al. Фанорезонансные асимметричные метаматериалы для сверхчувствительной спектроскопии и идентификации молекулярных монослоев. Nat. Матер. 11. С. 69–75 (2012).

    ADS CAS Google ученый

  • Wu, C., Ханикаев А. Б., Швец Г. Широкополосный медленный световой метаматериал на основе резонанса двойного континуума Фано. Phys. Rev. Lett. 106, 107403 (2011).

    ADS PubMed Google ученый

  • Ву Д., Цзян С. М. и Лю Х. Дж. Настраиваемые резонансы Фано в трехслойных биметаллических наночастицах золота и серебра. J. Phys. Chem. С 115, 23797–23801 (2011).

    CAS Google ученый

  • Ласситер, Дж.B. et al. Проектирование и деконструкция формы линии Фано в плазмонных нанокластерах. Nano Lett. 12. С. 1058–1062 (2012).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • Verellen, N. et al. Резонансы Фано в индивидуальных когерентных плазмонных нанополостах. Nano Lett. 9. С. 1663–1667 (2009).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • Hao, F. et al. Нарушение симметрии плазмонных нанополостей: субрадиантное LSPR зондирование и настраиваемый резонанс Фано.Nano Lett. 8, 3983–3988 (2008).

    ADS CAS Google ученый

  • Фен, С. Ф., Чжан, X. П. и Клар, П. Дж. Волноводные решетки микрополостей Фабри-Перо. Прил. Phys. Lett. 99, 053119 (2011).

    ADS Google ученый

  • Сингх Р. и др. Оптическая настройка и сверхбыстрая динамика высокотемпературных сверхпроводящих метаматериалов терагерцового диапазона. Нанофотоника 2012. № 1. С. 117–123.

    ADS CAS Google ученый

  • Gu, J. et al. Активный гибридный плазмонный метаматериал. Опт. Матер. Экспресс 2, 31–37 (2012).

    ADS CAS Google ученый

  • Прайс, И. М., Айдин, К., Келайта, Ю. А., Бриггс, Р. М. и Этуотер, Х. А. Сильно деформированные податливые оптические метаматериалы с большой перестраиваемой частотой. Nano Lett. 10, 4222–4227 (2010).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • Белотелов В.И. и др. Усиленные магнитооптические эффекты в магнитоплазмонных кристаллах. Nat. Nanotechnol. 6. С. 370–376 (2011).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • Kurter, C. et al. Классический аналог электромагнитно-индуцированной прозрачности с гибридным метаматериалом металл-сверхпроводник.Phys. Rev. Lett. 107 043901 (2011).

    ADS PubMed Google ученый

  • Sámson, Z. L. et al. Электрооптический переключатель из метаматериала наноразмерной толщины. Прил. Phys. Lett. 96, 143105 (2010).

    ADS Google ученый

  • Mousavi, S.H. et al. Индуктивная настройка фано-резонансных метаповерхностей с использованием плазмонного отклика графена в среднем инфракрасном диапазоне. Nano Lett.13, 1111–1117 (2013).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • Ху, X. Y., Zhang, Y. B., Fu, Y. L., Yang, H. & Gong, Q.H. Быстрый и маломощный полностью оптический перестраиваемый резонанс Фано в плазмонных микроструктурах. Adv. Матер. 23. С. 4295–4300 (2011).

    CAS PubMed Google ученый

  • Zhang, S. et al. Оптические объемные метаматериалы с отрицательным показателем преломления, состоящие из двумерных перфорированных пакетов металл-диэлектрик.Опт. Express 14, 6778–6787 (2006).

    ADS PubMed Google ученый

  • Valentine, J. et al. Трехмерный оптический метаматериал с отрицательным показателем преломления. Nature 455, 376–379 (2008).

    ADS CAS PubMed PubMed Central Google ученый

  • Лю Н. и др. Трехмерные фотонные метаматериалы на оптических частотах. Nat.Матер. 7. С. 31–37 (2008).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • Li, T. et al. Эффект связи магнитного поляритона в перфорированных слоистых метаматериалах металл / диэлектрик и его влияние на передачу отрицательного преломления. Опт. Express 14, 11155–11163 (2006).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • Цао, Т., Симпсон, Р. Э. и Крайан, М.J. Исследование перестраиваемых метаматериалов с отрицательным показателем преломления на основе материалов с фазовым переходом. J. Opt. Soc. Являюсь. B 30,439–444 (2013).

    ADS CAS Google ученый

  • Цао, Т., Чжан, Л., Симпсон, Р. Э. и Крайан, М. Дж. Настраиваемый, независимый от поляризации совершенный поглотитель среднего инфракрасного диапазона, использующий метаматериал с фазовым переходом. J. Opt. Soc. Являюсь. B 30,1580–1585 (2013).

    ADS CAS Google ученый

  • Ван Дж.Q. et al. Двойные резонансы Фано из-за взаимодействия электрических и магнитных плазмонных мод в планарной плазмонной структуре с высокой чувствительностью. Opt.Express 21, 2236–2244 (2013).

    ADS PubMed Google ученый

  • Шпортко К. и др. Резонансное связывание в материалах с кристаллическим фазовым переходом. Nature 7, 653–658 (2008).

    CAS Google ученый

  • Мишель А.U. et al. Использование материалов с малыми потерями фазового перехода для настройки резонанса антенн в среднем инфракрасном диапазоне. Нано. Lett. 13, 3470–3475 (2013).

    ADS CAS PubMed Google ученый

  • Orava, J. et al. Методом спектроскопической эллипсометрии, зависящей от температуры, исследованы оптические свойства и фазовый переход в тонких пленках, подвергшихся мгновенному напылению Ge2Sb2Te5. J.Appl.Phys. 104, 043523 (2008).

    ADS Google ученый

  • Гуннар, Д., Кристиан, Э., Мартин, В., Костас, М. С. и Стефан, Л. Метаматериал с низкими потерями и отрицательным показателем преломления на телекоммуникационных длинах волн. Opt.Lett. 31,1800–1802 (2006).

    Google ученый

  • Джонсон П. Б. и Кристи Р. В. Оптические константы благородных металлов. Phys. Ред. B 6, 4370–4379 (1972).

    ADS CAS Google ученый

  • Чен, Х., Чен, Ю., Янь, М.& Цю М. Наносекундные фототермические эффекты в плазмонных наноструктурах. АСУ Нано 6. 2012. С. 2550–2557.

    CAS PubMed Google ученый

  • Айдин, К., Ферри, В. Э., Бриггс, Р. М. и Этуотер, Х. А. Широкополосное поляризационно-независимое резонансное поглощение света с использованием ультратонких плазмонных суперпоглотителей. Nat. Commun. 2, 517 (2011).

    ADS Google ученый

  • Симпсон, Р.E. et al. Межфазная память с изменением фаз. Nat. Нанотехнологии. 6. С. 501–505 (2011).

    ADS CAS Google ученый

  • Лю Н., Меш М., Вайс Т., Хентшель М. и Гиссен Х. Совершенный поглотитель инфракрасного излучения и его применение в качестве плазмонного датчика. Nano Lett. 10, 2342–2348 (2010).

    ADS CAS Google ученый

  • млн лет назад, Y. et al. Плазмонная прозрачность в скрученных метаматериалах Фано терагерцового диапазона.Опт. Матер. Express 1. С. 391–399 (2011).

    ADS CAS Google ученый

  • Мирошниченко, А. Э., Флах, С., Кившар, Ю. С. Резонансы Фано в наноразмерных структурах. Ред. Мод. Phys. 82, 2257–2298 (2010).

    ADS CAS Google ученый

  • Фано, У. Влияние взаимодействия конфигурации на интенсивности и фазовые сдвиги. Phys. Ред. 124, 1866–1878 (1961).

    ADS CAS МАТЕМАТИКА Google ученый

  • Лагутин Б.М. и др. Фотоионизация Kr вблизи 4-секундного порога. IV. Фотоионизация через автоионизацию двояковозбужденных состояний. J. Phys. Летучая мышь. Мол. Опт. Phys. 27, 5221–5239 (1994).

    ADS CAS Google ученый

  • Kuwahara, M. et al. Измерение теплопроводности тонких пленок нанометрового размера с помощью явления термоотражения.Микроэлектрон. Англ. 84, 1792–1796 (2007).

    CAS Google ученый

  • Chen, G. & Hui, P. Теплопроводность напыленных пленок золота на кремнии и стекле. Прил. Phys. Lett. 74, 2942 (1999).

    ADS CAS Google ученый

  • Адаптивная настройка скорости мутаций позволяет быстро реагировать на летальный стресс у Escherichia coli

    Рецензент № 1:

    Этот обзор сделан с точки зрения «широкой аудитории», неформально интересующейся мутаторами.Эта статья показала, что, когда E. coli подвергалась летальному воздействию этанола, мутаторы развивались в нескольких линиях. Эти мутаторные линии (но не линии с нормальным уровнем мутаций) могут переносить летальные уровни этанола. На более поздних стадиях эволюции частота мутаций в этих линиях мутаторов была снижена.

    Авторы утверждают, что «скорость мутации организма часто считается медленно меняющимся параметром». Я не уверен, верно ли это утверждение, поскольку Wielgoss et al., 2013 показали, что гипер-мутатор развился в одной из 12 линий Ленски и что позже он был заменен более мягкими мутаторами.Разница в том, что в этом исследовании снижение частоты мутаций происходит за счет компенсаторных мутаций вместо замены одного типа мутатора другим типом. Hammerstrom et al. (2015) (не цитируется) показали, что гипермутаторы могут неоднократно развиваться в ответ на тигециклин (через вставку транспозона). Таким образом, повторная эволюция гипермутатора (в отличие от случайного появления мутатора в одной из линий Ленского) также не нова. Однако в этой статье есть интересные эксперименты, и динамика частоты мутаций также отслеживается с прекрасным разрешением.

    Мы благодарим рецензента за высокую оценку нашей работы, а также за подробные исправления и предложения, которые были внесены для дальнейшего улучшения рукописи.

    Wielgoss et al. , 2013 действительно сообщили о появлении гипермутатора и более позднем снижении частоты мутаций в одной из линий Ленски. Однако в свете их работы мы по-прежнему считаем, что наше утверждение о том, что частота мутаций является медленно развивающимся параметром, верно, поскольку это увеличение и последующее снижение происходило в течение длительного периода времени (± 40 000 поколений или 20 лет) и наблюдалось в только одна репликация населения.Кроме того, как также указал рецензент 3, считается, что гораздо более низкие коэффициенты отбора стимулируют отбор генотипов с более низкой частотой мутаций и наблюдались в исследованиях без стресса или в условиях умеренного стресса (Wielgoss et al. , 2013; Sniegowski, Герриш и Ленски, 1997; Баррик и др. , 2009; Сандберг и др. , 2014). В целом, мы считаем, что можно утверждать, что скорость мутации организма часто считается медленно меняющимся параметром.

    Спасибо, что указали на Hammerstrom et al. , которое показывает повторяющуюся эволюцию гипермутаторов A. baumannii в ответ на лечение тигециклином (Hammerstrom et al. , 2015). Это демонстрирует, что наши наблюдения гипермутации во всех линиях с высокой толерантностью к этанолу не ограничиваются почти летальным этанольным стрессом, но лежат в основе более широкого феномена, когда клетки, подвергшиеся экстремальному стрессу (включая этанол или антибиотики), предпочитают более высокую частоту мутаций, чтобы избежать исчезновения.Поскольку эта превосходная работа подтверждает клиническую значимость нашего исследования, мы процитировали ссылку 36 и обсудили ее как в разделах «Введение», так и в раздел «Обсуждение» исправленной рукописи.

    Однако мы считаем, что наши результаты выходят далеко за рамки исследования Hammerstrom et al. Мы не только описываем быструю, повторяющуюся эволюцию гипермутации в каждой линии с высокой толерантностью к этанолу, но также и эволюцию множественных, последовательных повышений и понижений частоты мутаций в пределах одной и той же эволюционной линии.Насколько нам известно, такого динамичного изменения частоты мутаций с течением времени никогда раньше не наблюдалось. Чтобы подчеркнуть разницу между повторяющейся эволюцией гипермутации во всех линиях с высокой толерантностью к этанолу и повторяющимся увеличением и уменьшением, наблюдаемым внутри линии, мы изменили реферат, чтобы подчеркнуть основные результаты нашего исследования.

    «[…] Напротив, мы демонстрируем неожиданную гибкость в скорости клеточных мутаций в ответ на изменения давления отбора. Мы показываем, что гипермутация независимо развивается, когда разные культуры Escherichia coli адаптируются к высокому этанольному стрессу.Кроме того, состояния гипермутации преходящи и часто чередуются с уменьшением частоты мутаций. В частности, частота мутаций увеличивается, когда клетки испытывают более высокий стресс, и снова снижается, когда клетки адаптируются. […] »

    Основные пункты:

    Подраздел «Долгосрочная адаптация к высокой концентрации этанола у E. coli зависит от гипермутации»: «эволюционные тупики» — откуда вы это знаете? Вы вводили мутации-мутаторы в тупиковые линии и наблюдали отсутствие улучшенной выживаемости этанола? Если так, то будет интересно узнать, почему «тупиковые» линии не смогли развить мутаторные фенотипы.

    Мы не вводили мутаторную мутацию обратно в эти тупиковые линии. Поэтому мы удалили и перефразировали термин «эволюционные тупики», чтобы описать эти линии с низкой толерантностью к этанолу в рукописи.

    «[…] Хотя толерантность к этанолу увеличилась во всех популяциях, только восемь из 20 линий развили толерантность к очень высоким (7% и более) концентрациям этанола (рис. 2B), в то время как другие 12 линий периодически вымирают и развивают толерантность только к относительно низкие концентрации этанола (6% или ниже).[…] »

    «[…] Если для роста штамму требовалось более 14 дней, мы предполагали, что эта популяция вымерла. […]»

    «[…] Если штамм не показал роста в течение 14 дней, мы предположили, что линия вымерла, и мы восстановили предыдущую сохраненную промежуточную точку, чтобы возобновить эволюцию. […]»

    Хотя у нас нет прямых доказательств, введение мутации-мутатора могло бы позволить этим линиям еще больше адаптироваться к более высоким уровням стресса. Чтобы лучше понять, почему эти линии не развили мутаторный фенотип, мы секвенировали 2 линии с низкой толерантностью (E4 и E17).Обе эти линии накопили мутацию в fabA , гене, участвующем в биосинтезе жирных кислот, который уже был связан с более высокой толерантностью к этанолу (Dombek and Ingram, 1984; Luo, et al. , 2009). Однако линия E4 дополнительно содержала мутацию в rpoZ , а линия E17 накапливала дополнительную делецию infB . rpoZ кодирует субъединицу РНК-полимеразы и играет роль в транскрипции, тогда как infB кодирует фактор инициации белковой цепи и играет роль в трансляции.Недавно было показано, что этанол влияет как на транскрипцию, так и на трансляцию в клетке (Haft, et al. , 2014). Хотя это и является предположением, влияние этих специфических мутаций может серьезно ухудшить рост этих низкотолерантных линий при более высоком процентном содержании этанола, предотвращая возникновение мутаторных мутаций или других и, таким образом, дальнейшее эволюционное улучшение. Мы включили это в раздел «Обсуждение»:

    «[…] Несмотря на то, что мы в основном сосредоточились на увеличении частоты мутаций в этом исследовании, 12 медленно мутирующих линий с низкой толерантностью к этанолу могут быть интересной отправной точкой для дальнейших исследований.Отсутствие гипермутации в этих линиях, по-видимому, препятствует дальнейшей адаптации к высоким концентрациям этанола. Анализ последовательности двух из этих линий выявил наличие мутаций в rpoZ (субъединица РНК-полимеразы) и infB (фактор инициации белковой цепи) в линиях E4 и E17 соответственно. Поскольку этанол токсичен из-за своего воздействия на транскрипцию и трансляцию (Haft, et al. , 2014), нарушение транскрипционного или трансляционного аппарата из-за этих мутаций может вызвать повышенную чувствительность к более высоким уровням этанола.Это предотвратит дальнейший рост и возможность приобретения мутаторного аллеля или любой другой мутации. Хотя у нас нет доказательств того, что мутации rpoZ и infB являются причиной снижения частоты мутаций, эти мутации интересны и могут объяснить отсутствие дальнейшего улучшения адаптации в линиях E4 и E17 (Рисунок 3A). […] ”

    Необходимо описать метод количественной оценки толерантности к этанолу. Рисунок 5B: Единицы? На самом деле я не уверен в сути рисунка 5B, учитывая, что высокая толерантность к этанолу может быть достигнута с низкой частотой мутаций на более поздних стадиях эволюции.

    Толерантность популяции к этанолу измерялась как способность расти в жидкой среде в присутствии определенного процента этанола. Когда популяция росла и достигла оптической плотности 0,2 или более в присутствии определенного процента этанола, она считалась толерантной к этому проценту. Чтобы гарантировать правильное процентное содержание этанола в среде, мы использовали систему анализа пива Alcolyser (Anton Paar GmbH, Австрия). Теперь мы уточнили количественную оценку толерантности к этанолу и измерение концентрации этанола в разделе «Материалы и методы».

    «[…] Для обеспечения правильного процентного содержания этанола, добавляемого в среду, мы использовали систему анализа пива Alcolyser (Anton Paar GmbH, Австрия). […]»

    «[…] Устойчивость популяции к этанолу измерялась как способность расти в жидкой среде в присутствии определенного процента этанола до оптической плотности не менее 0,2. […]»

    Мы также добавили единицы измерения на рис. 5B.

    Данные, представленные на рисунке 5B, доказывают, что динамика скорости мутаций лежит в основе эволюции толерантности к этанолу.Нет корреляции между абсолютной частотой мутаций в каждой точке и абсолютной толерантностью к этанолу в каждой точке. Вместо этого этот рисунок показывает, что увеличение частоты мутаций между двумя последовательными точками в значительной степени коррелирует с увеличением толерантности к этанолу между этими двумя временными точками, указывая на то, что мутация-мутатор (которая вызывает увеличение скорости мутаций) автостопом с полезной мутацией (которая вызывает повышенная толерантность к этанолу) и что эти полезные мутации имеют более высокую вероятность возникновения на фоне мутатора.Более того, снижение частоты мутаций (отрицательная Δ частота мутаций) коррелирует с периодами постоянного давления этанола (Δ толерантность к этанолу равна нулю), показывая, что частота мутаций снова уменьшается, когда популяция способна расти в присутствии определенного процента этанола. Эта корреляционная информация отсутствует на рисунке 5A, что показывает актуальность дополнительной панели.

    Я не считаю повышенный уровень смертности, связанный с мутаторами, особенно интересным, если бы авторы не объяснили мне фундаментальную разницу между более медленным рождением, повышенной смертностью или их комбинацией.В конце концов, можно рассматривать рождение и смерть как «чистый рост».

    Мы согласны с тем, что рост популяции зависит как от рождения, так и от смерти клеток в популяции. Поэтому мы добавили несколько строк в раздел «Результаты», чтобы уточнить, что наши наблюдения связаны с увеличением смертности, а не с более медленным рождением.

    «[…] Удивительно, но все протестированные промежуточные точки показали очень быстрое уменьшение количества жизнеспособных клеток при переходе в стационарную фазу (Рисунок 6 — рисунок в приложении 1).Это уменьшение количества жизнеспособных клеток объясняется действительно повышенной смертностью в популяции, поскольку клетки находятся в стационарной фазе. […] »

    Кроме того, высевая растущие популяции в разные моменты времени, мы смогли наблюдать уменьшение жизнеспособных клеток (то есть отрицательный чистый рост), начиная с ранней стационарной фазы. Поскольку рождение клеток уже отсутствует или низкое в стационарной фазе, уменьшение количества жизнеспособных клеток объясняется повышенной гибелью клеток. Более того, мы смогли подтвердить повышенную смертность из-за окрашивания мертвых животных (Рисунок 6; Рисунок 6 — приложение к рисунку 1; Рисунок 6 — приложение к рисунку 2).

    Я не понимаю суть таблицы 1. Почему бы не пересчитать предполагаемое количество мутаций на основе динамики скорости мутаций и посмотреть, соответствует ли оно наблюдаемому количеству мутаций?

    Таблица 1 должна была показать несоответствие между ожидаемым количеством мутаций, основанным на частоте мутаций конечной точки, и фактическим количеством фиксированных мутаций, эффективно наблюдаемых в геномной последовательности конечных точек. Интересное предложение пересчитать количество мутаций на основе динамики скорости мутаций.Мы попытались рассчитать площадь под кривой (AUC) на рисунке 5A, чтобы получить приблизительное количество мутаций за период времени, принимая во внимание колебания скорости мутаций в каждый момент времени. Однако этот расчет слишком упрощен. Скорость геномных мутаций, измеренная с помощью анализов флуктуаций, не подходит для расчета оценок, которые будут сравниваться с истинным числом фиксированных мутаций. Скорость геномных мутаций отражает только количество мутаций, встречающихся в популяции, но не дает оценки количества мутаций, которые в конечном итоге закрепятся в популяции.Создание надлежащего приближения ожидаемого количества мутаций потребует оценки частоты полезных мутаций и вероятности фиксации мутации в данной среде. Было бы чрезвычайно сложно сделать это в нашей конкретной установке, поскольку мы, например, не использовали постоянную среду, а вместо этого постоянно увеличивали процентное содержание этанола. Кроме того, расчеты необходимых параметров для получения достоверной оценки будут различаться для каждого момента времени, что делает его чрезвычайно сложным.Поэтому мы решили удалить столбец с предполагаемым количеством мутаций и заменить таблицу дополнительным показателем, показывающим как общее количество вариантов в популяции, так и количество фиксированных мутаций (Рисунок 2 — Рисунок 2). Этот дополнительный рисунок хорошо показывает, что мутационный профиль популяций мутаторов сложен с несколькими низкочастотными мутациями, которые принадлежат разным субпопуляциям, возможно, с более высокой или более низкой частотой мутаций, чем средняя частота мутаций в популяции.

    Было бы интересно узнать, какие мутации напрямую способствуют толерантности к этанолу (если у вас уже есть данные).

    Идентификация мутаций, которые напрямую способствуют толерантности к этанолу, является чрезвычайно сложной задачей в нашем наборе данных, учитывая вероятное большое количество мутаций-пассажиров среди нескольких мутаций драйвера. Однако в настоящее время мы разрабатываем метод анализа таких очень сложных наборов данных о мутациях, часто возникающих в результате эволюции гипермутаторов. Глядя на параллелизм между эволюционировавшими линиями, мы уже смогли идентифицировать путь биосинтеза жирных кислот, кодируемый генами fab, как главную мишень в начальной адаптации к высокому этанольному стрессу.Идентификация этого пути служит истинным положительным моментом для нашего анализа, поскольку изменение состава жирных кислот мембраны ранее сообщалось как основной механизм, способствующий толерантности к этанолу (Dombek and Ingram, 1984; Luo, et al. , 2009). .

    Рецензент № 2:

    В своей рукописи, озаглавленной «Адаптивная настройка скорости мутаций позволяет быстро реагировать на летальный стресс у E. coli», Toon Swings и сотрудники изучают эволюцию скорости мутаций при адаптации к этанолу.Они показывают, что на ранних стадиях адаптации быстро выбирается повышенная частота мутаций, и, что более удивительно, они обнаруживают быстрое снижение частоты мутаций, которое, по-видимому, напрямую связано с некоторым увеличением смертности. Данные надежные, количественные и очень интересные, особенно связь между смертностью и уровнем мутаций. Мои комментарии в основном касаются некоторых интерпретаций результатов и некоторых экспериментальных деталей

    Во Введении не совсем ясно, является ли 5% этанол настоящим смертельным стрессом: мутации необходимы, чтобы выжить в первом цикле роста.Судя по времени задержки, кажется, что это так. Если это так, то в статье будет полезно сослаться на область экспериментов по спасению. Это модные эксперименты, изучающие адаптацию в условиях, в которых она необходима для выживания. Параграф (или даже заголовок) о связи между экспериментом и этим полем увеличит читательскую аудиторию статьи.

    Мы согласны с рецензентом и включили концепцию эволюционного спасения и связь с гипермутацией в разделы «Введение» и «Обсуждение».

    «[…] Это особенно очевидно в суровых условиях, где почти смертельный стресс требует быстрой адаптации по крайней мере некоторых особей, чтобы избежать полного исчезновения популяции (Bell and Gonzalez, 2011). Достаточно быстрая адаптация, позволяющая спасти популяцию от вымирания, ведет к так называемому эволюционному спасению. Это явление широко изучается в свете изменения климата и адаптации сокращающихся популяций к новым, меняющимся условиям окружающей среды (Lindsey, et al. , 2013).Это происходит, когда популяция, находящаяся в состоянии стресса, не обладает достаточной фенотипической пластичностью и может избежать вымирания только благодаря генетическим изменениям (Gonzalez, et al. , 2013). Эволюционное спасение зависит от различных факторов, таких как размер популяции, размер генома, частота мутаций, степень изменения окружающей среды и история стресса (Gonzalez, et al. , 2013; Gonzalez and Bell, 2012). Увеличивая количество мутаций, гипермутации также могут иметь решающее значение для эволюционного спасения популяций, находящихся в условиях смертельного стресса.[…] »

    «[…] Несмотря на бремя дополнительных, возможно, летальных мутаций, увеличение количества мутаций обеспечивает быструю адаптацию по крайней мере некоторых особей и спасает популяцию от вымирания (Bell and Gonzalez, 2011; Lindsey et al. , 2013; Gonzalez и др. , 2013; Гонсалес и Белл, 2013). […] ”

    Эволюционное спасение — действительно интересный феномен, который очень важен для адаптации к летальному стрессу. 5% этанол почти полностью подавляет рост дикого типа и резко снижает несущую способность (рисунок 1 — приложение к рисунку 2).Различное время задержки, наблюдаемое как у мутантов дикого типа, так и у мутантных мутантов, действительно предполагает, что мутации необходимы для обеспечения роста в присутствии 5% этанола, что, следовательно, может означать, что это настоящий летальный стресс. Однако, чтобы подтвердить это утверждение, нам нужно будет секвенировать штамм после выращивания на 5% этаноле, чтобы увидеть, действительно ли мы можем идентифицировать адаптивные мутации, которые способствовали росту и спасли популяцию от вымирания.

    Следует отметить, что предыдущие исследования показали, что повышение толерантности к этанолу является сложным процессом, включает взаимодействие между множеством генов и путей и требует множественных мутаций (Goodarzi, et al., 2010; Николау, и др. , 2012; Voordeckers, et al. , 2015). Необходимость множественных мутаций для достижения более высокой толерантности к этанолу в сочетании с серьезным нарушением роста при 5% этаноле резко ограничивает возможность приобретения адаптивных мутаций. Таким образом, мы считаем, что увеличение частоты мутаций — единственная возможность сгенерировать достаточное количество генетических вариаций во времени, чтобы обеспечить адаптацию и избежать исчезновения. Хотя эволюционное спасение во многом зависит от частоты мутаций (Gonzalez, et al., 2013; Gonzalez and Bell, 2012), возникновение гипермутации в связи с эволюционным спасением подробно не обсуждалось. Возможно, потому что для эволюционного спасения с помощью гипермутации требуются два мутационных события: возникновение мутации-мутатора и возникновение адаптивной мутации, спасающей популяцию. Возникновение гипермутации во всех наших линиях с высокой толерантностью к этанолу и повторяющиеся увеличения и уменьшения частоты мутаций, которые соответствуют изменениям давления этанола во время эволюции, демонстрируют, что гипермутация имеет решающее значение для быстрой адаптации по крайней мере некоторых особей и спасения популяции от вымирания в условиях стрессовые состояния, близкие к летальному исходу.

    В документе четко показан новый фактор, который может объяснить изменения в частоте мутаций: смертность. Однако вся интерпретация явления все еще связана с идеей отбора и нагрузки второго порядка. Это действительно соответствует первым теоретическим данным о мутаторах и отборе второго порядка, в котором не учитывались все возможные прямые эффекты. В более поздних работах больше внимания уделяется потенциальным прямым эффектам, и я думаю, что обсуждение должно представить некоторые из этих идей и, в конечном итоге, оспорить их.Некоторые результаты здесь предполагают, что в конечном итоге некоторое прямое влияние мутаторов может сказаться не на раннем отборе мутаторов, а в конечном итоге на их стоимости.

    Сначала на рисунке 4 даже при очень низких частотах отбираются мутаторные аллели. Это довольно удивительно, поскольку в какой-то момент субпопуляция мутаторов должна быть слишком низкой, чтобы генерировать какие-либо полезные мутации. Действительно, если мы предположим 1000-кратный эффект на переходы, мутатор должен уступить место дикому типу в соотношении 1/10000 или около того.Итак, рисунок 4 предполагает прямой эффект. Также в тексте упоминается тот факт, что в mutS были обнаружены только точечные мутации и отсутствие инактивации, также является аргументом в пользу более сложного эффекта, чем просто увеличение скорости мутаций. (инактивация должна иметь гораздо больше шансов произойти (хотя некоторые делеции могут не быть обнаружены на уровне популяции с использованием используемого конвейера), и, поскольку они имеют впечатляющее преимущество в конкуренции, они должны немедленно вторгнуться…

    Даже в очень хороших экспериментах, связывающих смертность и частоту мутаций, 10-кратное снижение частоты мутаций от IM2 к IM3 приводит к двукратному или меньшему снижению смертности мертвых клеток.Так что скорость мутации — не единственный игрок. Накопление мутации могло привести к незначительным различиям между IM2 и IM3, но на рисунке 7 автор обнаружил, что трехкратное изменение частоты мутаций на этот раз оказывает сильное влияние на выживаемость (более чем в 10 раз). совершенно разные.

    Может быть чрезвычайно сложно следовать механистическим эффектам, но обсуждение того, что в игре могут иметь место как первичный отбор, так и отбор второго порядка, принесет пользу статье.

    Было показано, что MMR полезен, потому что они позволяют быстрое переключение экспрессии жгутиков, хотя и повышенная рекомбинация, оказались токсичными, когда в клетке присутствует слишком много несовпадений, так что они приводят к двухцепочечному разрыву … и несколько других недавних в работах было высказано предположение, что эволюция скорости мутации также может быть связана с прямым эффектом. Это никоим образом не снижает ценности проведенных экспериментов, но стоит упомянуть в обсуждении.

    Мы благодарим рецензента за такую ​​интерпретацию данных и за его очень интересное предложение о роли возможных прямых эффектов MMR на селекцию гипермутации при высоком этанольном стрессе. Мы включили в рукопись подробное обсуждение возможных эффектов директ.

    «[…] Эти данные указывают на то, что преимущество гипермутации при этанольном стрессе можно отнести, главным образом, к отбору второго порядка, вслед за благоприятными эффектами новых мутаций по сравнению с возможными прямыми эффектами самой мутации-мутатора.[…] »

    «[…] Однако следующие элементы в наших результатах могут также указывать на потенциальные прямые эффекты мутаторных мутаций. Во-первых, в генах репарации ошибочного спаривания были идентифицированы в основном точечные мутации (рисунок 2 — рисунок в приложении 3), хотя инактивация гена более вероятна, учитывая высокое конкурентное преимущество штамма Δ mutS по сравнению со штаммом mutS Штамм G100A в присутствии 5% этанола (Рисунок 4 — приложение 1 к рисунку). Это дало бы предположить выбор конкретных изменений в механизме пути репарации ошибочного спаривания.Во-вторых, штаммы Δ mutS и mutS G100A по-прежнему увеличивают частоту при конкуренции с диким типом в соотношении 1: 1000 или ниже (рис. 4). Учитывая 10-50-кратное увеличение частоты мутаций, субпопуляция мутаторов с соотношением 1: 1000 или ниже должна быть слишком маленькой, чтобы иметь повышенный шанс приобретения полезной мутации по сравнению с субпопуляцией дикого типа. Эти данные свидетельствуют о прямом положительном влиянии мутаций MMR (Cooper, et al., 2012; Торрес-Барсело, и др. , 2013; Nowosielska and Marinus, 2007), которые в сочетании с отбором второго порядка могут объяснить наши наблюдения. Кроме того, мы подтвердили, что любое увеличение частоты мутаций, независимо от нарушенной клеточной системы, может дать селективный эффект. Следовательно, эти прямые эффекты, которые обычно являются результатом сбоев в одной конкретной системе или даже в одном гене, могут не напрямую влиять на ранний отбор гипермутации, но могут быть очевидны по стоимости на более поздних стадиях.[…] »

    «[…] Некоторые прямые эффекты уже накопленных мутаций могут объяснить несоответствие между 2-кратной разницей в смертности между IM2 и IM3 с 10-кратной разницей в частоте мутаций (Рисунок 6) и более чем 10-кратной разницей в смертность между END и END Δ mutS только с 2,5-кратной разницей в частоте мутаций (фиг. 7). […] »

    Следует отметить, что в отношении потенциального роста мутаторов, эксперименты с подмножеством мутаторов, участвующих в различных механизмах, несомненно, являются доказательством того, что выбрана повышенная частота мутаций.Тогда тот факт, что обнаружены только клоны MMR, а нокаут не обнаружен, предполагает, что в конечном итоге происходит выбор более умеренных эффектов или некоторых конкретных механизмов.

    Помимо возможных прямых эффектов, описанных выше, которые могут привести к прямому отбору в основном мутаторов MMR, точечные мутации в генах MMR также могут быть выбраны, потому что они лишь умеренно увеличивают скорость мутаций по сравнению со скоростью мутаций, вызванных полным нокаутом. out (рисунок 4). Это позволяет предположить, что умеренно повышенная частота мутаций более полезна, поскольку они имеют более низкую стоимость на более поздних стадиях по сравнению с вариантами с более высокой частотой мутаций.Чтобы уточнить этот момент, мы добавили параграф по этому поводу в наш раздел «Обсуждение»:

    «[…] Оба этих наблюдения подтверждают идею о том, что умеренные мутаторы будет легче отбирать, потому что их польза выше, чем у вариантов с низкой частотой мутаций, а их долгосрочная стоимость ниже, чем у вариантов с высокой частотой мутаций. Идентификация в основном точечных мутаций, приводящих к аминокислотным изменениям, а не к бессмысленным мутациям в генах MMR во время эволюции, аналогичным образом предполагает отбор на умеренное увеличение скорости мутаций (например, показано для мутанта mutS G100A ).[…] »

    Рецензент № 3:

    […]

    У нас есть три основных комментария:

    Существенная информация отсутствует в нескольких местах, что мешает как базовому пониманию динамики популяции во время эксперимента, так и сравнению текущих результатов с результатами предыдущей работы по эволюции частоты мутаций. Во-первых, не дается никакой информации об эффективном размере популяции развивающихся популяций: какие объемы культур, какие разведения, какие конечные плотности клеток были получены и каков был эффективный размер популяции (~ размер посевного материала x количество поколений за цикл роста)?

    Мы включили в рукопись всю запрошенную информацию.

    «[…] Объем культуры во время эксперимента по эволюции составлял 50 мл, а разведение было 100-кратным при каждом переносе […]».

    «[…] Минимальная оптическая плотность 0,2 соответствует минимальной конечной плотности клеток 5,4х10 8 КОЕ / мл в объеме 50 мл. Соответственно, для каждого пассажа мы переносили 500 мкл или не менее 2,73х10 8 КОЕ. Среднее количество поколений для каждого цикла роста, рассчитанное на основе оптической плотности, достигнутой при переносе, составляет 6,67.Это значение соответствует теоретическому значению, полученному из log 2 (коэффициент разбавления (100)) = 6,67. Взяв эти значения вместе, мы можем рассчитать предполагаемый эффективный размер популяции: 1,82×10 9 КОЕ. […] »

    Во-вторых, как было подсчитано количество поколений, учитывая высокую смертность клеток? Были также получены мертвые клетки, и их следует принимать во внимание при оценке общего числа поколений.

    Число поколений было рассчитано на основе оптической плотности, измеренной в каждый промежуточный момент времени.Сначала мы рассчитали соответствующее количество КОЕ / мл для измеренной оптической плотности, используя уравнение, полученное из стандартной кривой OD 595 -КОЕ / мл. Используя это значение КОЕ / мл, мы рассчитали общее количество КОЕ, присутствующих в объеме культуры 50 мл. Поскольку мы разбавляли 100x при каждом переносе, мы могли использовать общее количество КОЕ с предыдущей временной точки для расчета размера инокулята. Наконец, увеличение количества КОЕ рассчитывали путем деления окончательного количества КОЕ на засеянное количество КОЕ.База логарифма 2 этого значения дает количество поколений (см. Подраздел «Экспериментальная эволюция и уравнение 3, Материалы и методы»).

    Хотя это значение является хорошим приближением количества поколений, поскольку измерения OD также регистрируют мертвые клетки, мы знаем, что это вычисленное значение не учитывает конкретно образование мертвых клеток. Поэтому мы добавили к рукописи параграф, объясняющий, как мы оценивали количество поколений, упоминая при этом проблему неизвестной смертности населения.

    «[…] Количество жизнеспособных клеток оценивали с использованием значений оптической плотности (A 595 нм ). Этот расчет специально не учитывает уровень смертности клеток. Однако, поскольку оптическая плотность отражает как живые, так и погибшие клетки в культуре, расчет количества поколений с использованием значений OD является более точным по сравнению с расчетами, основанными на подсчете КОЕ. Действительно, при использовании данных подсчета жизнеспособных клеток IM1, IM2 и IM3 (рисунок 5) мы обнаружили 1,27-кратное (± 0.29) занижение количества поколений при использовании количества жизнеспособных клеток по сравнению с использованием значений OD. […] »

    Рисунок 6 — приложение к рисунку 1B показывает, что OD уменьшается только в поздней стационарной фазе, когда большая часть популяции уже мертва. Учитывая тот факт, что мы переносили культуры во время эксперимента по эволюции в экспоненциальной фазе при OD не менее 0,2, эта плотность, вероятно, отражает все клетки, как живые, так и погибшие в культуре. Следовательно, поколения, рассчитанные на основе этих значений плотности, будут точно соответствовать истинному количеству поколений.Тем не менее, чтобы рассчитать точное количество поколений, нам нужно будет измерить уровень смертности для каждой временной точки отдельно и дополнить модель роста компонентом уровня смертности. Учитывая детальный характер таких экспериментов, это было бы практически невозможно в разумные сроки.

    В-третьих, и это, возможно, наиболее важно, было неясно, проводились ли тесты флуктуации и анализ последовательности генома на индивидуальных клонах или смешанных популяционных образцах. В результате мы не знаем, как интерпретировать рисунок 5 и таблицу 1: отражают ли показатели мутаций на рисунке 5 скорость мутаций фиксированных генотипов или это сочетание скорости мутаций мутаторов и мутаций дикого типа в полиморфной популяции? Сходны по частоте наблюдаемых мутаций в таблице 1: основаны ли они на последовательностях случайных клонов, выбранных из этих популяций, или на ДНК смешанных популяций? Различия в скорости мутаций, показанные на рисунке 5A, предполагают, что они отражают скорость популяционных мутаций, поскольку изменения слишком малы, чтобы отражать чисто генотипические эффекты, если они включают мутантные мутанты, такие как mutS (см. Рисунок 4).Это различие имеет решающее значение для возможных механизмов, которые следует учитывать для объяснения динамики скорости мутаций: если в популяции фиксируются генотипы с высокой частотой мутаций, то наблюдаемые позже генотипы с низкой частотой мутаций должны происходить от прежних генотипов, тогда как если они * не * фиксированный, позже наблюдаемые генотипы с низкой частотой мутаций могут происходить от предковых генотипов, которые все еще присутствовали в популяции, когда измерялось увеличение частоты мутаций.

    Все анализы флуктуаций проводились на смешанных выборках населения.Следовательно, одним из возможных способов объяснения быстрого снижения частоты мутаций является сдвиг в структуре популяции, когда субпопуляция с еще присутствующей частотой мутаций дикого типа снова фиксируется в популяции. Однако анализ секвенирования в смешанных пулах с использованием низкочастотного вызывающего варианта (CLC Genomics Workbench) показал, что все обнаруженные мутации мутатора восстановления несоответствия (показаны на рисунке 2 — рисунок в приложении 2) стали на 100% фиксированными в популяции и оставались фиксированными даже после уменьшения в скорости мутации не наблюдалось.Следовательно, генотипы с низкой частотой мутаций должны были возникнуть из генотипов с высокой частотой мутаций. Следовательно, отбор генотипов с низкой частотой мутаций должен приводить к быстрому снижению частоты мутаций, наблюдаемому в периоды, когда концентрации этанола оставались постоянными. Скорость фиксации мутанта с более низкой частотой мутаций и более низкой смертностью может быть увеличена за счет более низкой продукции мертвых клеток и, следовательно, более быстрого увеличения доли в популяции по сравнению с популяцией с высокой частотой мутаций и высокой смертностью.

    Кроме того, мы оба секвенировали смешанный пул и один выбранный клон из каждого пула. Таблица 1 теперь заменена рис. 2 — дополнением к рисунку 2, на котором представлены мутации, обнаруженные в образце смешанного пула. Показано как общее количество вариантов (частота> 10%) в каждом пуле, так и количество «фиксированных» (частота> 75%) мутаций. Теперь мы специально добавили в рукопись упоминание о частоте популяционных мутаций, чтобы прояснить происхождение данных о частоте мутаций. Кроме того, мы добавили параграф, объясняющий важность интерпретации данных.

    «[…] Следовательно, частота мутаций в популяции будет отражать среднюю скорость геномных мутаций для всей популяции, содержащей различные субпопуляции, которые, возможно, демонстрируют частоту мутаций выше или ниже среднего. Это может объяснить несоответствие между 20-кратным увеличением частоты мутаций конечной точки линии E1 (рис. 3A) и 10-кратным увеличением частоты клональных мутаций, вызванных мутацией mutS G100A , идентифицированной в той же линии (рис. 4A). Более того, эти данные предполагают, что частота мутаций может изменяться вместе со структурой популяции на протяжении эволюции, а не быть фиксированной скоростью после возникновения и распространения одной мутации-мутатора.[…] »

    Наш второй комментарий касается удивительно быстрого отбора генотипов с более низкой частотой мутаций в несколько раз в течение эволюции (рис. 5). Как показано выше, чтобы понять, вызвал ли естественный отбор эти изменения (и если предположить, что они отражают скорость мутаций популяции, а не отдельных клонов!), Необходимы две части информации. Во-первых, последствия этих изменений для приспособленности должны быть количественно определены в экспериментах по прямой конкуренции между генотипами с высокой и низкой частотой мутаций в условиях, преобладающих в ходе эволюции.Теперь сравнивается только производство мертвых клеток (рис. 6), но не предпринимается попыток перевести оценки смертности в значения приспособленности ни эмпирически (путем проведения этих соревнований), ни теоретически (с использованием моделей роста для прогнозирования этих эффектов). Снижение частоты мутаций в течение 150 поколений продолжающейся эволюции популяции E9 (рис. 7) и его корреляция с более низкой продукцией мертвых клеток наводят на размышления, но не решают загадки, как показатели смертности трансформируются в приспособленность в условиях отбора.Во-вторых, оценки пригодности генотипов с высокой и низкой частотой мутаций следует затем использовать для прогнозирования динамики снижения частоты мутаций, чтобы увидеть, действительно ли этот механизм может объяснить динамику, показанную на рисунке 5.

    В процессе эволюции мы постоянно увеличивали процентное содержание этанола. Поскольку IM2 и IM3 могли расти при одинаковом процентном содержании этанола (7,5%), было бы разумно сравнивать эти промежуточные временные точки друг с другом, чтобы определить значения приспособленности, связанные со смертностью.Однако разница в количестве поколений между IM2 и IM3 превышает 70, и вполне вероятно, что за это время накопились другие адаптивные мутации, антимутаторные мутации и дополнительная генетическая нагрузка. По этой причине мы считаем крайне маловероятным, что мы можем напрямую связать значение пригодности в результате конкуренции между IM2 и IM3 со смертностью. Поэтому, чтобы ответить на этот комментарий, мы решили рассчитать теоретические последствия для фитнеса, а не проводить прямые соревнования.

    Точный прогноз влияния смертности на приспособленность потребует создания новой модели роста, включающей параметр для учета влияния уровня смертности. Это потребует проведения новых экспериментов для сбора достаточного количества данных для построения и обоснования новой модели и, возможно, даже нового сотрудничества с более теоретически ориентированной лабораторией. Поэтому здесь мы использовали доступные данные и существующие модели роста для моделирования упрощенного соревновательного эксперимента и расчета значения пригодности и количества раундов отбора, необходимых для исправления генотипа с более низкой частотой мутаций в популяции.

    Во-первых, мы определили различные параметры роста, такие как скорость роста (GR) и пропускная способность (y0). С этой целью мы использовали время для роста в присутствии 7,5% EtOH и окончательные измерения плотности клеток, полученные в ходе нашего эволюционного эксперимента. Это приводит к следующим параметрам как для IM2, так и для IM3 (таблицы данных доступны по запросу).

    IM2 IM3
    SGR (h -1 ) 0.0973 0,392
    Y 0 0,005 0,00363
    Y M 0,292 0,392 909

    Затем мы использовали эти значения для проведения теоретического эксперимента по конкуренции между IM2 и IM3. Поэтому мы использовали модель роста Гомпертца (показанную ниже) для расчета теоретического количества КОЕ / мл для обоих штаммов после 24-часового цикла роста (y (24)).Здесь мы сделали два предположения. Во-первых, мы не смогли получить значение времени запаздывания (LT) из данных нашего эволюционного эксперимента. Поэтому мы разумно предположили, что время задержки для IM2 и IM3 одинаковое, что также подтверждается кривыми роста, построенными для определения уровня смертности (Рисунок 6 — приложение к рисунку 1). Во-вторых, мы предположили, что индивидуальная динамика роста каждого штамма равна их соответствующей динамике роста в условиях прямой конкуренции друг с другом.

    y (x) = y0 + yM ∗ e [−e ((2.718 ∗ SGRyM) ∗ (LT − x) +1)]

    IM2 IM3
    КОЕ / мл (o) 3,95E + 06 3,9U5E + 06
    мл 24 ) 1.73E + 08 6.23E + 08

    Затем мы использовали эти значения КОЕ / мл для расчета относительной пригодности IM3 (низкая частота мутаций) по сравнению с IM2 (высокая частота мутаций), используя дискретное уравнение повторяемости во времени, которое описывает распространение мутанта в гаплоидной популяции ( Изображение ответа автора 1).Для A start и A end мы использовали пропорции IM2 и IM3 в популяции, определяемые количеством КОЕ / мл для обоих штаммов через 24 часа, как рассчитано на предыдущем этапе. Этот расчет привел к среднему относительному улучшению приспособляемости 3,61 для штамма IM3 с низкой частотой мутаций по сравнению со штаммом IM2 с высокой частотой мутаций.

    Наконец, мы использовали эту относительную пригодность для оценки количества раундов отбора, необходимых для фиксации IM2 в популяции генотипов IM3.Эффективный размер популяции в нашем эволюционном эксперименте составлял порядка 10 9 КОЕ. Если мы предположим, что мутант, встречающийся в популяции, присутствует в соотношении 1 к 10 9 , то мы можем рассчитать количество раундов отбора, необходимых для увеличения частоты до 99% популяции, при условии, что эта мутация не потеряна. из-за случайного дрейфа. Поэтому мы решили уравнение относительной пригодности для n, как показано на изображении ответа автора 1, используя как относительную приспособленность (3.61), начальное (10 -9 ) и конечное (0,99) соотношения конкурирующего штамма.

    Используя эту формулу, мы вычислили n, необходимое IM3 для фиксации в популяции IM2. Это привело к примерно 20 (19,74) раундам отбора, необходимым для фиксации IM3 в популяции с первоначально только генотипами IM2. Если предположить, что за один раунд отбора будет 6,67 поколения, то получится в среднем примерно 132 поколения. Следовательно, теоретическое время, необходимое для фиксации на основе вычисленных параметров приспособленности, превышает фактическое время 10 раундов отбора или 70 поколений, наблюдаемых между промежуточными точками IM2 и IM3.Мы добавили новый дополнительный график, чтобы показать сравнение между рассчитанным и наблюдаемым количеством раундов отбора, необходимых для IM3 для исправления (Рисунок 6 — приложение к рисунку 3 и подраздел «Клеточная смертность является основной движущей силой эволюции скорости мутаций»). Несоответствие между этими двумя значениями предполагает возможный прямой эффект дальнейших адаптивных мутаций или самих мутаторных мутаций, накопленных во время последовательных стадий роста между IM2 и IM3, как также предположил рецензент № 2.Эти два штамма различаются не только по смертности и частоте мутаций, но и по дальнейшему наращиванию генетической нагрузки и возможным мутациям, которые позволили дальнейшую адаптацию к стрессу 7,5% этанола. Следовательно, трудно связать теоретические расчеты пригодности напрямую с эффектом антимутаторов или только с смертностью, поскольку присутствуют другие факторы, которые могут повлиять на эти значения.

    Данные, представленные на Рисунке 7, Рисунке 7 — Дополнение к Рисунку 1 и Рисунок 7 — Дополнение к Рисунку 2, решают эту проблему в дальнейшем.Здесь мы непрерывно развивали образец гипермутатора из промежуточного момента времени, чтобы снизить частоту мутаций. Снижение частоты мутаций сопровождалось уменьшением образования мертвых клеток. Благодаря введению аллеля Δ mutS мы теперь получили как вариант с низкой скоростью мутаций (END), так и вариант с высокой скоростью мутаций (END Δ mutS ), которые отличались только своим аллелем mutS (и их скоростью мутаций). , но в остальном являются изогенными. Это позволило рассчитать те же параметры, что и для IM2 и IM3, но теперь результаты должны отражать только влияние изменений частоты мутаций и их последствий на образование мертвых клеток.Чтобы теоретически смоделировать наш конкурентный эксперимент, мы рассчитали количество раундов отбора, необходимое для штамма END Δ mutS , чтобы снизить частоту с 50% до менее 1%. В результате этого расчета среднее количество раундов отбора составило 2,5. Действительно, прямая конкуренция между END и END Δ mutS , начиная с соотношения 1: 1, демонстрирует, что после 2 раундов отбора частота штаммов END Δ mutS снизилась до менее 10% (Рисунок 7 — приложение к рисунку 1 ).Поскольку оба конкурирующих штамма различаются только скоростью мутаций и смертностью, эти данные подтверждают, что скорость мутаций и смертность являются решающими факторами, объясняющими быстрое увеличение генотипов с низкой частотой мутаций и смертностью, когда штамм уже адаптирован. Чтобы прояснить эту часть в рукописи, мы включили дополнительный график, показывающий, что нет существенной разницы между теоретическим расчетом раундов отбора на основе параметра приспособленности штаммов и наблюдаемым количеством раундов отбора, необходимых для фиксации END (низкая мутация скорости) в эксперименте с прямой конкуренцией (рис. 7 — дополнение к рисунку 2 и подраздел «Клеточная смертность является основной движущей силой эволюции скорости мутаций»).

    Наш третий комментарий относится к рисунку 1. Во-первых, почему небольшой посевной материал может приводить к гораздо более высоким урожаям, чем крупный посевной материал? Это удивительно, но остается необъяснимым. Во-вторых, следует лучше объяснить идентичность кривых роста. Что отражают серые линии, отдельные повторы или средние кривые для каждого штамма-мутатора? Количество линий указывает на первое, но текст относится к «кривой» роста dnaQ, предполагая, что они отражают средние кривые. Возможно, лучше всего показать кривые среднего роста или подогнанные модели роста для каждого штамма с разными цветами для каждого штамма.Как создаются разные популяции (разного размера)? Они происходят из одной и той же «партии», но в меньшей или в большей степени разбавлены? Или разведение 10 7 происходит из более поздней временной точки меньших разведений? Известно, что физиологическое состояние клеток (например, ранняя экспоненциальная фаза, более поздняя экспоненциальная фаза) в момент их инокулирования влияет на построенные впоследствии кривые роста. Или, возможно, более крупная популяция может «впитать» этанол и, таким образом, эффективно снизить его концентрацию в окружающей среде? (см. e.грамм. DOI: 10.1098 / RSBL.2012.0569)

    Все инокуляты происходили из одной партии: мутанты дикого типа и тестируемые мутанты выращивали в течение ночи и затем разбавляли для инициации роста, начиная с инокулята разного размера. Таким образом, мы можем исключить возможное влияние физиологического состояния клетки на динамику роста. Однако у нас есть две гипотезы о разнице в урожайности между высоким и низким исходным посевом.

    Во-первых, ось времени различается для двух размеров посевного материала.Мы отслеживали кривые роста, начиная с большого исходного размера посевного материала в течение 24 часов, по сравнению со 120 часами, когда начинали с небольшого исходного размера посевного материала. Вопрос в том, требует ли начальный рост на 5% этаноле адаптивные мутации. Мы предположили, что эффект адаптивных мутаций будет смягчен большим начальным размером популяции, о чем свидетельствуют результаты эксперимента и что означает, что большая часть популяции способна расти без адаптивных мутаций.Однако мы не секвенировали какие-либо штаммы после первого цикла роста на 5% этаноле, чтобы подтвердить, необходимы ли адаптивные мутации или нет. Кроме того, мы ожидаем большего количества поколений в случае небольшого исходного размера посевного материала (log 2 (коэффициент разбавления: 100000) = 16,61 поколения) по сравнению со случаем большого исходного размера посевного материала (log 2 (100) = 6,67 поколения). Следовательно, мутант, возникающий в случае небольшого исходного размера инокулята, будет иметь больше времени для проявления, что, возможно, приведет к наблюдаемому более высокому выходу.

    Во-вторых, рост популяции в условиях сильного стресса может быть облегчен путем замачивания этанола, как предлагает рецензент. Замачивание было описано для P. aeruginosa , которые продуцируют бактериоцин для устранения возможных конкурентов. Клетки-продуценты часто имеют рецепторы для транслокации и нейтрализации собственного бактериоцина, тем самым снижая общий эффект токсина (Inglis, et al. , 2012). Замачивание этанола может происходить и у больших групп населения, что снижает эффективную концентрацию.Поглощение этанолом и его разложение может происходить из-за мутаций в гене алкогольдегидрогеназы adhE и ранее было связано с более высокой толерантностью к этанолу (Goodarzi, et al. , 2010).

    Мы изменили текст, чтобы отразить удивительное наблюдение более высоких урожаев малых посевных культур по сравнению с более низкими урожаями крупных посевных культур.

    «[…] Удивительно, но большие начальные популяции приводят к более низкому урожаю по сравнению с небольшими начальными размерами популяции. Рост от небольшого посевного материала, вероятно, вызван адаптивными мутациями, в то время как эффект полезной мутации может быть смягчен, если начать с большого посевного материала.Более того, мы ожидаем, что мутант, встречающийся в случае небольшого начального размера инокулята, будет иметь больше времени для проявления (log 2 (коэффициент разведения ∶ 100000) = ± 16,61 поколения) по сравнению с мутантом, встречающимся в случае большой начальный размер популяции (log 2 (100) = ± 6,67 поколений), что, возможно, приведет к наблюдаемому более высокому урожаю […] ».

    Мы изменили заголовок рисунка, чтобы уточнить идентичность серых линий в исправленной рукописи. Серые линии представляют собой отдельные реплики мутаторных штаммов.

    «[…] Синяя линия и штриховка представляют собой сигмоидальную подгонку кривых роста дикого типа (n = 3, подгонка с использованием уравнения Гомперца с 95% CI (затенение), см. Уравнение 1 в разделе методов), а серые линии представляют кривую роста отдельных реплик для каждого мутантного мутанта. […] »

    Выбранная визуализация была вдохновлена ​​недавней статьей (Peters, et al. , 2016). Отображение всех реплик очень подробно подчеркивает сходство или разнообразие кривых роста для больших и малых посевных культур, соответственно.Мы попытались визуализировать средние кривые роста, как показано на изображении ответа автора 2, но эти графики не полностью отражают дисперсионный характер кривых роста, хотя все еще ясно, что mutS , mutL , uvrD , mutH , mutT и mutM мутанты растут намного быстрее, чем мутанты дикого типа, если исходить из небольшого исходного размера инокулята.

    [Примечание редакции: до принятия были запрошены дополнительные исправления, как описано ниже.]

    Рецензенты № 4 и 5:

    Это кабинет со сложной конструкцией и большим объемом работы. Авторы рассмотрели (или, по крайней мере, попытались) большинство проблем, возникших в последнем раунде исправлений. Однако, как новые рецензенты, у нас есть некоторые дополнительные моменты, которые требуют пояснений авторов. Работа может быть принята с удовлетворительными отзывами.

    1) «Более высокая частота мутаций связана с более высокой смертностью, вероятно, из-за длительного накопления генетической нагрузки и повышенной вероятности приобретения летальной мутации».Могло быть более прямое объяснение: Krasovec et al. (2014 Nature Communications) показали, что частота мутаций по результатам анализа флуктуаций обратно коррелирует с плотностью популяции из-за межклеточных взаимодействий. Для одной и той же экспериментальной линии эволюции в разные промежуточные моменты времени более высокая смертность может снизить плотность популяции при том же размере инокулята для анализа флуктуаций, что, в свою очередь, увеличивает скорость мутаций. Эту альтернативную интерпретацию необходимо рассмотреть в существующей экспериментальной системе.

    Это интересное предложение для объяснения наблюдаемых различий в частоте мутаций. Однако мы считаем, что это не совсем применимо к нашим результатам. У нас есть убедительные данные, показывающие, что мутации-мутаторы произошли до изменения смертности и вызвали увеличение частоты мутаций, а не наоборот (рис. 4). Мы не только смогли идентифицировать эти мутации (рисунок 2 — рисунок в приложении 3), но также показали, что повышенная частота мутаций, вызванная этими мутациями, необходима для обеспечения адаптации в условиях почти летального этанолового стресса.Это было продемонстрировано как с помощью сконструированного набора вариантов скорости мутации (Рисунок 1), так и в экспериментальном эволюционном эксперименте (Рисунки 2 и 3). Таким образом, мы считаем, что увеличение частоты мутаций было вызвано подлинными мутационными изменениями в генах репарации ДНК, а не следствием повышенной смертности и последующего снижения плотности населения.

    Кроме того, мы тщательно измерили плотность популяции при выполнении анализа флуктуаций. Это было сделано, чтобы избежать возможного влияния плотности популяции на частоту мутаций, что было элегантно продемонстрировано Krašovec et al. этюд. Мы уточнили это в разделе «Материалы и методы».

    «[…] Чтобы обеспечить правильное сравнение частоты мутаций, мы проверили, что плотности популяции во время посева на рифампицин существенно не различались. В противном случае испытание повторяли. Статистическая разница между плотностями населения измерялась с использованием однофакторного дисперсионного анализа с апостериорной поправкой Тьюки. Мы не обнаружили существенной разницы для какой-либо промежуточной точки по сравнению со средней плотностью и плотностью других временных точек.Таким образом, мы избегаем возможных эффектов плотности населения (Krašovec, et al. , 2014, Nat. Commun.). […] »

    Окончательные средние плотности для каждой временной точки E5 (Рисунок 5A) теперь приведены на панели A изображения ответа автора 3. Расчет коэффициента корреляции Пирсона между абсолютной плотностью популяции и соответствующей частотой мутаций для каждой временной точки (панель B изображения ответа автора 3) продемонстрировали, что плотность популяции не оказала существенного влияния на частоту мутаций в нашем исследовании.Это также показано пунктирной линией, представляющей линейную аппроксимацию по точкам данных, наклон которой незначительно отличается от нуля (P = 0,2318). Далее, в случае, если плотность популяции повлияла на частоту мутаций в нашем исследовании, увеличение плотности популяции должно коррелировать с уменьшением частоты мутаций. Однако коэффициент корреляции Пирсона между относительной разницей в плотности популяции между двумя последовательными временными точками и соответствующей разницей в частоте мутаций между этими двумя точками (панель C изображения ответа автора 3) не был значимым (P = 0.511). В заключение, тщательно выполняя тесты флуктуации, когда плотности популяций штаммов существенно не различались, мы четко исключаем возможное влияние плотности клеток на частоту мутаций

    .

    2) Хотя авторы интерпретируют данные как доказательства, подтверждающие идею о том, что клетки развивают гипермутации, чтобы избежать вымирания при почти летальном стрессе, мы также должны рассмотреть более прямую альтернативу.

    В популяции постоянно генерируются мутанты с различной частотой мутаций.Когда окружающая среда становится стрессовой, распределение эффектов приспособляемости от мутаций соответственно становится шире и менее предвзятым к вредным мутациям из-за снижения приспособленности в среднем по популяции (например, Hietpas et al., 2013). В результате нагрузка мутаций гипермутаций по сравнению с WT становится меньше, и гипермутаторы с большей вероятностью выживут или даже преуспеют (если их совершить автостопом с полезными мутациями). Аргумент может быть изменен, когда организмы станут более приспособленными к новой среде, чтобы объяснить снижение количества гипермутаторов.Таким образом, динамический образец частоты мутаций можно понимать как пассивный баланс между притоком (в результате случайных мутаций) и выходом (из-за накопленной генетической нагрузки) мутаторов, не вызывая какой-либо активной реакции. Было бы полезно, если бы авторы могли прояснить, соответствуют ли их данные их утверждениям и почему они лучше, чем приведенная выше альтернативная интерпретация.

    Мы благодарим рецензентов за указание на эту альтернативную интерпретацию данных. Однако мы считаем, что эта интерпретация, по крайней мере, частично перекликается с нашей текущей интерпретацией данных.

    Наши результаты подтверждают идею о том, что только клетки с повышенной частотой мутаций могут генерировать достаточное генетическое разнообразие за короткий период времени, чтобы избежать вымирания и обеспечить адаптацию в условиях почти летального стресса этанолом (потенциально чему способствует более широкое и менее опасное распределение, обусловленное мутациями. фитнес-эффектов). Однако мы не утверждаем, что возникновение гипермутации само по себе является активным процессом. Таким образом, наша интерпретация во многом соответствует интерпретации, предложенной рецензентами.Действительно, в популяции постоянно появляются мутанты с вариациями скорости мутаций. Более того, в изменяющейся окружающей среде возникновение гипермутируемых вариантов может быть облегчено, поскольку больше мутаций являются полезными из-за снижения средней приспособленности популяции (Hietpas, et al., 2013, Evolution). Как предполагают составители обзора, это может означать, что в условиях такого близкого к летальному исходу генетическая нагрузка гипермутируемых вариантов менее подвержена влиянию вредных мутаций, что, возможно, способствует появлению мутаторов.Более того, мы считаем, что эти мутаторы имеют решающее значение для адаптации и предотвращения исчезновения. Поскольку мы наблюдали гипермутацию во всех эволюционировавших линиях с высокой толерантностью к этанолу, но не в линиях с низкой толерантностью к этанолу. У нас есть убедительные данные, подтверждающие идею о том, что только клетки с более высокой частотой мутаций могут быстро приобретать адаптивные мутации, чтобы избежать исчезновения. Кроме того, наши результаты также подтверждают, что уровень смертности и уровень мутаций в популяции взаимосвязаны. Эти данные предполагают, что более высокая смертность становится ценой гипермутации, когда популяция уже адаптирована (потенциально в результате распределения эффектов приспособленности, которые снова стали более узкими и смещенными в сторону вредных мутаций).Следовательно, мутанты с более низкой частотой мутаций и более низкой смертностью будут иметь большее преимущество и захватят популяцию, тем самым снизив общую скорость мутаций. В заключение мы констатируем, что наша интерпретация во многом перекликается с той, что была предложена рецензентами. Чтобы прояснить это в рукописи, мы соответствующим образом скорректировали текст.

    «[…] В заключение, хотя мутантные мутанты возникают в популяции спонтанно, эти данные предполагают, что гипермутация является предпосылкой, как движущей силой, для адаптации к высоким уровням этанола таким образом, что только линии с более высокой частотой мутаций чем частота мутаций дикого типа способна развить высокую толерантность к этанолу (рис. 3В).[…] »

    «[…] Рост гипермутации во время адаптации к почти смертельному этанольному стрессу связан с идеей отбора второго порядка, о чем свидетельствует скорость роста и время задержки, измеренные для коллекции мутантных мутантов при 5% этанольном стрессе (рис. 1; рисунок 1 — приложение к рисунку 3), и этому может способствовать более широкое и менее зависимое от вредных мутаций распределение эффектов приспособленности в стрессовой среде (Hietpas, et al. , 2013 Evolution). […] »

    Обратите внимание, что приведенный выше аргумент предполагает, что эффекты приспособленности обусловлены вторичными мутациями, поэтому открытие авторами потенциальных прямых эффектов мутаций, генерирующих мутаторы (например,грамм. mutS на рис. 1 — дополнение к рисунку 4) не изменяется. Однако в нынешней формулировке потенциальная прямая выгода от этих мутаций не кажется основным посланием, которое они пытаются оказать. Также неясно, почему авторы заявляют, что «… эти прямые эффекты… могут не напрямую влиять на ранний выбор гипермутации, но могут стать решающими в плане ее более низкой стоимости на более поздних стадиях».

    Мы признаем, что возможные прямые эффекты мутаций-мутаторов могут играть роль, даже несмотря на то, что наши данные (рис. 1) решительно поддерживают идею о том, что частота мутаторов увеличивается за счет отбора второго порядка связанных полезных мутаций.Прямые эффекты могут влиять на то, какая конкретная мутация-мутатор в конечном итоге будет распространяться, но для начальной адаптации эффект гипермутации (с ее косвенными эффектами связанных полезных мутаций) явно намного важнее, чем (различные) небольшие прямые эффекты конкретных мутаций-мутаторов. . Чтобы прояснить эту часть, мы соответствующим образом изменили раздел «Обсуждение» рукописи:

    «[…] Следовательно, эти прямые эффекты, которые обычно являются результатом нарушений одной конкретной системы или даже одного конкретного гена, могут повлиять на то, какие конкретные мутации-мутаторы в конечном итоге распространятся, но будут иметь лишь ограниченное влияние на первоначальный выбор гипермутация по сравнению с прямым эффектом связанных полезных мутаций.Однако на более поздних стадиях эти прямые эффекты, возможно, повлияют на судьбу гипермутаторов, снизив стоимость длительного накопления генетической нагрузки. […] »

    https://doi.org/10.7554/eLife.22939.031

    Настройка Tomcat для высокой пропускной способности и быстрого сбоя системы | от Netflix Technology Blog

    от Sumit Tandon

    Netflix предлагает ряд сервисов среднего уровня с высокой пропускной способностью и низкой задержкой. В одном из этих сервисов было замечено, что в случае огромного всплеска трафика за очень короткий промежуток времени машинам не хватало ЦП, и они перестали отвечать.Это приведет к плохому восприятию клиентов этой службы. Они получат сочетание таймаутов чтения и подключения. Таймауты чтения могут быть особенно плохими, если таймауты чтения установлены очень большими. Клиентские машины будут долго ждать ответа от сервера. В случае SOA это может привести к волновому эффекту, поскольку клиенты этих клиентов также начнут получать тайм-ауты чтения, и все службы могут замедлиться. В нормальных условиях на машинах было достаточно свободного ЦП, и обслуживание не требовало интенсивного использования ЦП.Итак, почему это происходит? Чтобы понять это, давайте сначала посмотрим на стек высокого уровня для этой службы. Поток запроса будет выглядеть так.

    При моделировании всплеска трафика в тестовой среде было обнаружено, что причиной нехватки процессора была неправильная конфигурация apache и tomcat. При внезапном увеличении трафика несколько воркеров apache оказались занятыми, и очень большое количество потоков tomcat также стали занятыми. Произошел огромный скачок в системном процессоре, поскольку ни один из потоков не мог выполнять какую-либо значимую работу, так как большую часть времени процессор будет переключать контекст.

    Поскольку это была служба среднего уровня, использование apache было невысоким. Итак, вместо настройки двух систем (apache и tomcat) было решено упростить стек и избавиться от apache. Чтобы понять, почему слишком много потоков tomcat занято, давайте разберемся с потоковой моделью tomcat.

    Tomcat имеет приемную нить для приема соединений. Кроме того, существует пул рабочих потоков, которые выполняют реальную работу. Поток высокого уровня для входящего запроса:

    1. TCP-рукопожатие между ОС и клиентом для установления соединения.В зависимости от реализации ОС может быть одна очередь для удержания соединений или может быть несколько очередей. В случае нескольких очередей одна удерживает незавершенные соединения, которые еще не завершили рукопожатие tcp. После завершения соединения перемещаются в очередь завершенных соединений для использования приложением. Параметр acceptCount в конфигурации tomcat используется для управления размером этих очередей.
    2. Поток-приемник Tomcat принимает подключения из очереди завершенных подключений
    3. Проверяет, доступен ли рабочий поток в пуле свободных потоков.Если нет, создает рабочий поток, если количество активных потоков
    4. Как только свободный рабочий поток будет найден, поток-приемник передает ему соединение и возвращается к прослушиванию новых подключений
    5. Рабочий поток выполняет фактическую работу по чтению ввода из соединения, обработке запрос и отправка ответа клиенту. Если соединение не поддерживалось, оно закрывает соединение и помещается в пул свободных потоков.Для поддержания активности соединения ожидает, когда в соединении будут доступны дополнительные данные. В случае, если данные не становятся доступными до keepAliveTimeout, закрывает соединение и становится доступным в пуле свободных потоков.

    В случае, если количество потоков tomcat и значения acceptCount установлены слишком большими, внезапное увеличение трафика заполнит очереди ОС и сделает все рабочие потоки занятыми. Когда на машины отправляется больше запросов, чем может быть обработано системой, такая «постановка в очередь» запросов неизбежна и приведет к увеличению числа загруженных потоков, что в конечном итоге приведет к нехватке ЦП.Следовательно, суть решения состоит в том, чтобы избежать слишком большого количества запросов в очереди в нескольких точках (потоки ОС и tomcat) и быстро выйти из строя (вернуть статус http 503), как только будет достигнута максимальная емкость приложения. Вот рекомендация, как это сделать на практике:

    Оцените количество потоков, которые, как ожидается, будут заняты при пиковой нагрузке. Если сервер отвечает на запрос через 5 мс в среднем, то один поток может выполнять не более 200 запросов в секунду (rps). Если машина оснащена четырехъядерным процессором, она может делать до 800 оборотов в секунду.Теперь предположим, что 4 запроса (поскольку предполагается, что машина является четырехъядерным) поступают параллельно и попадают в машину. Это сделает занятыми 4 рабочих потока. Следующие 5 мс все эти потоки будут заняты. Общее число оборотов в секунду для системы равно максимальному значению 800, поэтому в следующие 5 мс придут еще 4 запроса и займут еще 4 потока. Последующие запросы заберут один из уже занятых потоков, который стал свободным. Таким образом, в среднем не должно быть более 8 потоков, занятых при 800 об / с.На практике поведение будет немного другим, потому что все системные ресурсы, такие как процессор, будут совместно использоваться. Следовательно, следует поэкспериментировать с общей пропускной способностью, которую может поддерживать система, и произвести расчет ожидаемого числа занятых потоков. Это обеспечит базовую линию для количества потоков, необходимых для поддержания пиковой нагрузки. Чтобы обеспечить некоторый буфер, позволяет более чем утроить необходимое максимальное количество потоков до 30. Этот буфер является произвольным и может быть дополнительно настроен при необходимости. В наших экспериментах мы использовали буфер чуть более чем в 3 раза, и он работал хорошо.

    Отслеживайте количество активных одновременных запросов в памяти и используйте их для быстрого сбоя. Если количество одновременных запросов близко к предполагаемому количеству активных потоков (8 в нашем примере), тогда верните код состояния http 503. Это предотвратит занятость слишком большого количества рабочих потоков, потому что при достижении максимальной пропускной способности любые дополнительные потоки, которые станут активными будет выполнять очень легкую работу по возврату 503, а затем будет доступен для дальнейшей обработки.

    Параметр acceptCount для tomcat определяет длину очередей на уровне ОС для выполнения операций установления связи tcp (подробности зависят от ОС).Важно настроить этот параметр, иначе могут возникнуть проблемы с установкой подключений к машине, или это может привести к чрезмерному выстраиванию в очередь подключений в очередях ОС, что приведет к тайм-аутам чтения. Детали реализации обработки неполных и полных соединений различаются в зависимости от ОС. Может быть одна очередь подключений или несколько очередей для неполных и полных подключений (подробности см. В разделе «Ссылки»). Итак, хороший способ настроить параметр acceptCount — начать с небольшого значения и продолжать увеличивать его, пока не будут удалены ошибки подключения.

    Слишком большое значение acceptCount означает, что входящие запросы могут быть приняты на уровне ОС. Однако, если входящий rps превышает то, что машина может обработать, все рабочие потоки в конечном итоге станут занятыми, и тогда поток-приемник будет ждать, пока рабочий поток станет свободным. В очередях ОС будет накапливаться больше запросов, поскольку поток-приемник будет потреблять их только тогда, когда рабочий поток станет доступным. В худшем случае эти запросы будут отключены во время ожидания в очередях ОС, но все равно будут обрабатываться сервером после того, как они будут выбраны потоком-приемником tomcat.Это полная трата ресурсов обработки, поскольку клиент никогда не получит никакого ответа.

    Если значение acceptCount слишком мало, то в случае высоких оборотов в секунду не будет достаточно места для ОС, чтобы принять соединения и сделать его доступным для принимающего потока. В этом случае ошибки тайм-аута подключения будут возвращены клиенту на уровень ниже, чем будет достигнута фактическая пропускная способность для сервера.

    Поэтому поэкспериментируйте, начав с небольшого значения, например 10 для acceptCount, и продолжайте увеличивать его, пока не исчезнут ошибки соединения с сервера.

    При выполнении обоих вышеуказанных изменений, даже если все рабочие потоки станут заняты в худшем случае, серверы не будут испытывать нехватку ЦП и смогут выполнять как можно больше работы (максимальная пропускная способность).

    Как объяснено выше, каждое входящее соединение в конечном итоге обрабатывается для рабочего потока tomcat. Если http keep alive включен, рабочий поток будет продолжать прослушивать соединение и не будет доступен в пуле свободных потоков. Таким образом, если клиенты не умеют закрывать соединение, когда оно не используется активно, на сервере очень легко могут закончиться рабочие потоки.Если включено сохранение активности, необходимо определить размер серверной фермы с учетом этого ограничения.

    В качестве альтернативы, если функция keep alive выключена, не нужно беспокоиться о проблеме неактивных соединений с использованием рабочих потоков. Однако в этом случае за каждый звонок нужно платить за открытие и закрытие соединения. Кроме того, это также создаст множество сокетов в состоянии TIME_WAIT, что может оказать давление на серверы.

    Лучше всего выбрать вариант на основе вариантов использования приложения и протестировать производительность путем проведения экспериментов.

    Результаты

    Пропускная способность: обратите внимание на падение после длительного периода трафика, превышающего тот, который может обслуживать сервер.

    Было проведено несколько экспериментов с разными конфигурациями. Результаты показаны здесь. Темно-синяя линия — это исходная конфигурация с apache и tomcat. Все остальные — разные конфигурации для стека только с tomcat

    Занят Apache WorkersIdle CPU

    Обратите внимание, что исходная конфигурация была настолько загружена, что не могла даже публиковать статистику для простаивающего процессора на постоянной основе.Статистика публиковалась (оценивалась в 0) для базовой конфигурации с перерывами, как показано в красных кружках.

    Средняя задержка сервера для обработки запроса.

    Можно достичь тех же результатов, настроив комбинацию apache и tomcat для совместной работы. Однако, поскольку в нашем сервисе не было большого использования apache, мы обнаружили, что вышеуказанная модель проще с одной движущейся частью. Лучше всего делать выбор, сочетая понимание системы и использование экспериментов и тестирования в реальной среде для проверки гипотезы.

    1. https://books.google.com/books/about/UNIX_Network_Programming.html?id=ptSC4LpwGA0C&source=kp_cover&hl=en
    2. http://www.sean.de/Solaris/soltune.html
    3. https: /tomcat.apache.org/tomcat-7.0-doc/config/http.html
    4. http://grepcode.com/project/repository.springsource.com/org.apache.coyote/com.springsource.org.apache. coyote /

    Я хотел бы поблагодарить Мохана Дорайсвами за его предложения в этой работе.

    Настройка скорости

    Настройка скорости
    текст
    текст
    текст

    Добро пожаловать в SpeedTuning USA!
    Нет достаточно мощности? Проблемы с разгоном, буксировка, плохой расход топлива? …

    • Сила Чип — простой и недорогой способ улучшите производительность ваших двигателей и КПД, для газа и дизельные двигатели! …
    • Теперь доступны новые Power Plus Чип для больших форсунок!
    • В Блок питания — лучший тюнинг-комплект дизеля из Германии: больше крутящего момента — больше HP, повышенное ускорение с улучшенным расход топлива! …
    • Теперь также доступны блоки питания и чипы питания для автомобилей США и грузовики! Спросите о новом Duramax Чип питания для всех Chevy Duramax 6.Дизельные двигатели 6 л, плюс 100 л.с. и крутящий момент за рулем 200 фунт-фут!
    текст
    текст

    Сайт находится под строительство, но скоро будет закончено!

    Быстрая настройка, аналоговые режекторные фильтры

    Быстрая настройка, аналоговые режекторные фильтры
    Военно-морской флот SBIR FY2008.1
    Sol №: Navy SBIR FY2008.1
    Номер темы: N08-083
    Название темы: Быстрая настройка, аналоговые режекторные фильтры
    Номер предложения: N081-083-0512
    Фирма: Out of the Fog Research LLC
    Стюарт Берковиц
    2258 20-я авеню,
    Сан-Франциско, Калифорния 94116
    Контактный телефон: Стюарт Берковиц
    Телефон: (415) 505-3827
    Веб-сайт: www.outofthefogresearch.com
    Аннотация: В этой программе мы разработаем концепцию микросекундных настроечных пазов, отвечающую требованиям приложения к глубине паза и вносимым потерям. Мы определим полный набор целевых спецификаций для настраиваемых выемок, которые соответствуют текущим или будущим эксплуатационным потребностям. Мы продемонстрируем с помощью моделирования, что эту технологию можно использовать для перестраиваемых узкополосных режекторных фильтров микросекундной длительности с минимальными вносимыми потерями.Затем мы спроектируем и оптимизируем резонатор, чтобы минимизировать размер, максимизировать добротность (следовательно, минимизировать потери в полосе пропускания) и диапазон настройки, а также оптимизировать точность на этапе II. Затем мы обозначим технические риски для Фазы II. Успешное завершение этой работы создаст прочную основу для создания и тестирования прототипа настраиваемого фильтра на этапе II.
    Льготы: Такие фильтры должны применяться в цифровых передатчиках там, где происходит преобразование цифрового сигнала в аналоговый, при условии, что они обладают достаточными характеристиками обработки мощности, чтобы иметь низкие потери.Они также могут быть применимы в коммерческих системах связи, где спектральная плотность высока, так что активное подавление соседних каналов имеет решающее значение для полезности данного канала.
    Возврат

    Переключение на скорости

    С целью ускорения процессов плазменной обработки полупроводников, Advanced Energy (AE) еще в 2010 году включила радикальную программу развития, чтобы разработать и запустить самую быструю в отрасли сеть настройки ВЧ-мощности.В 2020 году мы запустили нашу новейшую, еще более быструю, твердотельную сеть настройки с временем отклика менее миллисекунды, представив Navigator® II FCi. Благодаря этим вехам мы не только изменили отрасль, разработав самые быстрые сети настройки ВЧ, но и изменили себя, научившись радикально быстрее внедрять инновационные продукты.

    Неустанное стремление полупроводниковой промышленности упаковать все более высокие характеристики в меньшие по размеру корпуса приводит к получению более тонких пленок и меньшей ширины линий.Во многих приложениях это означает очень короткие этапы процесса с временем перехода плазмы быстрее, чем могут реагировать обычные сети настройки на основе вакуумных конденсаторов.

    Мы первыми разработали твердотельную технологию согласования (настройки) ВЧ для процессов полупроводниковой плазмы в 1990-х годах. За последние 20 лет мы поставили более 20 000 радиочастотных систем доставки со встроенными твердотельными согласующими сетями, встроенными в эти системы. Эти инновации удовлетворили критическую потребность отрасли в сверхбыстрой настройке с миллисекундным временем отклика.

    Типичное время настройки традиционной согласующей цепи (синяя линия) и твердотельного согласования (красная линия) на плазменной камере сравнивается на левом графике. Расширенный вид кривой настройки SSM справа показывает, что полная настройка может быть достигнута за миллисекунды по сравнению с сотнями миллисекунд для традиционного согласования.

    Примерно в 2010 году произошло быстрое расширение числа новых приложений, которые могли использовать сверхбыструю настройку за миллисекунды, таких как атомное осаждение слоев (ALD).Также росла потребность в гибкости, чтобы иметь независимые, автономные, твердотельные согласующие сети, а не полностью интегрированные в систему доставки RF. Автономное твердотельное согласование позволило бы расширить ряд инноваций, в которых ВЧ-генератор (-ы) можно было бы более конкретно оптимизировать для общей, часто многочастотной ВЧ-цепи.

    Чтобы удовлетворить растущие потребности клиентов, AE решила быстро выпустить автономный твердотельный согласованный продукт. В то время Юваль Вассерман, который в то время был главным операционным директором AE и в настоящее время является генеральным директором AE, принял смелое решение: «Менее чем за год компания AE разработает полностью новую автономную твердотельную согласующую сетевую платформу.«Как правило, разработка новой технологии с нуля занимает два или более года, что делало это очень высшей целью. Отказавшись от традиционных подходов к разработке продуктов, Юваль объединил своего рода «AE-Skunk Works», который по совпадению использовал подход Lockheed Skunk Work и 14 правил и практик Келли Джонсон, например:

    • # 2: Злобно свести к минимуму команду
    • # 3: Поместите где-нибудь маленькое
    • # 4: Изолировать команду с помощью строго контролируемых мер безопасности
    • # 7: Вовлеките всю команду в общую картину
    • # 8: Вознаграждение за результативность, а не за статус

    AE смелый сдвиг произошел после серьезного отраслевого спада 2009 года, когда любые инвестиции находились под невероятным вниманием, а отрасль в целом склонялась к более постепенным подходам.Несмотря на это, команда AE по производству твердотельных матриц «skunk works» начала работу в 2010 году и быстро разработала технологию и обеспечила первоначальные даты приоритета патентов в течение 2011 года, прежде чем представить продукт клиентам-партнерам на закрытых мероприятиях на SEMICON West 2011.

    Этот коммутатор оказался успешным. После того, как заказчики начали поставки, твердотельный Navigator II FastCap ™ был выпущен на более широкий рынок год спустя на выставке SEMICON West 2012 и установил планку как самая быстрая автономная сеть согласования мощности высокочастотной плазмы.

    Опираясь на успех Navigator II FastCap, мы представили Navigator II FCi в 2020 году. Эта новая, более быстрая сеть твердотельного согласования снова подняла планку скорости согласования сетей RF до субмиллисекундных процессов. Благодаря расширенным диапазонам мощности и импеданса, а также сверхбыстрой скорости поворота Navigator FCi позволяет использовать приложения следующего поколения, такие как Atomic Layer Etch (ALE).

    Программа Navigator II FastCap стала грандиозным поворотом в процессе разработки программы AE и позволила обеспечить твердотельное согласование для удовлетворения насущных потребностей рынка.Заглядывая в будущее, продолжайте наблюдать за AE, поскольку мы продолжаем «переключать его» для удовлетворения быстро развивающихся потребностей наших клиентов. Чтобы узнать больше о наших мыслях о будущем требований к обработке производства полупроводников, обязательно прочтите « Powering Ahead » в Semiconductor Digest .

    Камерные вилки

    FAST — TF Tuned

    Модернизация подвески FAST

    TF Tuned FAST Suspension Обновления и тюнинг являются дополнением к стандартной услуге.Это означает, что ваша вилка получит все, что обычно нравится TFT — новые уплотнения дворников, пена, уплотнительные кольца, масла, изменение размера втулки при необходимости и все остальное, что может понадобиться.

    Затем мы работаем над улучшением вашей подвески, устанавливая внутренние компоненты FAST upgrade.

    * Обратите внимание, что некоторые обновления FAST для вилок FOX могут иметь короткое время выполнения, поэтому позвоните перед бронированием, если у вас есть крайний срок! *

    Модель

    Модельный год

    Цена FAST Upgrade (все цены включают плату за обслуживание)

    RockShox

    Pike Solo Air / Dual Position

    2014+

    £ 165 — Комплект поршня демпфера зарядного устройства

    £ 230 — Модернизация демпфера зарядного устройства с внешней регулировкой высокого / низкого уровня сжатия (только для повышающего зарядного устройства , )

    Lyrik Solo Air, 2-ступенчатая, U-образная катушка

    2015+

    £ 165 — Поршни FAST сжатия и отбоя / индивидуальные клапаны

    £ 230 — Модернизация демпфера зарядного устройства с внешней регулировкой высокого / низкого сжатия

    BoXXer (с демпфером зарядного устройства)

    2014+

    £ 230 — Модернизация демпфера зарядного устройства с внешней регулировкой сжатия Hi / Lo

    Фокс

    36 мм CTD / FLOAT / TALAS (26 «160/180 мм)

    С

    по 2014 год

    £ 365 — Открытый картридж FAST CO3

    .

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    Back to Top